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枸杞LbAPX基因cDNA片段的克隆及生物信息学分析被引量：1: 2020年; 本实验通过TRIZOL法提取了"宁杞1号"花药总RNA,采用SMART PCRcDNA Synthesis Kit试剂盒合成cDNA,根据先前质谱鉴定的肽段序列搜索数据库中与之相似保守序列设计引物,利用RT-PCR技术克隆了枸杞Lb APX基因的cDNA片段,并进行生物信息学分析。结果表明,LbAPX基因cDNA片段共长671 bp,其中的ORF长为456 bp,编码146个氨基酸。经cDNA编码产物的同源性和系统发生分析表明,枸杞LbAPX基因属于APX超基因家族,其氨基酸的序列与马铃薯的同源性高达96%。; 郭宁强; 关键词：枸杞基因克隆生物信息学

以CA19-9 cDNA片段为模板制备RNA探针的方法: 本发明提供了一种以CA19‑9 cDNA为模板制备RNA探针的方法。该方法包括以下步骤：针对CA19‑9 mRNA序列筛选多个靶序列，对于每个靶序列设计至少一对引物，所述引物的PCR扩增产物为多重DNA片段，所述多重DN...; 徐学明鲁隼冯俊清; 文献传递

麦长管蚜羧酸酯酶基因cDNA片段克隆及吡虫啉胁迫对其表达的影响被引量：2: 2018年; 羧酸酯酶在昆虫对杀虫剂的解毒代谢过程中发挥重要作用,本研究旨在分析吡虫啉胁迫对麦长管蚜羧酸酯酶基因表达的影响。采用同源克隆方法克隆麦长管蚜羧酸酯酶基因cDNA片段,实时荧光定量PCR技术检测羧酸酯酶基因在不同吡虫啉剂量下的表达量变化。扩增所得麦长管蚜羧酸酯酶基因cDNA片段大小为392 bp,命名为SaEST 3(GenBank登录号KY 441614),该片段编码130个氨基酸残基,分子量14 kD,等电点4.93。序列同源性比对及生物信息学分析表明SaEST3推导的氨基酸序列与豌豆长管蚜、麦双尾蚜、夹竹桃蚜、桃蚜的羧酸酯酶氨基酸序列相似性较高,分别为94%、85%、80%和80%。实时荧光定量PCR结果显示,不同吡虫啉处理剂量下,SaEST3 m RNA的相对表达量均上调。克隆得到的基因片段为麦长管蚜羧酸酯酶基因片段,吡虫啉对麦长管蚜羧酸酯酶基因SaEST3表达有一定的影响。; 白微微高海峰张航杨安沛李广阔; 关键词：羧酸酯酶麦长管蚜吡虫啉克隆

黄鳝性逆转过程中Gsdf基因cDNA片段的克隆和表达分析: 2017年; 通过RT-PCR法从黄鳝性腺中首次克隆获得黄鳝Gsdf(gonadal soma-derived factor)基因的片段序列,该片段序列长218 bp,编码72个氨基酸。氨基酸序列分析表明黄鳝Gsdf基因片段与其他物种的相似性在61%~76%之间,其中与舌齿鲈(Dicentrarchus labrax)GsdfⅠ型、舌齿鲈GsdfⅡ型同源性最高,均为76%;系统进化树显示,黄鳝Gsdf与尼罗罗非鱼(Oreochromis niloticus)Gsdf基因聚成一支,与鲈形目鱼类亲缘关系较近。此外,不同性腺组织的基因检测结果显示,黄鳝Gsdf在卵巢和间期性腺的表达量很低,两者没有显著性差异(P>0.05);在精巢组织中的表达量显著高于卵巢、间期性腺组织的表达量(P<0.05)。上述结果表明Gsdf基因可能在黄鳝的性腺尤其是精巢的分化和发育过程中起着重要的作用。; 潘丽莎荣萍吴昊伟王倩曲宪成; 关键词：黄鳝性逆转基因克隆与表达实时荧光定量PCR

以CA19-9 cDNA片段为模板制备RNA探针的方法: 本发明提供了一种以CA19-9？cDNA为模板制备RNA探针的方法。该方法包括以下步骤：针对CA19-9？mRNA序列筛选多个靶序列，对于每个靶序列设计至少一对引物，所述引物的PCR扩增产物为多重DNA片段，所述多重DN...; 徐学明鲁隼冯俊清; 文献传递

