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周永灿
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- 所属机构:海南大学
- 所在地区:海南省 海口市
- 研究方向:农业科学
- 发文基金:国家自然科学基金
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- 王世锋

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- 陈雪芬郭伟良周永灿
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- 鄢庆枇苏永全王军周永灿
- 关键词:大黄鱼溶藻弧菌脂多糖免疫保护
- 重组鞭毛蛋白在制备水产动物抗哈维氏弧菌药物中的应用
- 本发明涉及一种重组鞭毛蛋白在制备水产动物抗哈维氏弧菌药物中的应用;属于生物工程和免疫学技术领域,所述重组鞭毛蛋白的氨基酸序列如SEQ ID No.2所示;所述重组鞭毛蛋白的基因的核苷酸序列如SEQ ID No.1所示;所...
- 孙云王君芳周永灿曹贞洁
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- 罗非鱼无乳链球菌β-溶血/细胞天然抑制剂筛选
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- 2019年
- 为了制备高效的卵形鲳鲹hepcidin-5蛋白多克隆抗体和对其特异性进行鉴定,本研究通过PCR扩增的方法获得了卵形鲳鲹抗菌肽hepcidin-5(Tro H5)的成熟肽cDNA序列,并构建了原核表达载体pET-32a(+)/TroH5,然后将其转入大肠杆菌表达菌株BL21(DE3)中进行原核表达.经IPTG诱导,成功表达了相对分子质量约为35kDa的融合重组蛋白.经不同诱导条件的优化,最终确定在IPTG终浓度为0. 1mmol/L和温度为20℃时,其表达量最大.可溶性分析表明:该融合蛋白主要存在于上清中.经镍柱亲和层析纯化获得了纯度较高的融合蛋白,然后以免疫小鼠制备多克隆抗体,经ELISA法检测,其效价达到1∶105.蛋白免疫印迹(Western blot)检测表明:所制备的多克隆抗体特异性强.本研究为进一步探究hepcidin-5的生物学功能奠定了基础.
- 何明旺项雅婧孙云曹贞洁周永灿
- 关键词:卵形鲳鲹原核表达多克隆抗体
- 1株海南土著光合细菌Rhodopseudomonas sp的分离鉴定及其净水效果分析
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- 罗非鱼戴维斯黄杆菌实时定量PCR检测方法的建立及应用
- 2024年
- 戴维斯黄杆菌(Flavobacterium davisii)是柱形病病原之一,严重影响罗非鱼养殖产业.为了实现对其快速和准确的诊断,本研究以TonB基因为靶基因构建了重组质粒,建立了戴维斯黄杆菌的实时定量PCR检测方法,并将其应用到罗非鱼感染戴维斯黄杆菌后的载菌量测定研究.结果表明:特异性引物TonB-F/R与不同基因型的黄杆菌及罗非鱼其他常见病原无交叉反应,所建立的绝对定量检测方法是常规PCR检测方法灵敏度的100倍,其重复性和稳定性良好;罗非鱼感染戴维斯黄杆菌后其鳃组织载菌量显著高于其他组织,符合该疾病的侵染特点.综上所述,该实时定量PCR检测方法具有快速、高灵敏度和强特异性等优势,可准确评估戴维斯黄杆菌的感染程度,对柱形病的预防具有重要价值.
- 叶小灵许莹萱王世锋王世锋郭伟良周永灿
- 关键词:罗非鱼实时定量PCR检测
- 一株高效水质改良菌的筛选鉴定及其作用效果研究被引量:5
- 2014年
- 自海南水产养殖水体中分离筛选获得1株具有高效改良水质功能的益生菌株Bt-01,经菌落形态和生理生化分析及16SrDNA鉴定,该菌株为苏云金芽孢杆菌。采用腹腔注射法检测其安全性,测定该菌株对静养水体化学需氧量、亚硝酸盐和氨氮的相对移除效率。试验结果表明,腹腔注射4.1×108cfu/mL的Bt-01菌悬液200μL,养殖的尼罗罗非鱼30d成活率为100%;Bt-01在12h内对亚硝酸盐相对移除率最高可达98.03%,31h内对氨氮的相对移除率为59.10%,23.5h内对化学需氧量的相对移除率最高可达51.06%。该菌株具有显著改良水产养殖水质作用和良好应用前景。
- 徐霞旭周永灿郑兴朱经海谢珍玉王世锋郭伟良
- 关键词:苏云金芽孢杆菌化学需氧量亚硝酸盐氨氮
- 一种致病哈氏弧菌特异性分子遗传标记及其应用
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- 细胞骨架蛋白actin参与石斑鱼虹彩病毒SGIV释放被引量:1
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- 在病毒感染宿主细胞过程中,病毒利用宿主细胞骨架如微丝、微管等完成进入、运输和释放等过程。为分离鉴定石斑鱼虹彩病毒SGIV囊膜蛋白,实验应用去污剂溶解病毒囊膜,然后结合1-D-SDS-PAGE切胶分离和LC-MS/MS质谱鉴定两种方法进行检测,除了病毒编码的囊膜蛋白外,还发现7种宿主细胞来源的蛋白,包括细胞骨架微丝肌动蛋白actin等,由此推测这些宿主蛋白是与病毒纯化过程中共纯化获得。鉴于actin在病毒感染中发挥着重要的作用,进一步通过蛋白印迹、免疫电镜实验验证了actin与病毒共纯化,揭示actin是一种来源于宿主细胞并包装到病毒颗粒表面的宿主蛋白,且由于特异性作用黏附于病毒粒子表面,在分离病毒囊膜时与囊膜蛋白共纯化。此外,荧光显微镜观察发现,在病毒感染晚期,细胞变圆,细胞微丝actin蛋白和SGIV病毒共定位于细胞膜,提示actin与病毒释放相关。同时电镜观察也表明,病毒在感染细胞中释放时获得由宿主细胞质膜衍生而来的囊膜,由此推测actin可能在病毒释放时特异性包裹于SGIV病毒表面。研究表明,actin参与石斑鱼虹彩病毒SGIV的释放过程。
- 王著希周胜黄友华王劭雯黄晓红周永灿秦启伟
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