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恒温荧光法及RT-PCR法检测南美白对虾常见病: 2025年; 试验旨在探究恒温荧光法及RT-PCR法检测南美白对虾常见3类疾病(病毒类、细菌类、寄生虫类)的应用效果。试验随机抽取3份虾苗样品,每份样品15~20头,采用RT-PCR法检测肝胰腺细小病毒(HPV)、对虾杆状病毒(BPV),恒温荧光法检测致急性肝胰腺坏死病副溶血弧菌(Vp_(AHPND))、传染性皮下及造血组织坏死病毒(IHHNV)、黄头病毒(YHV)、虹彩病毒(DIVI)、哈维氏弧菌(HVS)、桃拉病毒(TSV)、虾肝肠胞虫(EHP)、白斑综合征病毒(WSSV)。结果显示,恒温荧光法检测Vp_(AHPND)、IHHNV、YHV、DIVI、TSV、HVS、WSSV、EHP等8种病原结果均为阴性,凝胶电泳试验中未出现HPV、BPV条带,表明虾苗未携带上述病原。研究表明,RT-PCR法与恒温荧光法可快速有效地检测南美白对虾虾苗病原携带情况。; 赵龙飞韩煜茹王万兴蔡树东; 关键词：南美白对虾 RT-PCR法

实时荧光定量PCR法检测左旋多巴中大肠埃希菌宿主细胞DNA残留量: 2025年; 采用实时荧光定量PCR技术,建立特异性强、灵敏度高的左旋多巴中大肠埃希菌(Escherichiacoli)宿主细胞DNA残留量的检测方法,并进行验证和初步应用。以大肠埃希菌中的相对保守的E.coli MB6菌株16S核糖体RNA基因序列作为目的基因设计多对引物,通过PCR进行特异性扩增获得目的片段。将目的片段重组至pLENTI-BSD-CON载体构建重组质粒命名为pLENTI-BSD-CON-E.coli-16S,以其为标准品,结合磁珠法提取纯化DNA,建立定量PCR检测方法(SYBR-Green法)。对建立的方法进行线性与范围、准确度、精密度、专属性、定量限及耐用性的方法学验证,应用于左旋多巴原料药的检测,并与试剂盒检测方法(Taqman探针法)进行比较。建立的定量PCR检测方法(SYBR-Green法)正向引物序列:5'-TTCGATGCAACGCGAAGAAC-3';反向引物序列:5'-GTGTAGCCCTGGTCGTAAGG-3'。以重组质粒作为标准品,DNA质量浓度在10fg/μL~3 ng/μL范围内线性关系良好(R^(2)≥0.98),定量限为10 fg/μL,加标溶液回收率在59.7%~80.7%范围内,RSD均小于30%。应用该法对3批左旋多巴原料药进行检测,DNA残留量均在限度以下。结果表明,建立的检测方法可用于定量检测左旋多巴等由大肠埃希菌作为宿主细胞生产的生物制品的DNA残留量,并且其灵敏度优于试剂盒检测方法。; 许冰瑜刘妍郭心瑶严方孙桂斌; 关键词：大肠埃希菌左旋多巴实时荧光定量PCR

一种利用多重PCR法检测BCR-ABL酪氨酸激酶区突变靶向NGS建库试剂盒: 本发明提供了一种利用多重PCR法检测BCR‑ABL酪氨酸激酶区突变靶向NGS建库方法和试剂盒。本发明一次检测就可以快速获得临床样本中BCR‑ABL酪氨酸激酶区所有突变情况，同时本试剂盒操作简便，耗时少，极易实现自动化检测...; 周桂兰詹东亮王驭孙翠莲

一种基于Splint-PCR法检测C57BL/6J小鼠血清中反义寡核苷酸PS DNA的方法: 本发明属于生物分析技术领域，具体涉及一种基于Splint‑PCR法检测C57BL/6J小鼠血清中反义寡核苷酸PS DNA的方法。本发明的方法包括如下步骤：向待检测样本中加入探针Probe A和探针Probe B，杂交；向...; 赖力扈正桃薛爱琴

一步RT-PCR法检测苹果锈果类病毒和苹果凹果类病毒: 2024年; 由类病毒引起的苹果病害在中国苹果主产区普遍发生,严重制约苹果产业的健康发展。对采自不同地区的带有典型症状的弘前富士、南方脆及惠民短枝富士果实,进行苹果锈果类病毒(ASSVd)和凹果类病毒(ADFVd)检测,发现两种病毒能够共侵染。根据ASSVd和ADFVd保守序列设计通用引物,建立了能快速、同时检测两种类病毒的RT-PCR方法。; 马宁孔令荣张学勇赵玲玲由春香张振鲁; 关键词：苹果锈果类病毒 RT-PCR检测

实时荧光PCR法检测包装饮用水中铜绿假单胞菌的研究: 2024年; 近年来,包装饮用水中铜绿假单胞菌超标的现象时有发生,运用国家安全标准方法进行检验,过程烦琐,周期较长,不利于监管。然而,实时荧光PCR检验法具有灵敏、快速、准确等优点,被广泛应用于各种检验检测中。本文采用实时荧光PCR法,利用特异性引物和探针对目标基因进行扩增。然后通过实时荧光PCR法对其他5种细菌和梯度含量的铜绿假单胞菌菌悬液进行检测,验证方法的特异性和灵敏度。结果表明,只有铜绿假单胞菌的实时荧光PCR检测结果为阳性,其他细菌的检测结果为阴性,说明本方法对铜绿假单胞菌的特异性较好,方法的灵敏度为1×10^(3)CFU·mL^(-1)。同国家安全标准方法相比,实时荧光PCR法所用时间更短,明显提高了检测效率。; 庞婕刘杰孔庆岩秦森翰董建锋; 关键词：铜绿假单胞菌实时荧光PCR 包装饮用水

