搜索到11210篇“ ELISA检测方法“的相关文章
- 禽白血病病毒抗体间接ELISA检测方法的建立与应用
- 2025年
- 为了建立一种禽白血病病毒(ALV)抗体检测方法,利用原核表达禽白血病病毒的p27蛋白建立一种检测ALV抗体的间接ELISA方法。结果显示,p27蛋白以包涵体形式表达,Western blot检测显示p27蛋白具有良好的反应活性,以p27蛋白为包被抗原建立的间接ELISA方法检测NDV、IBDV、IBV、AIV-H9、ILTV阳性血清均为阴性,最低抗体检出效价为1︰12800,与进口试剂盒的符合率为94.87%,检测临床血清样品的阳性率为14.02%。结果说明该研究建立的间接ELISA方法特异性强、敏感性高、符合性好,可为ALV的检测和净化等提供一种简单快速的方法。
- 苏晓月吕转平沈亚安赵明明唐思静
- 关键词：禽白血病病毒间接ELISA方法抗体检测
- 基于猪附红细胞体膜蛋白的间接ELISA检测方法的建立及初步应用
- 2025年
- 为建立有效的猪附红细胞体病间接酶联免疫吸附(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)检测方法,该试验利用猪附红细胞体水溶性膜蛋白为包被抗原,优化反应条件,建立了猪附红细胞体病间接ELISA检测方法。结果表明:提取的猪附红细胞体脂溶性膜蛋白的分子量主要集中在25~35Ku;猪附红细胞体水溶性膜蛋白的分子量主要集中在45~180Ku。建立的间接ELISA检测方法最佳反应条件:膜蛋白最佳包被浓度为0.15μg/μL;最佳封闭条件为5%脱脂乳37℃封闭2h;血清最佳稀释倍数为1∶320;酶标二抗最佳稀释倍数为1∶2000;TMB显色时间为37℃5min。特异性试验中,包被抗原与弓形虫、猪肺炎支原体,以及猪大肠杆菌阳性血清无交叉反应。重复性试验结果显示,批内变异系数为2.62%~8.89%,批间变异系数为5.49%~9.65%。对40份猪血清进行检测,建立的间接ELISA方法检出阳性样品19份,阳性率为47.5%。这说明建立的间接ELISA检测方法特异性强、敏感性高,将为猪附红细胞体病的临床诊断提供准确便捷的血清学检测手段。
- 徐颖王金琦王淼金鑫朴政霖韩天龙薛书江吕舟
- 关键词：猪附红细胞体膜蛋白间接ELISA检测方法抗体检测
- 基于Stefin抗原兔豆状囊尾蚴病间接ELISA检测方法的建立
- 2025年
- 【目的】研究半胱氨酸蛋白酶抑制剂Stefin的生物活性,建立豆状囊尾蚴病新的、高效便捷的血清学诊断方法。【方法】用Bradford法测定纯化后的重组蛋白浓度。以重组蛋白stefin作为包被抗原,建立间接ELISA诊断方法,通过从抗原包被浓度、包被条件、封闭条件、血清稀释度、酶标二抗稀释度、反应时间、温度等条件,以阳性血清与阴性血清的D_(450 nm)比值(P/N)作为判断标准优化反应条件,并对ELISA方法的敏感性、特异性、重复性进行检测。【结果】测定了重组蛋白浓度。间接ELISA检测方法临界值为0.352。阳性血清稀释倍数至1∶12800时,D_(450 nm)的值仍大于临界值。兔球虫、兔弓形虫等阳性血清检测显示D_(450 nm)均小于0.352。【结论】Stefin蛋白可以大批量获得,以stefin作为抗原建立的间接ELISA检测方法可以应用于豆状囊尾蚴病的诊断和流行病学调查研究,对豆状囊尾蚴病的有效防控具有重要的意义。
- 王由森石正发车亮张月玥羊倩倩李甲肖琴孙晓林王泽祥
- 关键词：豆状囊尾蚴BRADFORD间接ELISA
- 基于真核表达塞内卡病毒A VP2蛋白的间接ELISA检测方法
- 2025年
