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Rd29A启动子驱动AmDHN基因转化紫花苜蓿
2021年
为获得抗逆性强、生长正常的转基因紫花苜蓿植株,本研究以野生型拟南芥(Arabidopsis thaliana)和蒙古沙冬青(Ammppiptanthus mongolicus)为材料,利用PCR和DNA重组技术,克隆了拟南芥Rd29A基因ATG上游共1520 bp的启动子区域;克隆了蒙古沙冬青脱水素基因(AmDHN)共572 bp的开放阅读框,构建了Rd29A启动子驱动AmDHN基因表达的植物表达载体pCHF-RD-DHN。以紫花苜蓿(Medicago satiua)品种‘敖汉苜蓿’的下胚轴和叶为受体材料,利用农杆菌介导法,将构建的pCHF-RD-DHN表达载体转入‘敖汉苜蓿’中,经筛选获得了抗性再生植株。通过PCR检测显示,Rd29A启动子驱动的AmDHN基因已转入‘敖汉苜蓿’的基因组中。利用20%PEG模拟干旱胁迫后,经RT-PCR分析证实,当用20%的PEG胁迫转基因苜蓿植株时,转基因苜蓿株系中AmDHN基因表达量明显增强,而在水处理的条件下,转基因植株中AmDHN基因微量表达。本研究结果将为逆境诱导型启动子驱动抗逆基因在牧草中的表达研究及其遗传改良提供依据。
聂利珍孙瑞芬房永雨李晓东孙杰韩平安
关键词:脱水素基因诱导型启动子
拟南芥rd29A启动子在不同胁迫下GUS活性分析被引量:3
2019年
通过特异PCR扩增技术,以拟南芥基因组DNA为模板,克隆了rd29A基因上游1 600 bp的胁迫诱导型启动子序列。将此1 600 bp的调控序列与GUS基因连接构建植物表达载体pBI101-rd29A-GUS,并用农杆菌介导法转基因拟南芥。定量PCR结果显示,干旱胁迫下转基因纯合株系中rd29A显著上调表达。GUS组织化学染色及GUS定量分析结果表明,在ABA、甘露醇和NaCl等胁迫处理下,GUS活性增强,尤其是ABA胁迫处理。说明rd29A启动子可以增强逆境下GUS基因的表达,可作为一种诱导型启动子应用于提高作物抗逆性的基因工程研究中。
柳娜杨文雄王世红张雪婷杨长刚
关键词:RD29ANACL甘露醇
拟南芥rd29A启动子的克隆及植物表达载体构建被引量:1
2016年
以拟南芥(Arabidopsis thaliana)基因组DNA为材料,根据Gen Bank中拟南芥rd29A启动子序列设计引物,采用PCR克隆一段长度为951 bp的rd29A启动子序列。采用Plant CARE启动子在线预测工具分析表明,rd29A启动子序列具有TATA-box、CAAT-box基本的顺式作用元件和1个脱落酸应答元件(ABRE)和2个脱水应答调控元件(DRE)。将rd29A启动子序列亚克隆到pcambia3301载体的多克隆位点,构建了由rd29A启动子驱动的植物表达载体。
申丽婕于月华刘娜梁承娟汪晓东谷月好崔雪张振清倪志勇
关键词:RD29A植物表达载体
农杆菌介导rd29A启动子驱动otsB基因转化紫茉莉的研究被引量:1
2016年
紫茉莉为紫茉莉科紫茉莉属多年生草本植物,具有较高观赏和药用价值,对重金属和石油污染有较强修复能力。然而目前为止,紫茉莉再生和遗传转化体系尚未建立。本研究以紫茉莉为材料,初步建立起较为稳定的再生体系。通过克隆拟南芥rd29A启动子和大肠杆菌ots B基因,构建了p2300-rd29A pro-ots B植物表达载体。利用根癌农杆菌介导法对紫茉莉进行遗传转化。结果表明,当农杆菌的OD600=0.5,侵染成熟胚或带芽茎段60 min,共培养2 d,紫茉莉的转化效率较高。通过对筛选出的转基因植株进行PCR检测,显示大肠杆菌ots B基因已成功整合到紫茉莉的基因组中,并可有效的进行转录。
陆玉建张韩杰韩文瑜沈志强
关键词:紫茉莉RD29A启动子
Rd29A启动子驱动AtCDPK1基因转化马铃薯的研究被引量:9
2015年
