唐宇龙
作品数： 16被引量：70H指数：5
  • 所属机构:湖南农业大学动物科学技术学院
  • 所在地区:湖南省 长沙市
  • 研究方向:农业科学
  • 发文基金:上海市卫生局科技发展基金

相关作者

杨华
作品数：187被引量：669H指数：14
供职机构：上海政法学院
研究主题：结核分枝杆菌 结核 分枝杆菌 全科医学 血清学检测
胡忠义
作品数：304被引量：1,107H指数：18
供职机构：上海市肺科医院
研究主题：结核分枝杆菌 分枝杆菌 结核病 结核 耐药性
刘湘新
作品数：105被引量：784H指数：14
供职机构：湖南农业大学
研究主题：儿茶素 吡喹酮脂质体 药物动力学 在家 疗效试验
方维焕
作品数：279被引量：1,051H指数：17
供职机构：浙江大学
研究主题：猪瘟病毒 猪链球菌2型 副溶血弧菌 单增李斯特菌 减毒沙门氏菌
丁元生
作品数：32被引量：144H指数：8
供职机构：上海市肺科医院
研究主题：结核分枝杆菌 分枝杆菌 知母皂甙元 克隆表达 微生物敏感性试验
作品列表
结核分枝杆菌CFP-10/ESAT-6融合蛋白模拟抗原表位的筛选被引量：7
2008年
目的探讨噬菌体展示随机肽库技术在结核分枝杆菌培养滤过蛋白10（CFP-10）／早期分泌抗原靶点6（ESAT-6）融合蛋白（CE融合蛋白）模拟抗原表位筛选中的应用。方法以抗CE融合蛋白多克隆抗体为靶分子，对随机噬菌体7肽库进行筛选，经3轮生物淘选后，随机选取18个单噬菌体进行测序分析。采用双抗体夹心和竞争ELISA方法对测序后噬菌体进行阳性克隆及其活性鉴定。采用间接ELISA方法，选取阳性单噬菌体与CE融合蛋白分别对20份活动性肺结核患者和10份有卡介苗接种史健康人的血清标本抗体进行检测。结果经过3轮生物淘选，能与靶分子特异性结合的噬菌体得到了明显富集。18个单噬菌体测序共获得9种序列，其中单噬菌体5、6、18的氨基酸序列均包含Trp-Asp-Ala-Thr（WDAT）保守序列，该序列与ESAT-6第58-61位氨基酸的序列一致。9种序列中各取1个单噬菌体经双抗体夹心和竞争ELISA检测，有7个单噬菌体（1、5、6、10、13、14、18，S／N值依次为9.2、9.7、9.4、8.9、9.6、9.9、9.0）确定为具有免疫活性的阳性克隆。选取含有WDAT保守序列的阳性单噬菌体5与CE融合蛋白分别对2种血清标本抗体进行间接ELISA检测结果显示，单噬菌体5对2种血清标本抗体检测的吸光度值均高于CE融合蛋白（分别为0．931±0．298 vs 0．317±0．157、0．496±0．073 vs 0．118±0．026，均P〈0．05）；单噬菌体5对活动性肺结核患者血清标本抗体的检出率（95％，19／20）明显高于CE融合蛋白（60％，12／20），而对有卡介苗接种史健康人血清标本抗体的检出率（9／10）低于CE融合蛋白（10／10）。结论利用噬菌体展示随机肽库技术成功筛选出7个CE融合蛋白的模拟抗原表位，并获得了定位于ESAT-6第58-61位氨基酸序列的CE融合蛋白的1个线性B细胞抗原表位，提高了ELISA检测的敏感性，为进一步研究CE融合蛋白的�
周新刚杨华段开红唐宇龙马占忠胡忠义
关键词：重组融合蛋白质类表位肽库
检测结核分枝杆菌CFP10-ESAT6分泌蛋白的方法建立和应用研究
目前在人类和动物的传染病中，结核病仍是危害人畜健康的最严重的传染性疾病。结核病的诊断技术主要有细菌学，免疫学和分子生物学三种诊断方法，其中细菌学检查仍然是结核病实验室诊断的金标准。但该法涂片阳性率低，细菌培养费时间;分子...
