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草石蚕块茎膨大相关SSH文库构建及分析被引量：2: 2020年; 为挖掘草石蚕块茎膨大的关键基因,研究其分子机理,以快速膨大的草石蚕块茎为测验方,幼嫩块茎为驱动方,构建了草石蚕块茎膨大相关正向SSH文库。从文库中随机挑选阳性单克隆,利用引物Nest-1和Nest-2R对其进行验证,获得400个克隆,插入片段的大小为200~1 500 bp,主要集中在500 bp左右片段。随机挑取65个阳性克隆测序后得到60条ESTs,经过聚类、拼接和冗余去除后获得单拷贝序列33条,其中序列最长的片段为1 037 bp,最短片段为182 bp。通过序列比对,发现33条单拷贝序列中来源于蚕豆萎蔫病毒基因占39.4%,植物基因占36.4%,其它未知基因占24.2%。根据同源基因的来源分析,来源于茄科植物的基因所占比例最大(41.67%)。序列编号20 (632 bp)的EST与clone cSTB39G13 CENP-C mRNA基因有63%同源性;序列编号25 (378 bp)的EST与光敏色素A基因有84%同源性,这两个ESTs可能与草石蚕块茎膨大相关。; 耿广东杨祎张素勤; 关键词：SSH文库表达序列标签

干旱诱导的甘蓝型油菜SSH文库及抗旱相关基因表达的分析被引量：1: 2020年; 从前期构建的干旱诱导的甘蓝型油菜SSH文库中随机挑取了646个阳性克隆,对其进行测序及生物信息学分析。结果表明:通过测序,获得639条高质量EST序列,186条单一序列(重叠群89条,单拷贝序列97条);比对分析发现,166条单一序列有同源序列;乙醛酸和二羧酸代谢、碳代谢、光合中的碳固定、氨基酸的生物合成、氮代谢等在植物抵抗干旱胁迫中发挥着重要的作用;MYB、NAC5、锌指蛋白等转录因子以及苹果酸脱氢酶、核酮糖1,5–二磷酸羧化酶/加氧酶、果糖–1,6–二磷酸醛缩酶、磷酸核酮糖激酶等与光合相关的基因以及P5CS基因、F–box蛋白等参与油菜干旱胁迫应答;单一序列涉及的功能中所占比例较大的是蛋白绑定和催化活性。以抗旱性较强的甘蓝型油菜Holiday为材料,在开花初期进行干旱处理,在处理的第1、3、5、7天(土壤含水量分别为60%、40%、30%、20%)进行叶片取样,采用实时荧光定量PCR,分析基因表达量,发现随机选取的文库中的3个基因(P5CSb、BnSOS2和CAM)在干旱胁迫下表达水平均上调,推测这3个基因在抵御干旱胁迫中发挥了重要作用。; 谢小玉侯爽冉春燕; 关键词：甘蓝型油菜实时荧光定量PCR

SSH文库技术结合DGGE技术筛选饲喂蜡样芽孢杆菌肉鸡脾脏免疫差异基因: 2020年; 为探究蜡样芽孢杆菌PAS38影响肉鸡免疫的分子机制,将60羽7日龄白羽肉鸡分为2组,对照组饲喂基础日粮,试验组饲喂含蜡样芽孢杆菌PAS381×106 cfu/g的基础日粮。于42日龄时从每个组随机取6只肉鸡,解剖采取脾脏并提取总RNA、反转录为cDNA。然后分别采用SSH和ACSSH技术构建脾脏差异基因文库并筛选免疫相关基因。结果显示,SSH筛选得到119个差异基因,其中上调基因63个,下调基因56个,包括9个免疫调节基因;ACSSH筛选得到5个差异基因,都为下调基因,无免疫调节基因。结果表明,饲喂蜡样芽孢杆菌能影响JCHAIN、FTH1、P2RX7等肉鸡脾脏免疫基因的表达;SSH文库明显优于ACSSH文库,ACSSH技术存在一定缺陷。; 李佳骏李建臻李万强王振华王君锐肖丹潘康成杨苗; 关键词：肉鸡蜡样芽孢杆菌差异基因

肉鸡饲喂蜡样芽孢杆菌后SSH文库的构建及免疫相关基因的筛选和鉴定: 为探究蜡样芽孢杆菌PAS38影响肉鸡免疫的分子机制,将60羽7日龄肉鸡分为2组,对照组饲喂基础日粮,试验组饲喂试含蜡样芽孢杆菌PAS38 1×10～6 CFU/g的基础日粮;于42日龄时从每个组随机取6只肉鸡,解剖采取脾...; 李佳骏; 关键词：蜡样芽孢杆菌肉鸡免疫差异基因; 文献传递

龙须菜不同世代间SSH文库差显基因的信息学分析及部分序列的转录验证被引量：1: 2019年; 本研究通过对5个龙须菜(Gracilariopsis lemaneiformis)抑制性消减杂交文库(SSH文库)的1 873条差异显示序列进行聚类和生物信息学分析,共获得118个重叠群以及247条未被聚类进任何重叠群的单条序列。Blast2GO注释分析结果说明龙须菜性别和世代的遗传是由多因子参与、多细胞共同完成的复杂生命活动。选取8条差显序列进行了实时荧光定量PCR分析以验证数据的可靠性,发现尽管SSH文库具有较高的假阳性率,但对斑点杂交结果进行进一步的聚类分析和RT-qPCR验证后可以有效提高实验结果的可信度,并从中发现contig03和7310很可能真正与雌配子体世代相关。; 朱玮芳王莉莉徐涤王洁李凤婷闫昊; 关键词：龙须菜 SSH文库实时荧光定量PCR

