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Nspc1在小鼠大脑皮层神经细胞谱系形成过程中的功能和机制研究: 哺乳动物大脑皮层神经前体细胞（neural progenitor cells,NPCs）的发育是一个边特化边分化的过程,随着发育时间的推移NPCs逐步拥有了形成神经元和神经胶质细胞的特性。神经元和神经胶质形成相关基因的抑...; 周佳奇; 关键词：NSPC1 神经前体细胞神经胶质

胶质瘤细胞H4中与多梳蛋白NSPc1相互作用的长链非编码RNA的鉴定被引量：1: 2017年; 【目的】鉴定胶质瘤H4细胞系中与多梳家族(polycomb group)蛋白NSPc1可能相互作用的长链非编码RNA(long noncoding RNA,lnc RNA)。【方法】在胶质瘤H4细胞系中,利用RNA结合蛋白免疫共沉淀RIP(RNA binding protein immunoprecipitation,IP)技术联合实时定量PCR技术在生物信息学预测与NSPc1蛋白结合评分较高的候选lnc RNAs中验证相互作用的lnc RNAs。【结果】鉴定出MALAT1、MEG3和SOX2OT可能与NSPc1蛋白相互作用。【结论】胶质瘤细胞中多梳蛋白NSPc1可能通过与lnc RNAs相互作用参与着肿瘤的发生发展、迁移、侵袭甚至肿瘤干细胞干性的维持。; 王玉梁梁之孔李辉林彦琛正午龚燕华; 关键词：胶质瘤 NSPC1 长链非编码RNA

胶质瘤细胞U87中NSPc1与lncRNAs分子的功能性互作研究: 目的:最近研究发现，在神经胶质瘤细胞中多梳蛋白家族在表观遗传学水平发挥着转录抑制作用并与胶质瘤的发生发展密切相关，与此同时一些长链非编码RNA（lncRNAs）被发现在神经胶质瘤异常表达并与肿瘤的分级和分型相互关联。通过...; 梁之孔; 关键词：神经胶质瘤

多梳蛋白Nspc1对微管基因Tubulin βⅢ启动子活性的影响被引量：1: 2015年; 【目的】克隆TubulinβIII基因的启动子,插入荧光素酶报告基因载体中并检测多梳蛋白Nspc1对其活性的影响。【方法】提取小鼠畸胎瘤细胞系P19的DNA,PCR扩增TubulinβIII近端启动子片段,构建2个不同长度的p GL3basic-TubulinβIII荧光素酶报告基因载体,双酶切及测序确定所扩增的DNA序列,将重组的报告基因载体与转录调控因子多梳蛋白Nspc1瞬时共转染小鼠畸胎瘤细胞系P19细胞,使用双荧光素酶报告基因检测系统检测Nspc1对TubulinβIII启动子活性的影响。【结果】鉴定结果表明构建的TubulinβIII启动子序列正确,P19细胞中双荧光素酶活性实验表明构建的报告基因具有启动子活性,并对转录调控因子Nspc1有应答。【结论】成功构建了TubulinβIII荧光素酶报告基因载体,为进一步在多能干细胞分化模型中研究多梳蛋白Nspc1对TubulinβIII基因的表达调控机制奠定了重要基础。; 李辉樊嵘正午孙奕龚燕华; 关键词：荧光素酶报告基因转录活性

Nspc1在P19细胞向心肌分化过程中的调控作用: 目的:　　多梳家族蛋白(Polycomb group proteins，PcGs)是一类高度保守、普遍存在，对胚胎发育和维持成体干细胞状态有重要作用的蛋白。最近发现，在P19多能干细胞中多梳家族Nspc1对Oct4、So...; 正午; 关键词：分化机制

NSPc1-siRNA重组慢病毒的构建及其对U87细胞NSPc1基因的沉默效应: 2014年; 【目的】构建包装NSPc1-si RNA慢病毒颗粒,并在U87胶质瘤细胞中鉴定其感染及基因沉默效果。【方法】根据Gen Bank中基因信息,采用干扰序列设计软件设计靶点,制备合成GV118-si RNA目的质粒,转化感受态细胞,对于长出的克隆应用菌落PCR鉴定,再对PCR鉴定阳性的克隆进行测序和对比分析,重组病毒质粒与另外2种辅助包装载体质粒通过Lipofectamine TM2 000共转染293T细胞,培养48 h后,收集细胞培养上清液,将病毒浓缩后在293T细胞中测定病毒滴度;并检测病毒颗粒在目的细胞U87胶质瘤细胞中的感染效率,实时荧光定量PCR(RT-PCR)和Western blotting方法检测NSPc1 si RNA慢病毒对U87中NSPc1的干扰作用。【结果】成功构建NSPc1 si RNA慢病毒载体GV118-si RNA,重组病毒滴度为4×108TU/ml;用该病毒体外感染U87胶质瘤细胞,当感染复数(MOI)为10时,感染效率大于90%;RT-PCR和Western blotting方法检测NSPc1基因沉默的效率分别为66.4%、60.0%。【结论】成功构建了NSPc1 si RNA慢病毒载体GV118-si RNA,该重组病毒包装后在体外感染U87胶质瘤细胞的效率较高,且具有显著的基因沉默效果。; 樊嵘李辉沈静龚燕华; 关键词：NSPC1 SIRNA 慢病毒载体 U87细胞

