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一种欣氏波氏杆菌荧光定量PCR方法: 本发明公开了一种欣氏波氏杆菌荧光定量PCR方法，涉及生物工程技术领域，其技术要点为：步骤S1、以标准质粒作为DNA模版，对引物进行荧光PCR扩增，绘制得到欣氏波氏杆菌扩增CT值之间的标准曲线；步骤S2、用引物对检测检样品...; 张雪青冯育芳邢进付瑞

对五种qPCR和PCR方法在弓形虫诊断中的比较研究: 2025年; 为了评估国内外4个标准中涉及的5个PCR和实时定量PCR(qPCR)方法在弓形虫病诊断中的性能,本研究基于弓形虫速殖子评估了各检测方法的敏感性、重复性和特异性,并通过检测62份猫粪便样品对上述诊断方法进行了比较分析。结果显示,所有标准方法都有较好的特异性和重复性,其中检验检疫标准中的qPCR方法、WOAH标准的qPCR方法和农业标准的PCR方法最低检测限最小(速殖子的浓度约为每微升0.375个),其次是国家标准的PCR方法(速殖子的浓度约为每微升3.75个),检验检疫标准的PCR方法敏感性最低(速殖子的浓度约为每微升375个)。对62份猫粪便样品进行检测分析发现,敏感性最高(99.23%)的方法为检验检疫标准的qPCR方法,特异性最高(99.13%)的是国家标准的PCR方法,敏感性最低(91.73%)的是检验检疫标准中的PCR方法,特异性最低(96.82%)的是农业标准的PCR方法。本研究为弓形虫病诊断标准方法的选择提供了参考。; 黄艳丽陈亚娜白邵缘周国庆崔灿李宇渊黄思扬原霖; 关键词：弓形虫 PCR

基于数字PCR方法的玉米内标准基因比较研究: 2025年; 随着转基因玉米种类以及种植面积的不断增加,转基因玉米相关产品的定性和定量检测需求日益迫切。选择稳定遗传、特异性强的内标准基因对于转基因玉米鉴定结果的准确性和一致性具有重要意义。利用数字PCR技术对hmg、adh1-1、adh1-2、ivrI-1、ivrI-2、zSSIIb-1、zSSIIb-2、zein-1、zein-2在内的9种玉米内标准基因进行了筛选比较,通过退火温度的优化,找到各自最适的退火温度,并以转基因玉米MON810为研究对象,用上述内标准基因进行实际样品测定。结果表明,adh1-1和adh1-2可以用于实际样品的拷贝数检测。研究结果将为今后转基因玉米内标准基因的选择和相关定量检测提供参考,并对我国转基因作物的管理提供有力的技术支撑。; 齐鑫李欣然郭亚宁王丹李凯吴琼李亮; 关键词：转基因玉米转基因检测

香蕉线条病毒多重免疫捕获PCR方法的建立及应用: 2025年; 为提高复合感染香蕉的香蕉线条病毒(banana streak virus,BSV)的诊断效率,保障香蕉产业的健康发展,设计基于香蕉线条病毒OL(banana streak OL virus,BSOLV)、香蕉线条病毒GF(banana streak GF virus,BSGFV)的外壳蛋白(coat protein,CP)基因和香蕉线条病毒IM(banana streak IM virus,BSIMV)的RNase H基因保守序列的特异引物,利用BSV多克隆抗血清捕获病毒为模板,通过对引物浓度、退火温度等条件的优化,建立能够同步检测BSOLV、BSGFV、BSIMV的多重免疫捕获PCR方法。研究结果显示,建成的最优体系为BSOLV、BSGFV、BSIMV上下游引物终浓度(μmol/L)比例0.5∶0.5∶0.5,退火温度为63℃。利用该多重免疫捕获PCR方法可以从1 mg/mL的香蕉粗提液中分别检测出BSOLV、BSGFV和BSIMV。所建立的多重免疫捕获PCR方法与引起相似症状的黄瓜花叶病毒(cucumber mosaic virus,CMV)无交叉反应。对15份田间香蕉样品进行检测,能够明显区分出复合侵染的样品,经测序验证,BSOLV、BSGFV和BSIMV的扩增产物与GenBank相应病毒同源率分别在94%以上。表明该多重免疫捕获PCR方法具有较高的敏感性和特异性,可应用于香蕉种苗以及田间香蕉样品中3种BSV的检测。; 卢咏思刘润沛饶雪琴; 关键词：香蕉香蕉线条病毒