胶体金法与实时荧光定量PCR法检测甲乙型流感病毒的应用价值: 2024年; 目的探讨胶体金法与实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)法检测甲乙型流感病毒的应用价值。方法选取2023年1月至2023年12月我中心进行检测的80例流感患者,均行胶体金法和PCR法检测,比较两种方法检查所用时间和检查结果。以综合检查结果为金标准,分析两种方法与金标准结果的一致性。结果胶体金法检查所用时间(15.46±3.82)min短于PCR法(180.28±32.09)min,差异有统计学意义(P<0.05)。80例流感患者经综合检查发现甲型44例、乙型36例;胶体金法检出甲型42例、乙型31例,检出率为91.25%;PCR法检出甲型43例、乙型34例,检出率为96.25%。两种方法诊断效能对比,差异无统计学意义(P>0.05)。胶体金法、PCR法检查结果与金标准结果一致性均极好(Kappa=0.891、0.938,P<0.05)。结论胶体金法、PCR法鉴别诊断甲、乙型流感病毒的准确度、灵敏度及特异度均较高,与临床综合检查结果一致性均较好,胶体金法检查所用时间更短,临床应用时可灵活选择检测方法,为临床鉴别诊断提供便利。; 占红婷; 关键词：胶体金法实时荧光定量PCR法

荧光实时定量PCR法检测流感病毒核酸的质控结果分析: 2024年; 目的分析浅析荧光实时定量PCR法检测流感病毒核酸的质控结果。方法在2021年5月至2022年11月期间,120例流感病毒感染样本进行研究。对这些样本的流感病毒RNA进行了核酸抽提,并利用PCR实时荧光定量技术进行检测以评估其效果。结果运用该技术检测到乙型流感病毒44例,甲1型40例,以及甲3型36例。所有检测结果均符合分子生物学操作的质控标准,合格率达到100.0%。结论实时核酸PCR技术在临床流感病毒检测中被广泛应用。PCR实时荧光定量检测法在流感病毒核酸检测中的表现精确且迅速,适宜作为应对突发公共卫生事件的首选检测手段。; 宋广萍; 关键词：荧光实时定量 PCR法检测质控结果

荧光定量PCR法检测ABL1激酶区突变: 2024年; 目的:建立一种敏感性高且能定量分析ABL1激酶区突变的检测方法,为慢性髓系白血病(CML)的早期诊断和治疗提供有力支持。方法:收集35例经Sanger测序法检测为阴性的CML患者剩余标本。ABL1激酶区突变检测采用上海源奇生物医药科技有限公司的突变检测试剂盒采用^(△△)Ct值法分析突变率通过计算突变率并除以融合基因表达量,得出ABL1激酶区的相对突变率。结果:在35例经Sanger测序法检测为阴性患者中重新采用荧光定量PCR法检测ABL1激酶区突变,有7例出现T315I突变2例T315A突变2例Y253H突变,1例E255K突变,其相对突变率在0.1%-19.42%之间,均属于低频突变,超出了Sanger测序法的检测范围。随后应用该方法对126例CML患者进行ABL1突变检测与Sanger测序法相比,该方法的阳性率提高,显示出更高的敏感性。针对患者的突变情况进行相应的临床治疗调整后,观察到患者BCR-ABL1融合基因表达显著性下降或转为阴性。结论:与Sanger测序法相比,荧光定量PCR法在检测ABL1激酶区突变方面具有更高敏感性,能早期筛选出低频ABL1激酶区突变,并进行相对定量分析,该方法具有较好的临床应用前景。; 程焕臣李思王殿智刘宇贡铁军马军; 关键词：荧光定量PCR 基因耐药 CML

荧光定量PCR法检测皮纤维中黄牛、绵羊源性成分研究被引量：1: 2024年; 为实现皮纤维产品中常见原料黄牛、绵羊源性成分的鉴别与定量分析,采用实时荧光聚合酶链式反应技术比较了58、60℃两个退火温度下,黄牛、绵羊源性成分的扩增效果,利用两种成分浓度比值的对数与两者对应的阈值循环数之差存在线性关系,建立了黄牛、绵羊皮纤维的双重定量PCR(double fluorescence quantitation PCR)检测方法。结果显示,退火温度设置为58℃时,黄牛、绵羊源性成分均能有效扩增,且最低检出的DNA质量浓度均为10^(-3)ng/μL。经荧光定量检测分析,建立标准曲线时,黄牛与绵羊皮纤维源性成分的浓度比值范围为1/9~9/1,标准曲线的相关系数为0.9954。文章建立的黄牛、绵羊皮纤维源性成分的双重定量PCR检测方法,不仅能定性鉴别两种成分,而且能较为准确地进行两者的定量分析,与实际结果偏差为5%。; 周宇东姚艳玲孙世元王文宇刘骆强管佳丽张娜李慧玲; 关键词：皮纤维

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