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人tau蛋白N端结构域特异性单克隆抗体筛选及在血液检测中的应用被引量：1: 2024年; 微管相关蛋白tau抗体在阿尔茨海默病(Alzheimer's disease, AD)及其他tau蛋白病的基础和临床研究中发挥重要作用。采用重组人tau441作为免疫原,通过细胞融合及有限稀释法筛选并获得分泌抗人tau蛋白N端结构域(tau N-terminal domain,NTD-tau)单克隆抗体杂交瘤细胞株,通过制备小鼠腹水及亲和层析获得纯化的单克隆抗体;分别采用间接ELISA检测其灵敏度,蛋白质印迹检测其特异性;建立并优化人tau蛋白双抗体夹心ELISA检测方法。结果显示,杂交瘤细胞克隆阳性率为83.6%,建立分泌ZD8F7单克隆抗体的稳定细胞株,细胞上清中抗体效价为1:16000;腹水中抗体效价高于1:256 000;纯化后单克隆抗体效价高于1:128 000;表位分析显示,ZD8F7单克隆抗体识别tau21-37位氨基酸,位于N端结构域;蛋白质印迹分析显示,ZD8F7单克隆抗体识别50-70 kDa重组人tau蛋白及转基因AD模型小鼠(APP/PS1/tau)脑组织中50 kDa的人tau蛋白;以ZD8F7单克隆抗体作为捕获抗体建立的人tau蛋白定量检测方法,线性范围在7.8-500.0 pg/mL,可以识别AD转基因小鼠脑组织以及血浆中的人tau蛋白,而不识别小鼠tau蛋白。综上,本研究制备的人NTD-tau特异性单抗和双抗体夹心ELISA检测方法灵敏度高,为神经退行性疾病中tau蛋白检测提供了有力工具。; 闫子迪张译文姜家龙刘振武王荷张莹何金生洪涛; 关键词：双抗体夹心ELISA

消皮素D蛋白N端结构域与急性缺血性脑卒中患者短期和长期预后的相关性研究: 2024年; 目的探讨消皮素D蛋白N端结构域(Gasdermin D-N,GSDMD-N)对大血管闭塞性缺血性脑卒中患者短期和长期预后的预判效果。方法回顾性选择2023年1~4月南京医科大学第一附属医院急诊医学中心收治的大血管闭塞性急性缺血性脑卒中患者65例,根据入院时及入院后5 d的美国国立卫生研究院卒中量表(national institutes of health stroke scale,NIHSS)评分分为预后良好1组34例和预后不良1组31例。又根据90 d时改良的Rankin量表(modified Rankin scale,mRS)评分分为预后良好2组47例和预后不良2组18例。收集基线资料特征,并采用单因素和多因素回归分析影响短期和长期预后的潜在风险因素。分别于患者入院时、入院24 h检测GSDMD-N。构建ROC曲线,分析GSDMD-N对不良预后的预测能力。结果预后良好1组与预后不良1组年龄、男性、灌注缺损体积、发病到就诊时间、入院时NIHSS评分、GSDMD-N、S100蛋白β亚型(S100β)、突触融合蛋白17(syntaxin 17,STX17)、出血并发症、静脉溶栓、血管内治疗、高血压、糖尿病、冠心病、脑卒中、心房颤动比例比较,差异无统计学意义(P>0.05)。单因素及多因素logistic回归分析显示,24 h的GSDMD-N变化为短期预后不良的重要影响因素(OR=1.054,95%CI:1.023~1.093,P=0.001;OR=1.072,95%CI:1.032~1.124,P=0.001)。ROC曲线分析显示,24 h的GSDMD-N变化对短期预后不良有较好预测价值,曲线下面积为0.814(95%CI:0.698~0.905)。预后良好2组与预后不良2组年龄、男性、灌注缺损体积、发病到就诊时间、入院时NIHSS评分、GSDMD-N、S100β、STX17、出血并发症、静脉溶栓、血管内治疗、高血压、糖尿病、冠心病、脑卒中、心房颤动比例比较,差异无统计学意义(P>0.05)。单因素及多因素logistic回归分析显示,24 h的GSDMD-N变化为长期预后不良的重要影响因素(OR=1.001,95%CI:1.023~1.069,P=0.046;OR=1.063,95%CI:1.017~1.125,P=0.015)。ROC曲线分析显示,24 h的GSDMD-N�; 李晓慧陈旭锋季荔汪璇茆丽娜王瑶姜丽丽蒋雷; 关键词：卒中预后数据相关性