- 为建立检测塞内卡病毒A(SVA)抗体的间接酶联免疫吸附试验(ELISA),本试验利用昆虫杆状病毒表达系统表达SVA的主要结构蛋白和保护性抗原VP2,通过间接免疫荧光试验(IFA)验证VP2的免疫反应性,并使用氨基三乙酸镍(NiNTA)树脂亲和纯化重组VP2蛋白。以纯化的VP2蛋白为包被抗原,利用棋盘滴定法确定最优的抗原包被浓度和待检血清稀释度,通过优化反应条件和确定临界值,建立了检测SVA抗体的间接ELISA检测方法,并评估了其特异性、敏感性、重复性及与IFA的检测符合率。结果显示,重组VP2蛋白在杆状病毒感染的Sf9细胞内呈现可溶性表达,能够被SVA VP2特异性单克隆抗体2F5识别;经Ni-NTA纯化后,获得了分子量约31 kDa的重组VP2蛋白;间接ELISA的最佳抗原包被浓度为2μg/mL,最佳血清稀释度为1∶100,最佳酶标二抗稀释度为1∶10000;阴阳性临界值为0.287;与口蹄疫病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪流行性腹泻病毒、猪丁型冠状病毒、伪狂犬病毒和猪圆环病毒2型抗血清无交叉反应;批内与批间变异系数均低于10%。利用建立的间接ELISA检测了实验室保存的52份猪血清样本,与IFA的检测符合率为96.15%(50/52)。综上,本试验间接ELISA的成功建立为SVA抗体检测和流行病学调查提供了有力工具。
- 裴宗飞于凯蓝安欣娜陈俊雯张永宁
- 关键词：VP2蛋白昆虫杆状病毒表达系统间接ELISA
- 猫杯状病毒VP1蛋白原核表达及间接ELISA检测方法的建立
- 2025年
- 旨在建立一种灵敏、准确、高通量检测猫杯状病毒(feline calicivirus, FCV)抗体的间接ELISA方法。本研究通过优化表达条件,在大肠杆菌中表达FCV的VP1蛋白,对重组蛋白进行镍离子亲和层析纯化和透析复性,通过SDS-PAGE和Western blot验证重组蛋白;以重组VP1蛋白为包被抗原建立检测FCV抗体的间接ELISA方法,通过方阵滴定法确定抗原最佳包被浓度和抗体最佳稀释度,优化抗原包被条件、样品孵育时间、封闭液种类等条件,并对其性能进行验证。结果:表达的目的蛋白条带清晰、大小正确,与FCV阳性血清具有良好的反应性,建立的间接ELISA方法检测6份FCV阴性血清,猫细小病毒(feline parvovirus, FPV)阳性血清,猫疱疹病毒(feline herpesvirus, FHV)阳性血清均为阴性,对FCV阳性血清的最低检出效价可达1∶10 240,组间与组内变异系数均小于10%,与商品化试剂盒相比符合率达100%。综上,本研究建立的间接ELISA方法具有良好的灵敏度、重复性和符合率,与其他猫常见病毒阳性血清不发生交叉反应,可以用于临床样品的检测,为FCV感染的诊断、防控、疫苗免疫效力评价提供了技术手段。
- 姬晶晶王彬何昭群李嘉豪单衍可刘斐
- 关键词：原核表达间接ELISA
- 猪捷申病毒5型VP1蛋白的原核表达及间接ELISA检测方法的建立
- 2025年
- 旨在建立针对猪捷申病毒(porcine teschovirus,PTV)5型的间接ELISA检测方法,为其防控提供物质储备。PTV是猪的一种急性、烈性病原,以高发病率和高致死率为主要特征。其临床表现包括脑炎、肺炎、繁殖障碍、心肌炎及腹泻等多种症状。但该病原亚型众多,不同亚型间临床表现差异较大,且缺乏高效、特异的血清学检测方法,阻碍了对PTV-5的防治。本研究针对危害较大的PTV-5构建了pET-30a-VP1重组质粒,通过原核表达获得了VP1蛋白,以纯化的VP1为包被抗原,经条件优化成功建立了针对PTV-5的间接ELISA方法。该方法与常见猪源病毒标准阳性血清无交叉反应,最低检测稀释度为1∶3200,批内与批间变异系数均低于10%,具有良好的特异性、敏感性和重复性。利用该方法对东北地区279份临床样本进行检测,其阳性率为67.74%,与报道的流行情况相符。本研究建立的间接ELISA检测方法综合评价良好,为PTV-5的临床检测提供技术支持。
- 邵永恒倪民婷高梦玲汤娇张耕馨林圣宇刘光亮陈佳宁王雯慧
