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同步靶向马铃薯StRTP5a和StRTP5b基因RNA干扰载体的构建及遗传转化: 2025年; 植物免疫调控基因RTP5(Resistance to Phytophthora 5)编码一个含WD40结构域的蛋白,该基因负调控植物对疫霉的抗性。为获得沉默马铃薯中RTP5同源基因StRTP5a和StRTP5b的遗传材料,以便进一步探究StRTP5a和StRTP5b基因的生物学功能。以四倍体马铃薯品种‘Désirée’的cDNA为模板,扩增到靶向StRTP5a和StRTP5b基因的DNA片段,通过Gateway技术将目的片段重组至植物表达载体pHellsgate12,构建同步靶向StRTP5a和StRTP5b基因的目的表达载体pHells12-StRTP5a/b i,然后利用根癌农杆菌介导的遗传转化方法将目的表达载体转化至‘Désirée’中。经PCR和qPCR分析后,获得8株2个目的基因同时沉默的马铃薯株系,转化株系中StRTP5a和StRTP5b基因表达量同时降幅最高达70%以上。; 张佳欣马文忠党亚茹焦文静李傲买雪妮钱冠宇单卫星宋银; 关键词：马铃薯 RNA干扰

一种简单快速高效的RNA干扰载体构建方法及应用: 本发明属于基因工程及分子生物学领域，具体涉及一种简单快速高效的RNA干扰载体构建方法及应用。该方法具体包括设计带同源臂和酶切位点的特异引物，利用特异引物扩增外源DNA片段，利用限制性内切酶<I>Bam</I>HⅠ和<I>...; 黄维峰黄文清张扬毛毳陈太钰吴昊郑婕李传红邓伟锋李佳欣钟朝信巫婉婷

一种简单快速高效的RNA干扰载体构建方法及应用: 本发明属于基因工程及分子生物学领域，具体涉及一种简单快速高效的RNA干扰载体构建方法及应用。该方法具体包括设计带同源臂和酶切位点的特异引物，利用特异引物扩增外源DNA片段，利用限制性内切酶BamHⅠ和KpnⅠ酶切RNA干...; 黄维峰黄文清张扬毛毳陈太钰吴昊郑婕李传红邓伟锋李佳欣钟朝信巫婉婷

和田羊FGF5基因RNA干扰载体构建及筛选: 2023年; 试验旨在构建并筛选出高效的和田羊成纤维细胞生长因子5(FGF5)基因的RNA干扰载体,根据和田羊FGF5基因序列,设计4条短发夹RNA(shRNA)干扰片段和1条阴性对照片段。扩增后克隆至pGPU6载体,获得4个重组质粒pGPU6-shRNA-FGF1、pGPU6-shRNA-FGF2、pGPU6-shRNA-FGF3、pGPU6-shRNAFGF4和阴性对照质粒pGPU6-shRNA-FGF5。通过琼脂糖凝胶电泳和DNA测序对质粒进行酶切鉴定和测序鉴定。鉴定后的质粒通过电刺激法转染至和田羊成纤维细胞,通过qRT-PCR和Western Blotting(WB)分析FGF5基因的表达情况。结果显示,与阴性载体相比,4个RNA干扰表达载体均可显著降低FGF5 mRNA和蛋白的表达量(P<0.05),其中pGPU6-shRNA-FGF3干扰效率最高,为85.20%。研究表明,FGF5干扰表达载体构建成功并可有效干扰和田羊FGF5基因表达。; 曹少奇陈岩高新梅喻恒彬王静胡广东; 关键词：和田羊 RNA干扰成纤维细胞

RNA干扰载体及其在诱导双子叶植物基因沉默中的应用: 本发明公开了一种双子叶植物RNA干扰载体及其构建和应用，该RNA干扰载体以单子叶植物的pTCK303‑Ubi为基础载体，包含双子叶植物基因表达启动子及报告基因/筛选基因。本发明以单子叶植物常用载体pTCK303‑Ubi为...; 卜瑞方李成伟胡海燕于永昂龙强苏小佳张浩然王晓桠

柑桔黄化脉明病毒RNA干扰载体的构建及遗传转化被引量：2: 2023年; 利用RNAi介导病毒抗性的原理,以柑桔上发生频繁、为害严重的柑桔黄化脉明病毒(Citrus yellow vein clearing virus,CYVCV)为研究对象,以期得到对CYVCV具有抗性的转基因植株。根据CYVCV外壳蛋白(CP)和复制相关蛋白(RP)编码基因的序列,设计含有不同酶切位点的特异性扩增引物,获得靶标干扰片段,分别构建RNA干扰载体ihpCP-pGN、ihpRP-pGN和ihpCPRP-pGN,将干扰载体转入农杆菌感受态细胞EHA105后,采用农杆菌介导法进行柑桔的遗传转化,获得两株转基因阳性植株。研究可为培育抗CYVCV病毒柑桔品种提供参考。; 廖睿玲周常勇曹孟籍; 关键词：柑桔 RNAI

