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Egr-1启动子调控的hNIS基因转染介导宫颈癌放射性核素显像和治疗研究
目的 构建含早期生长反应基因-1(Egr-1启动子调控的人钠碘转运体(hNIS)基因重组质粒,并转染至人宫颈癌Hela细胞中特异性表达。探讨Egr-1启动子调控的hNIS基因介导宫颈癌放射性核素显像和治疗的可能...
许袁琦
关键词:EGR-1钠碘转运体宫颈癌
Egr-1启动子调控hNIS基因的重组质粒构建及转染细胞株的建立被引量:1
2012年
目的构建早期生长反应基因-1(Egr-1)启动子调控人钠碘转运体(hNIS)基因的重组质粒并稳定转染人宫颈癌细胞株Hela,评价Egr-1启动子对hNIS蛋白功能的辐射诱导作用。方法以Egr-1/pMR18T为模板PCR扩增Egr-1启动子序列,亚克隆至真核表达载体FL*-hNIS/pcDNA3,构成重组质粒Egr-1-hNIS/pcDNA3,酶切电泳鉴定,通过FuGENE HD转染入Hela细胞,G418筛选抗性克隆,获取单克隆Hela-Egr-1-hNIS。分别采用流式细胞仪、RT-PCR检测Hela-Egr-1-hNIS细胞系中NIS基因和NIS蛋白的表达。动态摄取碘-125实验观察Hela-Egr-1-hNIS细胞和前期研究所得细胞株Hela-NIS(+)给予不同剂量的X线辐照前后的摄碘功能。未转染的Hela细胞作为阴性对照组。结果成功构建重组质粒Egr-1-hNIS/pcDNA3,转染Hela细胞后获得了稳定表达细胞系Hela-Egr-1-hNIS,流式细胞仪测得NIS表达效率为11.2%;RT-PCR检测到Hela-Egr-1-hNIS有NIS mRNA的转录,而对照组无NIS蛋白表达。动态摄碘实验提示Hela-Egr-1-hNIS细胞摄碘能力比阴性对照Hela细胞提高了13倍;辐照后摄碘能力增强,在0~6 Gy范围内与辐射剂量成正相关(r=0.960,P<0.05);而Hela-NIS(+)组辐照后摄碘功能下降,与辐射剂量无相关性(r=-0.770,P>0.05)。结论成功构建Egr-1启动子调控的稳定表达hNIS蛋白的Hela-Egr-1-hNIS细胞系,该细胞系具有较强的摄碘功能及辐射诱导作用,有望在体内治疗中获得更好的治疗效果。
吴强乐许袁琦黄宏石怡珍刘增礼
关键词:早期生长反应基因-1钠碘转运体宫颈肿瘤放射性核素
HRE对A549细胞中Egr-1启动子辐射诱导表达的影响被引量:1
2010年
目的构建乏氧/辐射双敏感启动子介导的增强型绿色荧光蛋白表达载体,探讨HRE对A549细胞中Egr-1启动子在乏氧和常氧条件下辐射诱导表达的影响。方法利用化学合成HRE上、下链,PCR扩增得到双链HRE;利用基因重组技术构建HRE/Egr-1双敏感启动子介导增强型绿色荧光蛋白的表达载体pcDNA3.1-HRE/Egr-1-EGFP,经酶切、PCR和测序鉴定正确后,质粒经脂质体介导转染肺腺癌A549细胞,不同剂量照射和不同浓度乏氧后,流式细胞术检测EGFP的表达,以此反映Egr-1的表达特性。结果酶切、PCR和测序鉴定pcDNA3.1-HRE/Egr-1-EGFP质粒构建正确。流式细胞术结果显示常氧条件下,不同剂量X射线照射后,A549细胞中EGFP表达在随着时间延长而逐渐增加,2Gy和4 Gy照射后12 h时达到最大,而6 Gy、8 Gy和10 Gy照射后在8 h时达到最大,而后逐渐降低,与0 h表达比较具有显著性差异(P<0.05,P<0.01)。