干旱胁迫下百脉根SSH文库构建与分析: 百脉根（Lotus corniculatus）作为优良豆科牧草有很大的利用前景，但干旱限制了其推广利用效率。研究植物在干旱胁迫下基因的差异表达是寻找抗旱基因和培育抗旱品种的重要手段。抑制消减杂交是筛选差异表达基因的一种有...; 简忠领; 关键词：百脉根干旱胁迫基因文库抗旱基因; 文献传递

利用RNAi研究棉花SSH文库上调表达EST的功能被引量：1: 2018年; 为了进一步研究棉花体细胞胚胎发生的分子机制,采用RNAi技术,利用棉花生物学国家重点实验室在表达载体p BI121的基础上成功改造的双元表达载体pCRI1210,构建了针对棉花胚性愈伤组织抑制性消减文库中上调表达的4个ESTs干涉载体pCRI210-EST(EST-418、EST-447、EST-496和EST-653)。以从中棉所24中筛选出的体细胞胚胎分化率较高的株系W10的无菌苗下胚轴切段为受体,利用农杆菌介导法转化pCRI1210-EST干涉载体,浸染后的下胚轴切段在愈伤组织诱导培养基上进行分化。利用半定量RT-PCR技术检测愈伤组织的cDNA。结果表明,转化4个ESTs干涉载体后的胚性愈伤组织中均检测到了载体骨架,证明干涉载体均成功整合进了基因组DNA中,而4个ESTs对应的cDNA的表达量均出现不同程度的下调,不同干涉载体转化的下胚轴出愈率呈现上升和下降2种结果。其中转化EST-418干涉载体的下胚轴出愈率与对照相比有所提高,转化EST-447、EST-496和EST-653干涉载体的下胚轴出愈率与对照相比出现不同程度的下降。因此推断,4个ESTs在愈伤组织分化过程中发挥着不同的作用。其中,EST-418在棉花体细胞胚胎发生过程中起抑制作用,而EST-447、EST-496和EST-653国外品种中在棉花体细胞胚胎发生过程中起促进作用,其结果为分离棉花体细胞胚胎发生相关基因提供了技术和理论支撑。; 尹国路正营李世云韩永亮张朝军李付广; 关键词：RNAI SSH EST 愈伤组织

灭多威胁迫下罗非鱼精巢SSH文库的构建: 2018年; [目的]应用抑制消减杂交(SSH)技术,建立灭多威胁迫下罗非鱼精巢SSH正反向文库。[方法]以雄性罗非鱼为试验动物,采用抑制性消减杂交技术构建罗非鱼精巢组织在灭多威胁迫下的正反向SSH文库。试验共获得45条EST,成功注释25条,其中正向文库13条,反向文库12条。功能明确基因按功能可分为5类,其中催化活性、细胞相关基因表达上调,细胞过程、结构分子活性相关基因表达下调。整合素β1表达量上调,丝/苏氨酸蛋白激酶pim-3、Ca^(2+)-ATPase、Na^+-K^+-ATPase、核糖体蛋白L22表达下调。[结论]研究结果可为揭示灭多威对罗非鱼生殖毒性的分子机制奠定基础。; 孟顺龙刘涛宋超张聪裘丽萍陈家长徐跑; 关键词：灭多威罗非鱼抑制消减杂交 CDNA文库

苜蓿雄性不育系MS-4 SSH文库构建及基因表达分析被引量：2: 2017年; 以苜蓿雄性不育系MS-4与可育系花蕾为材料,利用抑制性消减杂交(SSH)技术,分别构建了不育条件下和可育条件下基因差异表达消减cDNA文库,在2个库中分别随机挑选阳性克隆进行测序,经序列比对分析,共获得功能已知的EST序列190条。后经GO功能分类,对推定出的6个相关基因进行荧光定量PCR分析。结果表明:6个基因在苜蓿雄性不育系花蕾不同发育时期中均出现差异表达,推测这6个基因可能与苜蓿雄性育性相关,并且在其育性转换中具有重要作用。; 高翠萍石凤翎伊风艳唐芳赵彦蔡丽艳; 关键词：苜蓿雄性不育性 SSH文库基因表达量

西藏青稞品种甘农大7号白粉菌诱导早期应答基因SSH文库的构建及分析被引量：5: 2017年; 以接种白粉菌后24 h甘农大7号材料的叶片为实验组(tester),未接种白粉菌材料的叶片为驱动组(driver),分别提取c DNA,利用抑制差减杂交技术,构建"甘农大7号"白粉菌诱导早期应答基因差减文库。对所获得的EST序列去污染后,通过与核酸和蛋白数据库进行序列同源性比对,发现其中有219条非重复序列与已知序列同源性较高。对这些序列进行GO和KEGG功能分析,发现这些注释的基因主要在信号转导、基础物质代谢等方面发挥作用。本结果为后续探究青稞品种甘农大7号抗白粉病的分子机制提供了方向及理论依据。; 徐齐君王玉林王玉林曾兴权原红军; 关键词：青稞白粉病抑制差减杂交

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