一种促进草莓提早开花的RNA干扰载体FveDDM1-RNAi的应用: 本发明属于植物基因工程技术领域，具体设计一种提早草莓的开花时间的基因、载体及其应用。从森林草莓中筛选得到森林草莓FveDDM1基因，构建得到森林草莓FveDDM1基因的植物抑制表达载体GN2300‑FveDDM1，进而转...; 顾婷婷肖琼潘勤伟李义

Mechlppdk基因在木薯中的表达分析及RNA干扰载体构建和遗传转化: 2021年; 本研究为了明确丙酮酸磷酸双激酶(ppdk)在木薯中的表达谱,创制Mechlppdk的干扰株系,以期为Mechlppdk的功能研究提供材料。本研究以栽培型木薯Arg7为材料,用qPCR的方法分析Mechlppdk在木薯根、茎、叶中的表达谱;采用RNA干扰的方法,构建Mechlppdk的干扰载体,并遗传转化木薯脆性愈伤,经木薯再生体系获得转基因苗,在添加抗生素的培养基上进行生根筛选,经PCR鉴定获得Mechlppdk的干扰株系。用qPCR的方法鉴定Mechlppdk在干扰株系的表达情况。结果表明,Mechlppdk在木薯叶片中表达量最高,达到管家基因的50%。在Mechlppdk的转运肽区,选取1个保守区段设计引物,构建RNA干扰表达载体pART27-Mechlppdki,将表达载体转化农杆菌LBA4404,侵染木薯脆性胚愈伤,获得阳性转基因木薯苗7个株系。通过qPCR分析发现各株系Mechlppdk转录本有不同程度的降低。通过以上分析表明本研究获得了干扰效率较高木薯Mechlppdk干扰株系,将为解析木薯Mechlppdk的功能提供研究材料。; 王海燕陈新周新成沈旭孔华王文泉; 关键词：丙酮酸磷酸双激酶表达谱 RNA干扰木薯 PCR鉴定

松材线虫细胞色素cyp-13A11基因RNA干扰载体的构建及其功能分析: 2021年; 【目的】构建松材线虫cyp-13A11基因RNA干扰载体,研究cyp-13A11基因的功能,为松材线虫病的生物防治提供理论依据。【方法】本文通过设计特异性引物,扩增松材线虫cyp-13A11基因片段,构建至pEASY-T1干扰载体上并转入Trans1-T1大肠杆菌菌株。采用浸泡法对松材线虫进行RNA干扰,通过qRT-PCR检测cyp-13A11基因的表达,将干扰后的线虫分别接种至长满灰葡萄孢菌丝的培养皿中和黑松苗上,测定RNA干扰后线虫的取食、繁殖、致病力和干扰效率等指标。【结果】成功构建了带有pEASY-T1干扰载体的Trans1-T1菌株并且能够合成cyp-13A11 dsRNA,通过RNA干扰抑制了松材线虫cyp-13A11基因的表达。松材线虫RNA干扰后接种至灰葡萄孢第3天,cyp-13A11 dsRNA处理松材线虫的取食面积较小,ddH2O处理松材线虫取食面积达到了整体的2/3;接种第6天,cyp-13A11 dsRNA处理松材线虫的取食面积为整体的1/3,而ddH2O处理松材线虫已将灰葡萄孢菌丝取食殆尽。ddH2O处理松材线虫的繁殖数量比cyp-13A11 dsRNA处理高4.28倍。松材线虫接种至黑松苗第10天,ddH2O处理黑松发病率为22.2%,而cyp-13A11 dsRNA处理黑松发病率为5.6%;接种至20天,ddH2O处理的黑松发病率为44.4%,cyp-13A11 dsRNA处理的黑松发病率为33.3%;直至接种30天,ddH2O和cyp-13A11 dsRNA处理的黑松全部枯萎,发病率达到100%。【结论】成功构建了松材线虫cyp-13A11基因RNA干扰载体,cyp-13A11基因表达沉默后影响了松材线虫的取食,降低了松材线虫的繁殖能力和致病力。; 盛东萍张晓阳张晓阳叶建仁邱秀文; 关键词：松材线虫 RNA干扰功能分析

双价RNA干扰载体转基因水稻抗飞虱研究: 2020年; 借助转基因技术,培育稳定遗传表达靶向昆虫基因dsRNA的转基因植物,对于防治刺吸式害虫褐飞虱具有潜在意义。研究在已获得V-ATPase D和V-ATPase H亚基基因片段的融合基因,并通过体外合成dsRNA喂食褐飞虱若虫后导致死亡率增加的基础上,构建了该融合基因的pcambia 1300-Ubi-hp(VAD-H)-RNAi植物表达载体,转化日本晴水稻(Oryza sativa L.ssp.japonica cv.11)获得转基因植物,褐飞虱若虫取食转基因植株后飞虱体内靶标基因的转录水平有所下降,同时飞虱发育历期和世代周期有所延长,虽然没有造成飞虱的死亡,但双价RNAi载体的构建为利用RNAi技术进行植物抗飞虱研究奠定了基础,同时通过技术改进提高RNAi抗飞虱水平,可进一步培育出抗飞虱转基因水稻。; 杨颖王爱娜; 关键词：融合基因 RNA干扰转基因植物荧光定量PCR

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