为获得抗旱性强、生长正常的转基因马铃薯植株,以野生拟南芥生态型(Col-0)为材料,利用PCR和DNA重组技术,克隆了拟南芥Rd29A(responsive to dehydration)基因ATG上游+83bp至-1 441bp共1 524bp的启动子区域,其DNA序列与已知拟南芥Rd29A 5'端启动子序列同源性为100%;构建了Rd29A启动子驱动AtCDPK1基因表达的植物表达载体pCHFRd-CDPK1。以马铃薯品种‘费乌瑞它’的试管微型薯为材料,利用农杆菌介导法,将构建成功的pCHFRd-CDPK1载体转入马铃薯中,经筛选与植株再生,获得抗性再生植株。通过PCR和Southern blot检测显示,Rd29A启动子驱动的AtCDPK1基因已整合在马铃薯的基因组中。利用PEG模拟干旱胁迫后,经RT-PCR分析证实,当用20%的PEG胁迫转基因马铃薯植株时,Rd29A启动子驱动AtCDPK1基因表达的转基因马铃薯各个株系中AtCDPK1基因表达量明显增强,而在无胁迫的条件下,植株中AtCDPK1基因基本不表达;同时发现35S控制AtCDPK1转基因植株在PEG胁迫前后,基因转录未见明显差异。形态学观察还表明,在30%PEG胁迫下,转基因植株能正常生长,其长势优于未转基因的对照,且对照植株略有萎焉。该结果可为进一步利用逆境诱导型启动子驱动抗逆基因在农作物中的表达研究及其遗传改良提供依据。
聂利珍于肖夏李国婧孙杰姜超于卓
关键词:马铃薯干旱胁迫
拟南芥RD29A启动子和CBF1的克隆、表达载体的构建及其雏菊的遗传转化
低温是限制植物分布与生长的重要因素之一。目前,CBF/DREB(C-repeat binding factors/dehydrate responsive element binding factor)途径已被证实是赋予...
张绍君
关键词:CBF1雏菊
DREB1B和RD29A启动子的克隆、载体构建及康乃馨和雏菊遗传转化体系的建立
DREB1B转录因能调控一组抗干旱、抗低温基因的表达,在植物传递胁迫耐受性上扮演重要的角色。而RD29A启动子中包含着干旱、高盐和低温响应顺式作用元件,仅在胁迫诱导下表达。已经有利用导入RD29A启动子驱动DREB1B...
贾海燕
关键词:转录因子雏菊胁迫诱导抗逆基因
利用Cre/loxP系统和rd29A启动子构建诱导型植物标记基因删除载体被引量:5
2009年
出于对转基因作物中标记基因的安全性考虑,植物转基因育种中标记基因的删除将成为未来研究的热点之一。位点特异性重组系统之一Cre/loxP系统是目前在植物遗传转化中应用较多,较成熟的一个标记基因删除系统。为了利用Cre/loxP系统构建一种可调控的标记基因删除系统,本研究首先从拟南芥中克隆了逆境诱导型的启动子rd29A,同时从质粒pCre上克隆了Cre基因,构建了含有rd29A:Cre:Tnos表达元件的中间载体,将这一表达元件插入到另一植物双元表达载体pKsb中,最终构建了含有loxP-Pnos-nptⅡ-Tocs-rd29A-Cre-Tnos-loxP的可诱导型删除标记基因nptⅡ的植物双元表达载体。
石君吴忠义黄丛林贾桂霞张秀海
关键词:CRE/LOXP系统RD29A启动子
拟南芥rd29A启动子驱动的BADH基因植物表达载体的构建及其转化烟草的研究
转基因作物的成功应用在很大程度上取决于导入基因的表达水平,外源基因在转基因植物中的表达最终由启动子来控制。对启动子的研究,一直是植物基因工程的热点。本试验针对rd29A基因启动子的表达调控,主要研究结果如下: ...
王福兰
关键词:RD29A启动子植物表达载体
农杆菌介导rd29A启动子驱动AVP1基因转化匍匐翦股颖的研究
随着我国草坪业的快速发展,草坪草遗传育种工作越来越受到人们关注,生物技术在草坪草品种改良中具有很大的应用潜力。干旱和高盐是限制草坪草生长的主要环境因,当前我国特别缺乏抗旱耐盐的草坪草品种。利用植物基因工程技术,克隆并转...
吴琼
关键词:RD29A启动子匍匐剪股颖