搜索到1911篇“ CDNA文库构建“的相关文章
西伯利亚杏花芽酵母cDNA文库构建及质量评价
2025年
【目的】西伯利亚杏Prunussibirica是我国重要的生态兼木本粮油树种,由于其花期早,易受春季“倒春寒”影响,导致其产量不稳,严重制约其产业的发展。本研究利用西伯利亚杏花芽为材料构建酵母杂交cDNA文库,该文库可用于西伯利亚杏花芽分化及休眠的转录因子和互作蛋白的筛选,为今后西伯利亚杏花芽分化及休眠分子调控机制研究提供技术支撑。【方法】以西伯利亚杏花芽分化及休眠过程中15个时期的花芽为材料,进行总RNA提取以及mRNA的分离与纯化,并利用SMART同源重组技术构建cDNA文库。将cDNA文库转化至酵母感受态细胞中,即得到cDNA酵母文库。【结果】鉴定结果表明,cDNA文库库容为5.24×10^(7)CFU/mL,插入片段长度主要分布在750~2000 bp,且平均插入长度在1000 bp以上,重组率为95.83%,24个阳性克隆经测序比对后,成功检测到20个功能注释基因,其中有3个序列(钙结合蛋白CML31、组蛋白H3.3、转录调节因子ADA2)与植物休眠及低温胁迫相关。【结论】西伯利亚杏花芽分化及休眠过程的酵母杂交cDNA文库构建质量较高,具有完整的基因信息,且符合酵母文库的筛选标准。该文库构建能够为解析西伯利亚杏花芽分化及休眠相关的分子调控网络机制奠定基础。
陈俊兴包文泉敖敦蔺悦陈一潇伊茹徐宛玉王淋
关键词:花芽CDNA文库
生物胁迫下黄瓜酵母双杂交cDNA文库构建与鉴定
2025年
以黄瓜抗病高代自交系D9320为试验材料,采用Gateway技术构建了黄瓜霜霉病和棒孢叶斑病菌胁迫下黄瓜酵母双杂交cDNA文库。结果表明:酵母文库克隆数为350个,文库滴度为3.5×10^(7)CFU/mL,重组率达到100%,插入片段长度在750~2000bp,平均片段长度超过1000bp。文库容量和重组率及插入片段大小均说明霜霉病菌和棒孢叶斑病菌胁迫下黄瓜酵母双杂交cDNA文库构建成功,可用于黄瓜双抗机制互作蛋白的筛选。
刘东潘春清张艳菊
关键词:黄瓜霜霉病黄瓜棒孢叶斑病CDNA文库酵母双杂交
乙烯诱导的油茶酵母cDNA文库构建及CoFAD7上游调控因子筛选
2024年
外施乙烯可促进油茶种仁α-亚麻酸(α-linolenic acid,ALA)积累,FAD7是影响ALA合成的关键基因。为了研究油茶CoFAD7表达的分子调控机制,本研究克隆CoFAD7的启动子,构建乙烯诱导的油茶种仁酵母单杂交cDNA文库,并通过酵母单杂交技术筛选与CoFAD7启动子结合的上游调控因子。结果表明,1395 bp的CoFAD7启动子序列含有多种激素调节与环境胁迫相关的顺式元件及转录因子结合元件。构建的cDNA文库库容为9.5×10^(6) CFU·mL^(-1),平均插入片段长度约1000 bp。通过酵母单杂交筛选获得4个转录因子AP2-3、NFYC-1、F-box和ZFP1,可以与CoFAD7启动子结合。以上结果为进一步探究CoFAD7基因响应乙烯调控ALA含量的分子机理提供参考。
马晓玲陈佳昕柏芮欧阳翔
关键词:油茶酵母单杂交CDNA文库转录因子
灰霉菌胁迫下番茄叶片cDNA文库构建及SlbZIP1互作蛋白筛选鉴定
2024年