神经干细胞增殖与分化过程中Bmi1与NSPc1的作用: 2012年; 多梳蛋白(PcG)家族是非常保守的表观遗传调节因子。近年来对其成员的功能研究发现,PcG家族对干细胞的自我更新及增殖与分化都有很重要的作用。哺乳动物PRC1成员Bmi1和NSPc1在神经系统发育早期高表达。最近的研究提示它们不仅在细胞增殖分化相关基因转录调控中发挥重要作用,而且在神经干细胞自我更新及分化过程中同样有重要作用。; 李辉胡光宇龚燕华; 关键词：增殖分化 BMI1 NSPC1

人NSPc1慢病毒过表达系统的建立与鉴定: 2011年; 目的建立并鉴定人NSPc1慢病毒过表达系统,以便应用过表达技术进一步研究NSPc1功能。方法设计针对人NSPc1cDNA序列的带酶切位点引物,PCR扩增获得双链DNA后,与酶切后的pLenti6-TO-EGFP-TRIP载体片段进行连接、转化,酶切及DNA测序鉴定重组克隆。提取阳性克隆质粒,转染293T细胞并用Western blot检测质粒过表达效果。用293T细胞制备慢病毒颗粒,感染293T细胞后收集细胞全蛋白,用Western blot检测慢病毒系统过表达效果。结果证实人NSPc1正确插入慢病毒载体,人NSPc1慢病毒过表达质粒及相应病毒颗粒能有效过表达NSPc1。结论人NSPc1慢病毒表达系统的成功建立,为应用过表达技术研究人NSPc1功能打下了基础。; 李辉龚燕华胡光宇阴彬; 关键词：过表达 NSPC1 慢病毒载体

NSPc1-shRNA慢病毒表达载体的构建与鉴定: 2010年; 目的构建并鉴定NSPc1-shRNA慢病毒表达载体,以便应用RNAi技术以及慢病毒感染系统进一步研究NSPc1的功能。方法设计针对NSPc1mRNA靶序列的小发夹状RNA,化学合成含茎环结构的正义链与反义链,退火形成带内切酶粘/平末端的双链后,与酶切后的pLentiLox3.7载体片段进行连接、转化。用双酶切及DNA测序鉴定重组克隆。提取阳性克隆质粒并转染293T细胞,收集细胞全蛋白用Western检测RNAi效果。结果重组克隆经酶切证实shRNA正确插入慢病毒载体,DNA测序证实插入的序列正确,Western检测证实设计的三条RNA干扰序列有效敲低了293T细胞中的内源性NSPc1。结论 3个NSPc1-shRNA慢病毒表达载体的成功构建为应用基于慢病毒系统的RNAi技术来研究NSPc1基因的功能打下了基础。; 李辉龚燕华胡光宇阴彬; 关键词：RNA干扰 NSPC1 慢病毒载体

NSPc1是维持HeLa细胞正常增殖的必要因子被引量：2: 2009年; 目的研究多梳蛋白家族成员NSPc1对HeLa细胞增殖的影响。方法运用生物信息学设计并合成敲低NSPc1表达的siRNA序列,用半定量RT-PCR、Real-time PCR及Western blot等检测siRNA序列在HeLa细胞中敲低NSPc1的有效性;将相应有效序列构建到pSUPER载体中,观察其瞬时转染对HeLa细胞BrdU掺入的影响;用G418筛选并建立稳定敲低NSPc1的HeLa细胞系,观察敲低NSPc1对HeLa细胞体外增殖能力的影响。结果(1)设计的siRNA序列可显著敲低NSPc1的表达;(2)瞬时敲低NSPc1阻碍了HeLa细胞BrdU的掺入;(3)成功构建稳定敲低NSPc1的HeLa细胞系,其增殖速度较对照组明显变慢。结论NSPc1的正常表达是维持HeLa细胞正常增殖能力所必需的,稳定敲低NSPc1的HeLa细胞群可作为进一步研究NSPc1相关信号通路的有效模型。; 胡光宇吴旭东彭小忠龚燕华; 关键词：POLYCOMB NSPC1 HELA细胞稳定细胞系增殖

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