0.1%-2.5%的氧浓度条件下,EGFP表达随着氧浓度和剂量的增加而逐渐增加,在1%氧浓度时表达量最大,与常氧条件下不同剂量照射后8 h表达比较具有显著性差异(P<0.05,P<0.01);在5%-10%氧浓度条件下,EGFP表达与常氧条件下基本一致。结论 HRE具有增强A549细胞中Egr-1启动子诱导表达的特性,对肿瘤基因-放射治疗具有参考意义。
杨艳明刘林林刘念王欣王志成
关键词:早期生长反应基因1增强型绿色荧光蛋白
人Egr-1启动子的克隆及其在肿瘤细胞中的辐射诱导反应被引量:3
2009年
目的:克隆人Egr-1基因的启动子,插入荧光素酶报告基因载体中,并检测电离辐射对其活性的影响。方法:采用PCR技术从人乳腺癌细胞系MCF-7基因组中扩增出Egr-1启动子,将其克隆到pGL3-basic载体中;将重组质粒转染人肿瘤细胞,测定Egr-1启动子在不同辐射条件下转录活性的改变。结果:成功构建了Egr-1启动子的荧光素酶报告基因;在不同剂量的γ射线照射后,Egr-1启动子活性均明显高于未照射组;在同一剂量照射后48 h,Egr-1启动子活性达峰值。结论:本实验构建的Egr-1启动子具有辐射激活的功能,为进一步研究放射-基因治疗奠定了基础。
徐小洁丁丽华王凌雪秦玺程龙蒋凯叶棋浓
关键词:EGR-1启动子启动子活性
人Egr-1启动子调控的自杀基因真核表达载体的构建及其在鼻咽癌细胞株中的放射诱导表达
2009年
[目的]构建由人Egr-1放射诱导性启动子调控的自杀基因靶向性真核表达载体,并转染人鼻咽癌细胞株CNE,比较射线诱导前后自杀基因在鼻咽癌细胞中的表达情况。[方法]根据Genebank数据库提供的人Egr-1启动子基因序列,设计一对引物克隆人Egr-1启动子,采用PCR、酶切、连接等分生物学技术,构建pcDNA3.1(+)-Egr-1-CD重组质粒表达载体,并利用脂质体转染方法转染人CNE细胞株,经G418筛选后获得阳性细胞克隆。RT-PCR分析鉴定0、5、10、15、20Gy放射剂量进行6MVX线照射对CD基因表达的影响。[结果]经PCR、酶切、测序等证实了pcDNA3.1(+)-Egr-1-CD重组靶向性质粒表达载体构建成功,G418筛选所得到的CNE细胞阳性克隆经不同放射剂量的诱导后,RT-PCR结果显示体外放射线照射可显著提高CNE细胞中CDmRNA的表达水平,在10Gy及15Gy组CDmRNA的表达水平明显增高,尤以15Gy组CDmRNA的表达水平最高,在20Gy组CDmRNA的表达水平反而下降。[结论]pcDNA3.1(+)-Egr-1-CD重组质粒表达载体构建成功,并成功转染人鼻咽癌细胞株,建立了基因表达与放射的剂量效应关系,为后续的临床应用研究奠定基础。
吴君心谢云青邱素芳郑秋红潘建基
关键词:EGR-1启动子自杀基因真核表达载体
氟脲嘧啶诱导Egr-1启动子转录调控Flt3配基的基因表达
2009年