为筛选番茄在灰霉菌侵染下与bZIP转录因子SlbZIP1(Solyc01g008730.2.1)互作的蛋白,以感病番茄Moneymaker为材料,提取接种灰霉菌胁迫处理后0、24、48、72、96 h的番茄叶片的总RNA,通过三框法构建cDNA酵母文库,计算文库库容量、重组效率。同时,以SlbZIP1为诱饵,利用构建文库探索其在灰霉菌侵染过程中的互作蛋白,并对其中可能参与病原菌防御反应的潜在蛋白在酵母中进行互作验证。结果表明,酵母文库库容达到1.5×10^(6)CFU,重组效率为98%。酵母双杂交共计筛选到14个与SlbZIP1互作的潜在蛋白。进一步互作验证表明,SlbZIP1与谷氧还蛋白SlGRXC9、SlGRXC6、bZIP转录因子SlTGA2.2及钙调蛋白SlCaM1均存在互作。上述结果可为进一步阐明SlbZIP1对腐生型真菌病害的抗病分子机制奠定基础。
马燕韩玉龙吴兴兴李爽丁小雨杨玉婷
关键词:番茄灰霉菌CDNA文库
番石榴果实酵母cDNA文库构建及评价
2024年
酵母文库是研究蛋白互作及转录调控的重要基础,构建番石榴果实酵母cDNA文库,是研究番石榴果实采后成熟复杂分子机制的重要途径。首先提取高质量番石榴mRNA,接着合成双链cDNA文库,再通过Gateway位点特异性重组手段将cDNA文库构建至酵母pGADT7-DEST表达载体上。检测结果显示,次级酵母cDNA文库库容量约为1.56×10^(7)cfu,插入cDNA片段长度为0.85~5.00kb,平均长度大于1.00 kb,且多态性丰富,表明文库质量较好。该酵母cDNA文库构建为获取与果实成熟关键转录因子和系统性研究果实功能基因转录调控机制奠定了基础。
萧允艺赵晓梦于泽浩刘金丰
关键词:番石榴文库构建转录调控
马铃薯酵母双杂交cDNA文库构建及StIPT互作蛋白筛选鉴定
2024年
马铃薯(Solanum tuberosum)在生长发育过程中容易受到各种生物及非生物胁迫,从而严重影响其营养物质的积累,造成品质与产量的下降。细胞分裂素(CK)是一类调控胞质分裂、芽的形成和分化的植物激素,在植物抵御外界胁迫方面发挥重要作用。异戊烯基转移酶(IPT)是CK合成途径中的第一个限速酶,能够有效调控植物内源CK合成。为了研究IPT在马铃薯中的功能和作用机制,本研究成功构建了马铃薯酵母双杂交cDNA文库,检测文库容量为1.52×10^(7)cfu(菌落形成单位),插入片段长度750~2500 bp,重组率为100%。进而克隆出StIPT基因并将其与诱饵载体pGBKT7连接,通过杂交法(mating法)从文库中筛选到32个与StIPT互作的候选蛋白。通过酵母回转验证,确定了StIPT可与StVOZ1、StHXK4发生体内互作。本结果为深入解析StIPT在马铃薯生长发育和逆境响应中的作用提供理论基础,并为马铃薯抗逆新种质的选育提供基因资源。
石源睿吴美玲单虔文贾小云冯雪段永红段永红唐锐敏
关键词:马铃薯细胞分裂素异戊烯基转移酶
橡胶树形成层组织的酵母双杂交cDNA文库构建及HbHDA6互作蛋白筛选
2024年
次生乳管是天然橡胶合成和贮存的场所,是由橡胶树树干树皮中维管形成层细胞分裂分化而来。次生乳管的数量与天然橡胶产量直接相关,而这些乳管的数量取决于形成层分化次生乳管的频率(乳管分化能力),是橡胶树产量育种的主要指标。前期研究中,我们发现组蛋白去乙酰化酶(HDA)抑制剂曲古抑菌素A(TSA)能诱导橡胶树乳管分化且组蛋白去乙酰化酶基因(HbHDA6)能够参与橡胶树乳管分化调控。由于组蛋白乙酰化修饰调控橡胶树次生乳管分化的分子机制尚未阐明,因此该文使用冠菌素(COR)诱导橡胶树形成层分化产生次生乳管的实验系统,以分离形成层组织为材料,构建酵母双杂交cDNA文库,以HbHDA6基因为诱饵来筛选酵母双杂交文库,确定与HbHDA6相互作用的蛋白。