一种用于检测水体中寄生虫污染的多重荧光PCR方法及其应用: 本发明涉及一种用于检测水体中寄生虫污染的多重荧光聚合酶链反应（PCR）方法及其应用。该方法利用荧光定量PCR技术检测水体中日本血吸虫、贾第虫、十二指肠钩口线虫的存在，以评估水体是否受到这些寄生虫的污染。该方法包括提取待测...; 谢桦函武栋何苑琳

艰难梭菌tcdA和tcdB基因绝对定量PCR方法的建立及应用: 2025年; 目的建立基于SYBR染料法的能够精确定量艰难梭菌主要毒素tcdA和tcdB基因表达量的绝对定量PCR方法,并进行应用。方法以CD12038艰难梭菌参考菌株为研究对象,扩增tcdA和tcdB基因的部分片段,然后将二者克隆到pUC57质粒载体中进行测序鉴定。采用梯度稀释的重组质粒为标准品,SYBR荧光染料法进行qPCR扩增,建立标准曲线。然后在4种主要的产毒性艰难梭菌流行参考菌株中验证菌株培养后tcdA和tcdB基因的拷贝数。结果本研究建立了能够精确定量产毒性艰难梭菌tcdA和tcdB基因拷贝数的绝对定量PCR方法,其中tcdA基因的线性范围为(2.71×10^(2)~2.71×10^(9))拷贝/μL,灵敏性为(324.70±33.42)拷贝/μL,批内变异系数(CV)为0.60%~1.12%,批间CV为0.57%~0.92%。tcdB基因的线性范围为(2.59×10^(2)~2.59×10^(9))拷贝/μL,灵敏性为(539.05±133.28)拷贝/μL,批内CV为0.37%~1.61%,批间CV为0.84%~1.76%。2个基因的溶解曲线均呈现单一峰值,特异性良好。对4种产毒性艰难梭菌参考菌株培养24 h后的tcdA和tcdB基因拷贝数研究结果显示,R20291(ST1/RT027)菌株的tcdA和tcdB基因表达水平最高,而其余3个菌株的表达水平较为相似。结论本研究建立了基于产毒性艰难梭菌tcdA和tcdB基因的绝对定量PCR方法,该方法具有线性范围广、灵敏性高、特异性和可重复性良好等特点,为后续艰难梭菌主要毒素基因的精确定量研究提供了技术支持。; 古文鹏贾森泉周永明尹建雯赵世文赵晓南吴媛伏晓庆; 关键词：艰难梭菌