唐宇龙
关键词：结核分枝杆菌原核表达质粒ELISA检测法
文献传递
禽流感病毒NP基因的酵母双杂交饵载体表达及自激活检测
2007年
目的构建H5N1亚型禽流感病毒NP基因的酵母双杂交诱饵载体,验证其在酵母中的表达并检测其自激活作用。方法以PCR法从pGEMT/H5NP扩增NP基因编码区序列,将其定向克隆到PGBKT7载体,经测序鉴定后,PEG/Li-Ac法转化酵母菌株AH109,用表型筛选法及颜色筛选法检测其自激活作用同时Westernblot验证诱饵蛋白的表达。结果获得NP编码区基因,并成功构建酵母双杂交系统中的诱饵载体pGBKT7-NP,对宿主细胞酵母菌株AH109无毒性和自激活作用,并能在酵母细胞中稳定表达。结论诱饵载体pGBKT7-NP可用于GAL4酵母双杂交系统钓取与禽流感病毒核蛋白相互作用的蛋白。
柳斌李文平屈孝初唐宇龙张传福周晓巍黄培堂
关键词：NP基因诱饵载体酵母双杂交自激活作用
猪链球菌2型溶血素基因缺失株构建及其生物学特性分析被引量：5
2012年
猪链球菌溶血素(SLY)是较早确定的猪链球菌毒力因子之一,具有细胞毒性,在猪链球菌致病过程中发挥重要作用。利用同源重组技术成功构建了猪链球菌2型(SS2)sly基因缺失的突变株SS2-Δsly,缺失株的体外溶血活性消失,对小鼠脑血管内皮细胞的细胞毒性显著低于亲本菌株(P<0.01),但不影响猪链球菌2型在巨噬细胞中的存活。该菌株可以用于研究SS2溶血素在感染细胞中的作用机制。
吴炜张晓燕唐宇龙方丽华方维焕
关键词：猪链球菌2型溶血性细胞毒性
猪链球菌2型Sortases、CcpA和SodA功能与致病力研究
猪链球菌2型(SS2)是一种重要的人兽共患致病菌,可引起仔猪的脑膜炎、败血症、关节炎、心内膜炎、肺炎以及断奶仔猪的猝死,并可感染人。在已知的33个血清型中,血清2型的致病力最强,流行范围最广。1998年和2005年,我国...
唐宇龙
关键词：猪链球菌2型毒力
文献传递
猪链球菌2型CcpA介导细菌的碳水化合物代谢和致病力
本试验旨在阐明SS2的分解产物抑制蛋白A(CcpA)是否介导碳水化合物代谢抑制的调节以及对体外培养细胞和小鼠的致病力。本研究表明：(1) SS2中的CcpA参与细菌对糖代谢的调节，这种调节作用在不同细菌中有所不同，如在肺...
唐宇龙张晓燕吴炜鲁仲龑方维焕
关键词：猪链球菌2型碳水化合物代谢抑制致病力
猪链球菌2型Sortases、CcpA和SodA功能与致病能力研究
猪链球菌2型(SS2)是一种重要的人兽共患致病菌，可引起仔猪的脑膜炎、败血症、关节炎、心内膜炎、肺炎以及断奶仔猪的猝死，并可感染人。在已知的33个血清型中，血清2型的致病力最强，流行范围最广。1998年和2005年，我国...
唐宇龙
关键词：猪链球菌2型
结核分枝杆菌CFP10-ESAT-6融合基因的表达及其多克隆抗体的制备被引量：13
2006年
以结核分枝杆菌标准株H37Rv的基因组DNA为模板,经重叠PCR扩增获得CFP10-ESAT-6融合基因片段,克隆于pET21a表达载体中,获得了重组质粒pET21a-CFP10-ESAT-6,将其转化大肠杆菌BL21细胞,经IPTG诱导表达,得到了25 ku的目的蛋白。表达产物经纯化和定量分析后免疫新西兰大白兔,收集兔血清进行抗体ELISA检测。结果显示,成功构建了CFP10-ESAT-6融合基因的原核表达质粒,获得了CFP10-ESAT-6融合蛋白,以此蛋白免疫动物可产生高效价的抗体。
唐宇龙刘湘新杨华丁元生胡忠义
关键词：结核分枝杆菌多克隆抗体
检测结核分枝杆菌CFP10-ESAT-6分泌蛋白双抗体夹心ELISA的建立被引量：2
2008年
用重组蛋白CFP10-ESAT-6免疫新西兰大白兔,通过ELISA方法检测抗体效价水平;高效价抗体用DEAE-32阴离子交换柱纯化后,一部分抗体为包被所用,另一部分抗体用辣根过氧化物酶标记后,作为检测用,建立双抗体夹心法,进行了初步鉴定,确定该方法的可行性。结果表明:抗CFP10-ESAT-6多克隆抗体的效价在1∶16000稀释后D450值基本都达到1.0左右,在纯化、酶标记后,分别以1∶5000为包被工作浓度,1∶3000为酶标工作浓度时,能较高特异性检测结核杆菌培养上清分泌的CFP10-ESAT-6抗原。
唐宇龙刘湘新杨华柳彬胡忠义
关键词：结核分枝杆菌ELISA
结核分枝杆菌分泌蛋白MPT64的克隆表达和纯化被引量：1
2007年
目的构建结核分枝杆菌分泌蛋白MPT64原核表达载体并进行表达和纯化。方法以结核分枝杆菌标准株H37Rv基因组DNA为模板扩增出MPT64基因,产物经纯化回收后与载体pMD-T连接转化,酶切鉴定,克隆到pET21a原核表达载体,测序鉴定插入序列完全正确者转化大肠杆菌BL21,诱导表达MPT64融合蛋白,利用亲和层析纯化表达产物,SDS-PAGE电泳进行鉴定。结果成功构建MPT64表达载体,SDS-PAGE电泳鉴定成功表达MPT64蛋白。并以此蛋白进行结核抗体的检测,其特异性和敏感性分别为96%和43%。结论成功表达结核分枝杆菌MPT64蛋白,并进行特异性和敏感性的检测,证明重组的MPT64蛋白有希望成为结核病血清学诊断的组合抗原的候选者之一。
唐宇龙丁元生杨华毕爱笑秦莲花郑瑞娟胡忠义
关键词：结核分枝杆菌MPT64克隆
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