- 关键词：猪捷申病毒VP1蛋白原核表达间接ELISA
- 重组肺炎球菌蛋白疫苗抗原含量双抗体夹心ELISA检测方法的建立、优化及验证
- 2025年
- 目的建立基于肺炎球菌表面蛋白A(pneumococcal surface protein A,PspA)的重组肺炎球菌蛋白疫苗中P3296、P5668和PRX13种抗原含量的双抗体夹心ELISA检测方法,并进行优化、验证和初步应用,以期为该疫苗的质量监测提供可靠的检测方法。方法用P5668、P3296和PRX1纯化蛋白免疫雄性新西兰大白兔,免疫血清经Protein A-Sephaorse 4B亲和层析纯化后,获得P5668、P3296和PRX1多克隆抗体,以其为包被抗体,HRP标记的相应单克隆抗体为酶标抗体建立抗原双抗体夹心ELISA检测方法。优化包被抗体浓度(3种多克隆抗体均稀释为2、4、8μg/mL)及酶标抗体稀释度(HRP标记的P5668单克隆抗体按1∶4000和1∶8000稀释、HRP标记的P3296单克隆抗体按1∶40000和1∶60000稀释、HRP标记的PRX1单克隆抗体按1∶12000和1∶24000稀释)、封闭液种类(1%BSA、1%鱼皮明胶、1%脱脂乳粉和1%酪蛋白)、稀释液种类(纯化水、1×PBS、2×PBS)、稀释液pH(6.4、7.4、8.4),并验证方法的线性范围、特异性、准确性、精密性、耐用性。分别采用建立的方法及Lowry法检测P5668、P3296、PRX1纯化蛋白(各20批),并分析2种方法检测结果的相关性。将3批P5668、P3296和PRX1混合疫苗经丙磺酸内盐解吸附后,采用建立的方法检测P3296、P5668和PRX1抗原含量。结果纯化的P5668、P3296和PRX1多克隆抗体蛋白浓度分别为1.27、2.20和1.53 mg/mL。P3296、P5668、PRX1多克隆抗体最佳包被浓度均为4μg/mL,HRP标记的P5668、P3296、PRX1单克隆抗体最佳稀释度分别为1∶4000、1∶60000、1∶12000;最佳封闭液为1%BSA,稀释液为1×PBS,稀释液pH为7.4。P5668、P3296和PRX13种参考品在3.125~100 ng/mL范围内,与A_(450)呈良好的线性关系,且R^(2)均>0.99;3种抗原高、中、低浓度加标样本回收率均在80%~120%范围内;3种抗原检测方法均可检出相应的特异性抗原,对其他2种抗原检测结果远低于实际含量或未检出;重复性及中间精密性验证CV�
- 沙芳芳隋秀文周朝东朱婉玉徐丽爽韩强朱涛
- 关键词：双抗体夹心ELISA法抗原含量
- 胞内劳森菌夹心ELISA检测方法的建立与应用
- 2025年
- 【目的】通过建立检测胞内劳森菌(Lawsonia intracellularis,LI)的夹心ELISA方法,进行猪增生性肠炎(porcine proliferative enteropathy,PPE)灭活疫苗研制中抗原含量的测定。【方法】以LI为免疫原免疫新西兰大白兔制备抗LI多克隆抗体;同时免疫6周龄BALB/c小鼠,通过杂交瘤细胞技术制备抗LI单克隆抗体。用Western Blot、间接免疫荧光试验(IFA)和免疫过氧化物酶单层试验(IPMA)对制备的抗体进行鉴定。将单克隆抗体作为捕获抗体,多克隆抗体作为检测抗体,建立检测LI的夹心ELISA方法,优化反应条件,并对该方法进行特异性、敏感性和重复性评价。用优化后的检测方法对灭活后的LI进行定量检测。【结果】制备的多克隆抗体效价达1:409600。经三轮亚克隆后共筛选出3株阳性杂交瘤细胞,分别命名为1B7、3C7、4F10,腹水效价均为1:204800。3株单克隆抗体均与LI发生特异性反应,与肠致病性大肠杆菌(E.coli O157:H7)、猪霍乱沙门氏菌(Salmonella cholerasuis,S.Choleraesuis)、鼠伤寒沙门氏菌(Salmonella typhimurium,S.typhimurium)均无交叉反应。