F亚群禽白血病病毒SYBR GreenⅠ荧光定量PCR方法的建立: 2025年; 为精准检测F亚群禽白血病病毒(ALV⁃F),该研究针对ALV⁃F流行毒株env基因设计了一对特异性引物F1/F2,建立了ALV⁃F的SYBR GreenⅠ荧光定量PCR检测方法。条件优化试验结果显示,该方法最适退火温度为64.5℃,最适引物浓度为0.4μM。利用最适反应条件建立的标准曲线方程为y=-3.303x+42.525,R2=0.997,扩增效率E=100.8%,重组质粒标准品拷贝数与Ct值具有良好的线性关系。特异性试验结果表明,该方法仅能特异性检测ALV⁃F,对ALV⁃A、ALV⁃B、ALV⁃J、ALV⁃K、禽流感病毒(AIV)、马立克病毒(MDV)、网状内皮组织增生病病毒(REV)和鸡传染性贫血病病毒(CIAV)无交叉反应;敏感试验结果表明,该方法最低检测限度为4.67×10^(2)拷贝/μL,敏感性是普通PCR的1000倍;稳定性试验结果表明,批间和批内稳定性试验的变异系数均小于2%。利用该方法、ALV p27 ELISA和普通PCR方法分别对23份七彩山鸡胚所制备的原代细胞(PEF)样品进行检测,结果显示该方法和普通PCR方法阳性检出率均为95.65%(22/23),而ALV p27 ELISA阳性检出率仅为39.13%(9/23),该方法与普通PCR总符合率为100%,与ALV p27 ELISA总符合率为43.48%;进一步利用该方法、病毒分离法(结合ALV p27 ELISA)和普通PCR方法分别对20份七彩山鸡抗凝血样品进行检测,结果显示该方法和普通PCR方法阳性检出率分别为100.00%(20/20)和75.00%(15/20),两者总符合率为75.00%,而病毒分离法阳性检出率为0.00%(0/20)。本研究建立的方法具有良好的特异性、敏感性和稳定性,能够有效检测临床样品,可以为ALV⁃F的精准检测提供技术支持。; 潘洪艳李锦群李琪袁伊琳曹伟胜; 关键词：禽白血病

基于数字PCR方法的血浆ctDNA KRAS/NRAS/EGFR/BRAF/MET基因突变检测评价: 2025年; 目的采用基于DAAN StarrySky 10K生物芯片阅读仪开发的数字PCR方法的肿瘤基因突变检测试剂盒,针对血浆ctDNA KRAS/NRAS/EGFR/BRAF/MET基因突变检测国家参考品进行检测,评价该技术方法研发试剂盒准确性、特异性及最低检测限性能指标。方法提取国家参考品的ctDNA,进行PCR扩增,然后使用DAAN StarrySky 10K生物芯片阅读仪采集数据。结果87例国家参考品检测结果准确,试剂盒检测范围内的国家阳性参考品均为相应突变阳性,范围外的国家阳性参考品和国家阴性参考品均为突变阴性,检测限不高于基因突变频率0.2%。结论基于DAAN StarrySky 10K生物芯片阅读仪开发的检测试剂盒,完善了液体活检ctDNA的检测方法,能够符合国家参考品的要求。; 张咪张文新齐雅宁曲守方; 关键词：国家参考品

蜂蜜中嗜渗酵母菌TaqMan实时荧光定量PCR方法的建立: 2025年; 【目的】建立蜂蜜中嗜渗酵母菌的快速检测方法,为保障蜂蜜品质提供理论基础。【方法】根据GenBank中嗜渗酵母菌26S rDNA D_(1)~D_(2)基因序列设计特异性引物,PCR扩增获得嗜渗酵母D_(1)~D_(2)基因片段,构建重组质粒pMD-18T-JM为阳性标准品,对荧光定量PCR反应条件进行优化,建立嗜渗酵母菌TaqMan探针实时荧光定量PCR方法,并对160份蜂蜜样品进行验证。【结果】建立的蜂蜜中嗜渗酵母菌TaqMan探针实时荧光定量PCR检测方法特异性好,灵敏度达0.004 pg/μL。TaqMan实时荧光定量PCR检测阳性率达98.5%,比普通PCR检测(阳性率84.1%)高14.4百分点,检测敏感性达100%。【结论】嗜渗酵母菌TaqMan探针实时荧光定量PCR方法特异、灵敏、快速、重复性好,适合于蜂蜜中嗜渗酵母菌的快速检测。; 姜玲玲罗文菊雷露周景瑞艾蓉余波; 关键词：蜂蜜探针荧光定量 PCR

一种用于鉴定长牡蛎三倍体的微卫星多重PCR方法: 本发明公开了一种用于鉴定长牡蛎三倍体的微卫星多重PCR方法；所述方法包括以下步骤：(1)采集长牡蛎闭壳肌，提取基因组DNA；(2)使用12个微卫星位点的正反引物及带荧光标记的M13(‑21)通用引物，对提取的基因组DNA...; 李琪郑慧琳

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