猪源APOBEC3F-N端结构域真核表达载体的构建: 2023年; 为了构建猪源APOBEC3F-N端结构域真核载体,探究APOBEC3F与猪繁殖与呼吸综合征(PRRSV)作用的功能区域,以猪源APOBEC3F-N端结构域为研究对象,根据APOBEC3F蛋白二级结构预测结果设计APOBEC3F-N端结构域引物,以pcDNA3.1(+)5’Flag-APOBEC3F重组质粒为模板进行APOBEC3F-N端结构域PCR扩增,通过无缝克隆技术连接扩增产物至pcDNA3.1(+)5’Flag,构建重组质粒pcDNA3.1(+)5’Flag-APOBEC3F-N,并进行测序鉴定。结果:试验扩增出APOBECF-N端结构域序列,并将该序列连接至pcDNA3.1(+)5’Flag载体,经测序鉴定pcDNA3.1(+)5’Flag-APOBEC3F-N重组质粒构建成功。结论:构建的猪源APOBEC3F-N端结构域真核表达载体可作为研究APOBEC3F与PRRSV相互作用机制的基础。; 石龙胡璇温贵兰; 关键词：结构域真核表达

识别α-synuclein N端结构域的单克隆抗体鉴定及免疫应用被引量：1: 2023年; 目的分析5种识别α-突触核蛋白(α-synuclein,α-syn)N端结构域的单克隆抗体1C16、2B8、2P21、3O18和1J6的特异性,为帕金森病(Parkinson s disease,PD)的早期诊断和免疫治疗提供抗体支持。方法体外蛋白重组技术获得人源α-syn蛋白(human-α-syn,h-α-syn)、鼠源α-syn蛋白(mouse-α-syn,m-α-syn)、β-syn蛋白、N端人源α-syn蛋白(α-syn/N)和去N端人源α-syn蛋白(α-syn/ΔN)。斑点印迹法鉴定5种单克隆抗体的特异性识别结构域,使用蛋白质印迹技术检测其对变性后的纯蛋白和鼠脑组织的识别情况。结果抗体1C16可以识别非变性的h-α-syn纯蛋白和小鼠脑组织中的变性的h-α-syn蛋白,不识别m-α-syn和β-syn。抗体1J6仅识别非变性的h-α-syn及α-syn/N纯蛋白,不识别变性后的全长α-syn纯蛋白和小鼠脑组织中的变性h-α-syn蛋白。结论筛选出的2种单克隆抗体具有特异性,可为本实验下一步生物标志物的酶联免疫吸附法测定检测和针对α-syn的免疫治疗提供基础。; 贾焕珍焦洁高歌杨慧; 关键词：帕金森病 Α-突触核蛋白蛋白纯化

TW型禽传染性支气管炎病毒S1蛋白N端结构域重组融合蛋白及其制备方法与应用: 本发明公开了TW型禽传染性支气管炎病毒S1蛋白N端结构域重组融合蛋白及其制备方法与应用。本发明将TW型IBV‑S1‑NTD、GCN4及人IgG1‑Fc串联构成融合表达抗原，对编码抗原的基因序列进行优化，然后通过人源HEK...; 赵烨游人荣张国中唐丽华赵静

雄激素受体N端结构域的抑制剂: 本公开提供用于抑制或降解雄激素受体的N‑端结构域的化合物和方法，以及用于治疗诸如前列腺癌等癌症的方法。; M·雷蒂格 M·E·荣格 D·E·N·G·拉尔拉格 J·安