夹心ELISA方法经优化后条件为:捕获抗体为4F10;捕获抗体与检测抗体的工作浓度分别为1.25和0.625μg·mL^(-1);包被液为磷酸盐缓冲液,包被条件为4℃14 h;封闭液为1%明胶,封闭条件为37℃1.5 h;抗原孵育条件为37℃1 h;检测抗体孵育条件为37℃0.5 h;酶标抗体稀释度为1:16000,孵育条件为37℃1.5 h;显色条件为室温孵育10 min。该方法对其他常见的肠道病原菌检测均为阴性,对LI的最低检测限为1×10^(5)个/mL,且批内、批间变异系数均小于10%。LI浓度在1×10^(5)—1×10~8个/mL范围内与P/N值呈线性关系,标准方程:y=2.7349x-11.643(R^(2)=0.9966)。使用该方法对该实验室制备的PPE灭活疫苗进行抗原定量,结果显示灭活前后抗原含量基本不变,且两组疫苗样品定量结果批内重复性良好。120份猪临床粪便样品检测结果显示,
- 洪润婧周红蔺辉星范红结
- 关键词：单克隆抗体夹心ELISA
- 抗营养因子大豆凝集素夹心ELISA检测方法的建立
- 2025年
- 为建立灵敏、特异的大豆凝集素(soybean agglutinin,SBA)酶联免疫吸附(enzyme-linked immuno sorbent assay,ELISA)检测方法。试验以SBA鼠源单克隆抗体为捕获抗体,SBA兔源多克隆抗血清为检测抗体,羊抗兔酶标抗体为二抗,通过对抗体的工作浓度及反应时间优化,建立SBA的双抗体夹心ELISA检测方法,并用建立的方法检测大豆、大豆粕、膨化大豆粕及酶解大豆粕中SBA含量。结果表明:建立SBA双抗夹心ELISA检测方法的检测范围为39.06~1250 ng/mL,检出限为3.00 ng/mL,样品添加回收率为77.96%~116.15%,变异系数为6.11%~18.34%,与大豆中胰蛋白酶抑制因子BBI、KTI,大豆球蛋白glycinin及大豆伴球蛋白-conglycinin等其他抗营养因子均无交叉反应。大豆中SBA含量显著高于大豆粕、膨化大豆粕及酶解大豆粕(P<0.05);大豆粕中SBA含量显著高于膨化大豆粕及酶解大豆粕(P<0.05);膨化大豆粕显著高于酶解大豆粕中SBA含量(P<0.05)。综上,本研究建立了灵敏度高、特异性好的SBA双抗夹心ELISA检测方法,该方法可用于饲料中大豆凝集素的监控检测。
- 胡骁飞杨继飞邢云瑞庞杏豪孙亚宁魏凤仙
- 关键词：大豆凝集素抗营养因子多克隆抗体单克隆抗体夹心ELISA
- 抗猪流行性腹泻病毒卵黄抗体竞争ELISA检测方法的建立
- 2025年
- 为能够快速检测猪流行性腹泻病毒(PEDV)特异性抗体水平并评估疫苗免疫效果,采用PEDV病毒液作为包被抗原,抗PEDV卵黄抗体(IgY)作为竞争抗体,通过方阵法确定反应的最优条件,建立一种抗PEDV的竞争性ELISA检测方法。实验优化结果表明最佳条件为:37℃孵育2 h后置于4℃过夜进行抗原包被;使用10 g/L BSA于37℃封闭2 h;血清稀释度为1∶5;竞争性一抗质量浓度为0.01 g/mL;二抗稀释度为1∶3000;血清、抗体均在37℃孵育30 min;TMD底物显色液在25℃避光反应15 min。设定阴阳性的临界值分别为阳性(PI)≥0.420,阴性(PI)<0.325后,在对30份血清样本进行标准化试剂盒与本研究方法的检测对比中,符合度为78.3%;该方法的批内和批间重复变异系数在1.1%~8.7%之间,均小于10%,证明其具有较好的重复性和可靠性。因此,该抗PEDVIgY竞争ELISA为PEDV感染的精准防控提供了一种有效工具。
- 李桂珍魏开赟李嘉彬李舜付强马春全邹永新梅敏敏刘敏芳王亚欣
- 关键词：猪流行性腹泻病毒卵黄抗体竞争ELISA