目的:探讨5-氟脲嘧啶(5-Fu)诱导Egr-1启动子调控造血生长因基因表达对化疗后造血损伤的恢复作用。方法:构建携带Egr-1调控序列{1}的Flt3配基(FL)和EGFP双顺反基因pCIneo真核表达载体(Egr-EF);通过脂质体转染骨髓基质细胞系HFCL并称为HFCL/EF;采用流式细胞术和倒置荧光显微镜观察EGFP绿色荧光表达的阳性细胞;采用RT-PCR、Western blot和ELISA检测5-Fu对HFCL/EF细胞FL表达的影响;流式细胞术检测经5-Fu处理的HFCL/EF细胞上清对CD34+细胞和CFU-GM的增殖作用;采用活性氧抑制剂N-乙酰半胱氨酸鉴定化疗通过活性氧诱导Egr-1启动子CArG序列调控下游基因表达的特异性。结果:构建了Egr-1调控序列{1}的双顺反基因表达载体(Egr-EF);经5-Fu处理后HFCL/EF细胞培养上清液较未加5-Fu组的FL含量明显增高并且对CD34+细胞和CFU-GM具有较强的扩增作用(P<0.01);在5-Fu处理的HFCL/EF细胞中,EGFP活性、FLmR-NA和FL蛋白表达增强,而且,N-乙酰半胱氨酸明显减少FL含量。结论:5-Fu诱导Egr-1启动子调控的造血生长因基因表达对化疗药物处理后的造血损伤具有一定的恢复作用。
杜楠裴雪涛周进明孙君重郝怡鑫
关键词:EGR-15-氟脲嘧啶FLT3配基骨髓基质细胞
阿霉素诱导Egr-1启动子调控的造血因GM-CSF基因表达对荷瘤小鼠造血功能恢复的影响被引量:1
2009年
本研究探讨阿霉素(ADM)诱导早期生长因(Egr-1)启动子调控的造血因基因表达对荷瘤小鼠化疗后造血功能恢复的作用。将构建的携带有Egr-1启动子的粒-巨噬细胞集落刺激因(GM-CSF)cDNA和增强型绿色荧光蛋白(EGFP)cDNA双顺反真核表达载体导入基质细胞HFCL后,输入重症联合免疫缺陷(SCID)小鼠体内。实验小鼠随机分4组:①ADM诱导的HFCL/EG组(HFCL/EG+ADM组),②ADM诱导的HFCL组(HFCL+ADM组),③单纯输注HFCL/EG组(HFCL/EG组)和④单纯输注HFCL组(HFCL组),每组6只动物。观察外周血象动态改变,用流式细胞术检测eGFP+人基质细胞,用RT-PCR和Western blot分别检测GM-CSFmRNA及其蛋白的表达。结果表明:化疗组与未化疗组相比外周血白细胞降低,而且下降幅度较低,恢复加快;各组间CFU-GM数无显著性差异;肿瘤抑制率与化疗相关,而与外源基因表达不相关;ADM处理后实验组小鼠骨髓可见绿色荧光阳性的基质细胞;RT-PCR和Western blot显示GM-CSF mRNA和GM-CSF蛋白表达增强。结论:ADM诱导的Egr-1启动子造血因基因疗法具有化疗后促进造血恢复作用。
杜楠裴雪涛周进明孙君重赵晖付艳郝怡鑫
关键词:启动子GM-CSF阿霉素
辐射与化疗诱导Egr-1启动子调控GM-CSF基因表达的实验研究
2009年
目的探讨辐照与阿霉素诱导早期生长反应因(Egr-1启动子调控造血生长因基因表达对造血损伤的恢复作用。方法构建携带Egr-1启动子且下游连接GM-CSF和EGFP基因的真核表达载体(Egr-EG);脂质体介导转染人骨髓基质细胞系HFCL;经^60Coγ源辐照2.5Gy或3μmol/L的阿霉素处理后,采用FACS检测转染细胞绿色荧光蛋白的表达,N-乙酰半胱氨酸(活性氧抑制剂)鉴定辐照及阿霉素处理诱导Egr-1调控下游基因表达的特异性;采用ELISA和RT-PCR检测辐照或阿霉素对HFCL/EG细胞GM-CSF蛋白及mRNA表达的影响;观察辐照及阿霉素处理后的细胞上清对CFU-GM形成的影响。结果在辐照和阿霉素处理的HFCL/EG细胞中均显示EGFP和GM-CSF表达较未处理组明显增强(t=5.11,P〈0.01),未处理组EGFP^+细胞占1.2%,阿霉素组EGFP^+细胞占15.2%,辐照组EGFP^+细胞占18.2%;N-乙酰半胱氨酸明显减少辐照和阿霉素处理后细胞的绿色荧光蛋白表达强度,两组间差异无统计学意义(P〉0.05);辐照和阿霉素处理组细胞上清促进CFU-GM增殖作用较未处理组明显增强(t=4.37,P〈0.01)。结论辐照和阿霉素诱导Egr-1启动子调控的造血生长因基因表达可能对其所致的造血损伤具有一定的恢复作用。
