方三华
作品数: 69被引量:97H指数:6
  • 所属机构:浙江大学
  • 所在地区:浙江省 杭州市
  • 研究方向:医药卫生
  • 发文基金:国家自然科学基金

相关作者

魏尔清
作品数:258被引量:689H指数:13
供职机构:浙江大学医学院
研究主题:小鼠 脑缺血 局灶性脑缺血 ONO-1078 半胱氨酰白三烯受体
张纬萍
作品数:116被引量:233H指数:9
供职机构:浙江大学
研究主题:小鼠 脑缺血 白三烯拮抗剂 白三烯 半胱氨酰白三烯受体
卢韵碧
作品数:79被引量:119H指数:5
供职机构:浙江大学
研究主题:白三烯 半胱氨酰白三烯受体 小胶质细胞 半胱氨酰白三烯 半胱氨酸
尹伟
作品数:39被引量:58H指数:5
供职机构:浙江大学
研究主题:双光子 血流速度 激光共聚焦 模块化 共享平台
刘双双
作品数:24被引量:65H指数:5
供职机构:浙江大学医学院
研究主题:大型仪器 共享平台 双光子 血流速度 高校大型仪器
组蛋白去乙酰基酶抑制剂NL101对大鼠神经元的作用
2014年
目的:观察组蛋白去乙酰基酶新抑制剂NL101对同型半胱氨酸(HCA)诱导大鼠神经元毒性损伤的保护作用,以及对正常神经元的损伤作用.方法:使用HCA(5 mmol/L)诱导大鼠皮层混合细胞及原代神经元的损伤,观察不同浓度NL101对损伤的影响,检测神经元及胶质细胞的活性、数量、形态以及坏死的变化,并观察NL101对正常神经元的作用;以同类药SAHA(suberoylanilide hydroxamic acid)作为对照.结果:0.001 ~ 10 μmol/L的NL101对HCA诱导的皮层混合细胞数量减少没有明显影响;但1、10 μmol/L的NL101可明显减少细胞坏死(P<0.05);1μmol/L的NL101可增加神经元数量.1、10μmol/L的NL101可明显降低原代神经元活性(均P <0.05);但0.01 ~ 10 μmol/L的NL101可显著减轻HCA诱导的神经元活性降低(均P<0.05);1、10 μmol/L的NL101可减少HCA引起的神经元坏死(均P <0.05).NL101的作用与SAHA大致相当.结论:NL101对HCA诱导的神经元损伤有保护作用,高浓度NL101对神经元有明显的毒性作用,与经典的SAHA作用相似.
王晓蓉张霞燕徐栋敏余舒莹方三华卢韵碧张纬萍魏尔清
关键词:神经元药物作用高半胱氨酸药理学组蛋白脱乙酰基酶类
水通道蛋白4基因敲除对博莱霉素诱导小鼠肺纤维化的影响被引量:2
2014年
目的:评价水通道蛋白4(AQP4)在博莱霉素诱导的小鼠肺纤维化中的作用.方法:采用博莱霉素3 mg/kg气管内注射诱导AQP4基因敲除(AQP4-/-)小鼠发生肺纤维化,以野生型小鼠为对照,造模后第3、7、14、28天处死动物,检测肺系数、血清转化生长因子-β1 (TGF-β1)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平和肺组织羟脯氨酸含量,作肺组织病理切片行HE染色和Masson染色观察肺部炎症及纤维化程度.结果:造模第14天,野生型小鼠肺系数增高为野生型对照小鼠的1.9倍(12.69±6.05与6.80±0.82,q=4.204,P<0.05);AQP4-/-小鼠肺系数增高为AQP4-/-对照小鼠的2.3倍(14.05±5.82与6.05±0.58,q=5.172,P<0.01),但与野生型小鼠比较,AQP4基因敲除对博莱霉素诱导的小鼠肺纤维化过程中肺系数增高无明显影响(P>0.05).小鼠肺组织羟脯氨酸含量随造模时间逐步增加,造模第28天,野生型小鼠肺组织羟脯氨酸含量增加为对照的1.55倍[(0.85±0.22) μg/mg与(0.55±0.14) μg/mg,q=4.313,P<0.05];AQP4-/-小鼠肺组织羟脯氨酸含量增加为对照的1.4倍[(0.84±0.13) μg/mg与(0.60±0.14)μg/mg,q=4.595,P<0.05],但与野生型小鼠比较,AQP4基因敲除对小鼠肺纤维化过程中肺组织羟脯氨酸含量增加无明显影响(P>0.05).造模后,小鼠血清TGF-β1、TNF-α水平有增加趋势,但这两个指标在野生型和AQP4-/-小鼠间差别无统计学意义(均P>0.05).肺组织病理学检查结果表明AQP4基因敲除对博莱霉素诱导的小鼠肺部炎症和纤维化无明显影响.结论:AQP4基因敲除对博莱霉素诱导的小鼠肺纤维化未产生明显影响.