柠条锦鸡儿抗坏血酸过氧化物酶基因(CkAPX)和谷胱甘肽还原酶基因(CkGR) cDNA片段的克隆及表达分析被引量：2: 2016年; 抗坏血酸过氧化物酶(APX)和谷胱甘肽还原酶(GR)是植物体内抗坏血酸-谷胱甘肽循环系统的重要组成部分,是植物清除活性氧(ROS)的主要酶。根据前期对不同干旱地区柠条锦鸡儿叶片的转录组测序结果,克隆了2个与清除过氧化氢相关的基因:抗坏血酸过氧化物酶基因(CkAPX)和谷胱甘肽还原酶基因(CkGR)片段,长度分别为509bp和519bp。序列分析表明APX蛋白和GR蛋白在不同物种中相对保守,在已克隆APX和GR基因的物种中,柠条APX蛋白与豆科植物蒺藜苜蓿(Medicago truncatula)的亲缘关系最近,GR蛋白与豆科植物鹰嘴豆(Cicer arietinum)的亲缘关系最近。对安塞、神木和东胜的柠条叶片中的CkAPX和CkGR的表达量和酶活性分析表明,随着降雨量的减少干旱叶片中柠条CkAPX和CkGR的表达量和活性均呈上升趋势,说明此2基因在增强柠条锦鸡儿的抗旱性方面起重要作用。; 康太武宏豆逯佰艳龙晓刚龚春梅白娟; 关键词：柠条锦鸡儿抗坏血酸过氧化物酶谷胱甘肽还原酶抗旱性

米蛾β-actin基因cDNA片段的克隆及表达量检测: 2016年; 为克隆米蛾[Corcyra cephalonica(Stainton)]β-actin基因cDNA片段,建立米蛾β-actin基因实时荧光定量PCR(qRT-PCR)方法,并评估其在实时荧光定量研究中作为内参基因的可靠性,利用反转录PCR(RT-PCR)技术克隆获得米蛾β-actin基因cDNA片段,采用SYBR GreenⅠ染料法建立qRT-PCR方法,检测在米蛾卵、幼虫、蛹和成虫4个虫态中β-actin基因的表达量。获得了长为822bp的米蛾β-actin基因片段(Gen Bank accession:KJ599569),编码273个氨基酸残基;荧光定量标准曲线的Ct值检测范围为13~28,扩增效率为90.1%,相关系数R^2=0.992,溶解曲线分析结果显示产物为特异的单峰,其Tm值为(84±0.5)℃,符合定量要求;实时荧光定量结果表明,β-actin基因在米蛾不同发育历期中的表达水平无显著性差异(p>0.05)。成功建立了米蛾β-actin基因qRT-PCR方法 ,β-actin基因可以作为米蛾基因表达定量研究中的可靠内参基因。研究结果为β-actin作内参基因进行米蛾功能基因表达差异研究奠定了分子基础。; 丛斌张明珠胡志凤段立佳王晓静张统书董辉; 关键词：米蛾 Β-ACTIN基因反转录PCR 实时荧光定量PCR

三种去除非全长cDNA片段方法的比较研究: 2015年; 以小桐子的雌花为材料,用胶回收法、CHROMA-SPIN 400柱离心法和CHROMA-SPIN 400柱自流法分别去除全长cDNA文库构建中非全长cDNA小片段,从去除效果、回收率、成本、实验时长、一次处理量这5个方面对3种方法进行了综合比较与评价。结果表明:CHROMA-SPIN 400柱自流法在回收率方面有明显优势;胶回收法与CHROMA-SPIN 400柱离心法的回收率接近,但胶回收法成本低于CHROMA-SPIN 400柱法,且对非全长片段去除更彻底。反倒是最新的CHROMA-SPIN 400柱离心法在关键方面都不及另两种方法,不提倡使用,结论为胶回收法是去除全长cDNA溶液中非全长片段的理想方法。; 田飞李翠新何德; 关键词：小桐子

西花蓟马细胞色素P450基因cDNA片段克隆与mRNA表达分析被引量：1: 2015年; 细胞色素P450介导的解毒作用增强是昆虫对杀虫剂产生抗性的重要机制。本文通过RT-PCR克隆了西花蓟马CYP4家族5个细胞色素P450基因c DNA片段。多重序列比对发现,这5个基因在氨基酸水平的一致性在40%-76%之间。采用实时荧光定量PCR对5个CYP4基因的mRNA表达水平的分析发现,阿维菌素抗性品系CYP4-1、CYP4-2和CYP4-5的表达水平分别是敏感品系的3.50、4.00和2.48倍,表明西花蓟马对阿维菌素的抗性可能与这3个CYP4基因的过量表达相关。; 董红刚谢志娟杜予州王建军; 关键词：西花蓟马细胞色素P450 RT-PCR 实时荧光定量PCR

烟草PHOT2基因cDNA片段的克隆与RNAi表达载体的构建: 2015年; 采用生物信息学方法,以番茄(Solanum lycopersicum)PHOT2基因序列为探针,比对了烟草(Nicotiana tabacum)EST数据库,并根据获得的同源性较高的EST序列设计引物,PCR扩增了烟草K326PHOT2基因的c DNA片段。结果表明,成功扩增出了PHOT2基因的c DNA片段,并构建了干扰烟草PHOT2基因表达的RNAi表达载体。; 乔新荣陈琼郭桥燕徐长水; 关键词：向光素克隆

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