红螯螯虾卵黄蛋白原N端结构域的生物信息学分析与蛋白的表达鉴定: 2022年; 为研究红螯螯虾(Cherax quadricarinatus)卵黄蛋白原N端结构域(vitellogenin N domain,VitN)的生物学功能并获得具有免疫特异性的红螯螯虾VitN融合蛋白,试验根据红螯螯虾卵黄蛋白原的mRNA序列(GenBank登录号为AF306784.1)获得VitN mRNA序列(编码第42~585位氨基酸),通过在线分析工具对红螯螯虾VitN进行生物信息学分析,并优化合成红螯螯虾VitN基因序列,构建重组表达质粒pET-28a-VitN,将其转化至大肠杆菌BL21(λDE3)感受态细胞中,经IPTG诱导,对红螯螯虾VitN融合蛋白进行表达、纯化、包涵体复性、Western-blot鉴定和浓度测定。结果表明:编码红螯螯虾VitN的氨基酸共544个,均为常见氨基酸,其中丙氨酸、缬氨酸和丝氨酸含量较多(占比分别为7.72%、7.72%和7.54%),色氨酸含量最少(仅占0.92%);红螯螯虾VitN的相对分子质量为64681,理论等电点为8.69,共含有8540个原子,分子式为C_(2671)H_(4260)N_(758)O_(818)S_(33),不稳定系数为31.49,脂肪系数为74.56,亲水性平均值为-0.45,亲水氨基酸数量明显多于疏水氨基酸数量;编码红螯螯虾VitN的氨基酸全部位于细胞膜外,不存在跨膜区;红螯螯虾VitN亚细胞定位在细胞外或细胞质内,不含常规信号肽,也不含Ⅰ型信号肽酶;红螯螯虾VitN共有67个磷酸化位点,其中丝氨酸磷酸化位点31个,苏氨酸磷酸化位点23个,酪氨酸磷酸化位点13个;红螯螯虾VitN的二级结构包括α-螺旋、β折叠、延伸链、无规则卷曲;三级结构包含具有脂质结合功能的lv-1n和lv-1c肽链结构,且呈现上下两个较为明显的区域,上半部分为sheet折叠结构富集区域,下半部分为α螺旋结构富集区域;在红螯螯虾第129~153位氨基酸和第396~402位氨基酸处各存在一个二硫键。优化后的红螯螯虾VitN基因片段大小约为1650 bp;经连接、转化、诱导,获得了大小约为64.7 ku的融合蛋白,其在大肠杆菌BL21(λDE3)感受态细胞中的主要表达形式为包涵体;最佳诱; 黄立斌武霞王瑞周明瑞黄光华黄黎明吕敏黄峥杨慧赞; 关键词：卵黄蛋白原 N端结构域生物信息学分析原核表达分离纯化

SARS-ConV-2病毒S蛋白膜外N端结构域高靶向性重组蛋白及其亚单位疫苗: 本发明提供了一种SARS‑ConV‑2病毒S蛋白膜外N端结构域高靶向性重组蛋白及其亚单位疫苗，编码所述重组蛋白的核苷酸序列选自如SEQ ID NO：8、SEQ ID NO：9、SEQ ID NO：11、SEQ ID NO...; 郑忠亮权春菊邓辉

新型冠状病毒核蛋白N端结构域的表达纯化以及晶体优化: 2022年; 本研究通过原核表达方法,探索新型冠状病毒核蛋白N端结构域的表达纯化,同时优化其蛋白晶体的生长条件,为新型冠状病毒核蛋白的结构生物研究提供基础。本研究合成N蛋白N端结构域基因序列,构建原核系统表达载体,利用大肠杆菌表达重组目的蛋白。Ni亲和层析和凝胶过滤层析的方法对N蛋白N端结构域重组蛋白进行纯化,SDS-PAGE电泳鉴定重组蛋白的纯度。本研究成功构建原核重组载体pET28b-N-N,大肠杆菌在37℃下进行扩增生长,16℃下进行诱导表达,80%目的蛋白以可溶蛋白的形式表达。Ni亲和纯化和凝胶过滤层析后,Quantity One软件进行蛋白胶积分分析,获得纯化后的积分占比,获得目的蛋白的纯度高达90%以上,利用Hampton的蛋白晶体试剂盒进行蛋白质晶体筛选,获得质量较高的N蛋白N端结构域蛋白质晶体。凝胶迁移试验(EMSA)验证了N蛋白N端结构域具有结合特定RNA片段的作用,明确了N蛋白N端结构域稳定新型冠状病毒基因组的功能。为进一步解析N蛋白N端结构域的三维结构以及后续抗体开发提供研究基础。; 陈铎刘永哲; 关键词：N蛋白晶体

人源蛋白Sec3 N端结构域的结构与功能机制研究: 李明桃

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