厉旭云徐小方黄静刘志娴余舒莹方三华张纬萍魏尔清卢韵碧
关键词:水孔蛋白质类博莱霉素肺纤维化
白三烯D4在体外对A549肺泡上皮细胞增殖及迁移的影响
2014年
目的:观察炎症介质白三烯D4(LTD4)对人肺泡上皮细胞株A549细胞增殖及迁移的影响.方法:以免疫荧光染色鉴定A549细胞上半胱氨酰白三烯(CysLT)受体的表达;以不同浓度(0.01~100 nmol/L)的CysLT受体激动剂LTD4处理A549细胞不同时间后,以MTr还原法检测细胞活性反映细胞增殖,以改良的划痕法观察细胞迁移的变化.结果:A549细胞表达CysLT1受体及CysLT2受体.0.01 ~100 nmol/L LTD4处理A549细胞24 ~72 h,细胞增殖无明显变化(均P>0.05);100nmol/L LTD4处理A549细胞24、48、72 h后,细胞活性分别为不加LTD4处理的A549细胞的(103.00±4.46)%、(107.00±9.45)%、(105.00±9.02)%,差异均无统计学意义(均P>0.05).虽然0.01 ~ 100 nmol/L LTD4处理的第1个24h内A549细胞的修复速率远高于第2个及第3个24h内的细胞修复速率,但同一时间段组间差异无统计学意义(均P>0.05).100 nmol/L的LTD4处理A549细胞24、48、72 h后,细胞迁移率分别为不加LTD4处理的A549细胞的1.15、1.21、1.06倍(均P>0.05),说明LTD4处理后细胞迁移亦无明显变化.结论:在体外给予0.01 ~ 100 nmol/L LTD4处理72 h,不影响A549细胞的增殖及迁移.
韩晓瑜章璐刘志娴黄静张猛方三华张纬萍魏尔清卢韵碧
关键词:白三烯D4药物作用细胞增殖细胞运动药物作用
FK866抗大鼠星形细胞胶质瘤作用及机制
目的 观察尼克酰胺磷酸核糖转移酶(Nampt)抑制剂FK866抗大鼠C6星形细胞胶质瘤的作用及分子机制.方法 MTT法检测细胞活性,流式细胞检测细胞凋亡和细胞周期,细胞计数检测细胞增殖,LC3免疫组化检测细胞自吞噬,We...
张丽媛张纬萍刘丽英徐丽华王峰戚玲玲林卡娜方三华卢韵碧魏尔清
大鼠GPR17基因真核表达载体的构建及其功能鉴定被引量:1
2009年
目的:构建大鼠GPR17(rGPR17)基因的真核表达载体pcDNA3.1(+)-rGPR17,并对其功能进行初步研究。方法:从大鼠脑组织提取总RNA,通过RT-PCR扩增rGPR17 cDNA,与载体pcDNA3.1(+)连接,并转化到大肠杆菌DH5α以获得重组载体pcDNA3.1(+)-rGPR17,以PCR、双酶切和测序鉴定;将重组载体pcDNA3.1(+)-rGPR17通过脂质体转染方法,转染HEK293细胞,RT-PCR、免疫荧光法检测rGPR17的表达,Fluo-4测定激动剂LTD4处理后细胞内钙变化。结果:RT-PCR、双酶切和测序证明,重组的真核表达载体pcDNA3.1(+)-rGPR17构建成功,并在HEK293细胞获得表达,加入外源性激动剂LTD4可诱导细胞内钙的增加。结论:成功构建了rGPR17的真核表达载体pcDNA3.1(+)-rGPR17,并在HEK293细胞功能性表达,为GPR17受体及其拮抗剂的研究提供了基础。
林卡娜方三华蔡蓓蕾王欣欣卢韵碧张纬萍魏尔清
关键词:真核表达载体HEK293细胞细胞内钙
半胱氨酰白三烯受体2多克隆抗体制备及其鉴定被引量:6
2009年