杜楠裴雪涛周进明孙君重付艳赵晖
关键词:电离辐射阿霉素粒-巨噬细胞集落刺激因子
氟尿嘧啶诱导Egr-1启动子调控造血因基因表达对造血恢复的影响
2009年
目的探索5-氟尿嘧啶(5-Fu)诱导EgT-1启动子调控造血生长因基因表达对化疗后造血损伤的恢复作用。方法构建携带Egr-1调控序列{1}的GM—CSF和EGFP双顺反基因pCIneo真核表达载体(Egr-EG);通过脂质体转染骨髓基质细胞系HFCL,挑出C418抗性的阳性克隆(HFCL/EG);采用流式细胞仪和倒置荧光显微镜观察EGFP绿色荧光表达的阳性细胞;在加入5-Fu的HFCL/EG细胞培养体系中,采用RT-PCR、Western印迹和ELISA检测GM—CSF的表达;采用活性氧抑制剂N-乙酰半胱氨酸鉴定化疗通过活性氧诱导Egr-1启动子CarG序列调控下游基因表达的特异性。将HFCL/EG细胞输入荷瘤的重症联合免疫缺陷(SCID)小鼠体内,对其实施5-Fu化疗,观察外周血象动态改变和对肿瘤的影响。结果构建了Egr-1调控序列{1}的双顺反基因表达载体(Egr—EG);在HFCL/EG细胞中证实有外源性基因EGFP和GM-CSF的表达,在5-Fu处理后HFCL/EG细胞培养上清液GM—CSF含量较未加5-Fu组明显增高(P〈0.01);RT-PCR和Western印迹显示化疗后HFCL/EG细胞GM-CSF mRNA和GM—CSF蛋白表达增强。在5-Fu处理的HFCL/EG细胞中,N-乙酰半胱氨酸明显减少GM—CSF含量。实验组与对照组相比外周血白细胞下降幅度明显减轻,恢复加快,而各组间肿瘤抑制率与化疗组相关,而与外源基因表达无明显的差异。结论5-Fu诱导Egr-1启动子调控的造血生长因基因表达对化疗后的造血损伤具有一定的恢复作用。
杜楠裴雪涛肖文华孙君重付艳赵晖王希良
关键词:粒-巨噬细胞集落刺激因子
Egr-1启动子辐射诱导的基因表达特性被引量:2
2008年
目的:研究电离辐射作用下早期生长反应因1(Egr-1)启动子调控增强绿色荧光蛋白(EGFP)报告基因在人结肠癌细胞SW480中的表达。方法:利用基因重组手段构建质粒Egr-1-EGFP;阳离脂质体介导转染人结肠癌细胞SW480,给予不同剂量γ射线照射,流式细胞仪检测照射后不同时间点EGFP的表达。结果:电离辐射能够诱导Egr-1启动子调控下游基因的表达,且6 Gy照射后最为明显,在照射后24 h达到高峰。结论:Egr-1启动子具有电离辐射诱导特性。
朱慧曹传华谢丛华
关键词:EGR-1启动子基因表达电离辐射

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裴雪涛
作品数:622被引量:1,713H指数:19
供职机构:军事医学科学院野战输血研究所
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梁硕
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