目的:制备半胱氨酰白三烯受体2(CysLT2)多克隆抗体,并鉴定其免疫学特性及应用。方法:以KLH偶联的CysLT2受体多肽免疫家兔制备抗体,用间接ELISA法测定抗体效价,以抗原阻断法测定抗体敏感性及特异性;同时,以新制备的抗体进行Western blot和免疫组化,检测CysLT2受体的组织表达。结果:ELISA测定显示,获得的家兔抗CysLT2受体抗体的效价大于1/1 047 296,对CysLT2受体的特异性强,对CysLT1受体和GPR17基本无交叉反应。Western blot结果显示,CysLT2受体在大鼠、小鼠肾、脑和肺中有较高的表达,其分子量在40 kD左右。免疫组化结果表明,CysLT2受体主要表达在大鼠神经元,也表达在部分星形胶质细胞。结论:制备的CysLT2受体多克隆抗体具有高效价和高特异性,能满足Western blot和免疫组化检测的要求。
陈丽萍赵春贞史文珍戚玲玲卢韵碧张咏梅张丽慧方三华鲍建芳沈建根魏尔清
关键词:受体半胱氨酰白三烯受体多克隆抗体
半胱氨酰白三烯受体2拮抗剂筛选方法的建立及化合物初筛被引量:4
2009年
目的:建立半胱氨酰白三烯受体2(CysLT2受体)拮抗剂筛选的细胞模型及方法,初筛系列合成化合物。方法:选用高表达CysLT2受体的大鼠C6胶质瘤细胞,激动剂LTD4攻击后检测细胞内钙浓度变化,作为CysLT2受体拮抗剂的筛选方法,初步筛选有拮抗剂活性的化合物。采用CysLT1/CysLT2受体非选择性拮抗剂Bay u9773和CysLT2受体选择性拮抗剂AP-100984作为参照。结果:RT-PCR鉴定表明C6细胞高表达CysLT2受体。LTD41μmol/L能显著升高C6细胞内钙,其作用约为阳性对照ATP的37.5%。CysLT2受体拮抗剂抑制LTD4诱导的C6细胞内钙升高,CysLT1受体选择性拮抗剂无抑制作用。化合物中DXW-1、2、13、23、29、30能抑制LTD4诱导的细胞内钙升高。结论:LTD4诱导的C6细胞的钙信号变化可作为CysLT2受体拮抗剂的筛选方法;化合物DXW-1、2、13、23、29、30具有CysLT2受体拮抗活性。
蔡蓓蕾黄雪琴董晓武方三华卢韵碧张纬萍胡永洲魏尔清
关键词:半胱氨酰白三烯受体拮抗剂C6细胞
5-脂氧酶在PC12细胞缺糖低氧损伤时的激活及机制
目的揭示5-脂氧酶(5-LOX)在 PC12细胞缺糖低氧(OGD)时的激活机制及其对细胞损伤的影响。方法在 PC12细胞永久转染 GFP-5-LOX 融合蛋白,观察 OGD、过氧化氢和 p38激活剂对 PC12细胞损伤,...
李成檀张纬萍袁玉梅方三华魏尔清
关键词:5-脂氧酶PC12细胞氧自由基
文献传递
TGF-β1通过上调CysLT1受体对星形胶质细胞增殖和迁移作用的调节
目的 研究转化生长因子β1(TGF-β1)是否通过上调CysLT1受体调节星形胶质细胞增殖和迁移.方法 选用原代培养的大鼠大脑皮层混合培养细胞和单独培养的星形胶质细胞作为细胞模型,细胞划痕方法作为细胞迁移模型,碱性成纤维...
黄雪琴张霞燕方三华卢韵碧张纬萍魏尔清
补肾益智方对老年性痴呆大鼠脑组织海马CA1区锥体细胞的影响被引量:7
2008年
目的:比较补肾益智方与多奈哌齐对老年性痴呆大鼠的治疗作用,观察中药对老年性痴呆大鼠脑组织海马CA1区锥体细胞的影响,探讨中药治疗老年性痴呆的机理。方法:在老年大鼠海马内注射凝聚态Aβ1-42,建立老年性痴呆大鼠模型,并观察药物对该大鼠模型的学习记忆能力、海马CA1区锥体细胞的形态及数量的影响。结果:①补肾益智方、多奈哌齐可以改善老年性痴呆大鼠学习记忆能力。②补肾益智方有减轻缺血对海马CA1区锥体细胞损伤的作用。结论:①中药补肾益智方为治疗老年性痴呆大鼠的有效方;②补肾益智方治疗老年性痴呆大鼠的机理可能与减轻大鼠海马CA1区椎体细胞的损伤有关。
代建峰高建青方三华
关键词:补肾益智方老年性痴呆海马