结果表明:(1)利用Gateway技术构建的均一化COR诱导橡胶树形成层组织的酵母双杂交cDNA文库,初级文库的容量为6.34×10^(6)CFU·mL^(-1),总单克隆数为1.27×10^(7),文库重组率为100%;次级文库的容量为7.72×10^(6)CFU·mL^(-1),总单克隆数为1.54×10^(7),文库重组率为100%。初级文库和次级文库的插入片段平均长度分别为1.1 kb和1.2 kb。(2)成功构建了筛选HbHDA6互作蛋白的pGBKT7-HbHDA6诱饵载体,并确认无自激活活性。(3)使用该诱饵载体对构建的酵母双杂交cDNA文库进行筛选,并通过NCBI_BLAST比对和去除重复以后,获得了22个与HbHDA6发生互作的蛋白,包括CLP1、ERF3、ERF4、HSP82、LARP6a、APT5、PP2A、FBA6等。该研究成果为解析组蛋白乙酰化修饰调控橡胶树次生乳管分化的分子机制提供了理论基础,为转基因改良橡胶树的产胶潜力提供了候选基因,为高性能天然橡胶遗传改良育种提供了新线索。
张世鑫吴绍华杨署光晁金泉史敏晶葛立鑫蒋毅田维敏
关键词:巴西橡胶树维管形成层酵母双杂交
一种枯草芽孢杆菌全长cDNA文库构建方法及其定向筛选应用
本发明公开了一种枯草芽孢杆菌全长cDNA文库构建方法及其定向筛选应用,属于基因工程技术领域。枯草芽孢杆菌B.subtilis是工业中常用的外源蛋白生产菌株,通过构建cDNA文库是筛选枯草芽孢杆菌功能基因的有效方法,本发明...
吴敬张康朱昫飏
芍药种子休眠解除过程的酵母杂交cDNA文库构建被引量:2
2023年
【目的】芍药具有极佳的观赏价值,但其种子的双重休眠难以解除,严重阻碍芍药的育种进程。本研究利用gateway技术构建芍药种子休眠解除关键时期的酵母杂交cDNA文库,可用于筛选调控芍药种子休眠解除相关基因的转录因子及互作蛋白。本文库构建可为丰富芍药种子休眠调控研究提供科学支撑,能为芍药栽培育种和野生资源保护及利用奠定分子理论基础。【方法】本研究以休眠解除过程中5个关键时期的芍药种子为试验材料,进行总RNA的提取和m RNA的分离,使用gateway方法构建cDNA初级文库,再通过LR重组,将初级文库重组到pGADT7-DEST次级文库载体上,构建出次级文库,最后经过酵母转化试验,将次级文库质粒转化到酵母Y187感受态细胞中,构建出芍药种子休眠解除过程的酵母文库。【结果】经鉴定,cDNA初级文库库容量为1.28×10^(7) CFU,平均插入片段长度在1000 bp以上,重组率为100%;cDNA次级文库库容量为1.12×10^(7) CFU,平均插入片段长度在1000 bp以上,重组率为100%;酵母文库滴度为7.0×10^(7) CFU/mL,平均插入片段长度在1000 bp以上,重组率为96%。23个阳性克隆测序结果经NCBI比对后,按照功能将20个已知蛋白序列划分为8类,其中7个序列已被报道参与种子的休眠与萌发。【结论】芍药种子休眠解除过程的酵母杂交cDNA文库构建的质量较高,具有较完整的基因信息,符合酵母文库筛选试验所需的标准,为构建芍药种子休眠解除过程的分子调控网络提供基础。
费日雯樊富伟孙天祎辛如洁宋文慧关士鑫孙晓梅
关键词:芍药种子休眠与萌发CDNA文库GATEWAY技术
不结球白菜酵母杂交cDNA文库构建及BcFT上游调控因子筛选被引量:1
2023年
FLOWERING LOCUS T(FT)是调控植物开花途径中的关键基因,前期研究中,在比较晚开花wym-97和早开花cx-49两个品种的BcFT启动子时,发现cx-49的BcFT启动子存在一个1577 bp的插入片段。为探索该插入片段对不结球白菜开花的影响,本研究构建不结球白菜酵母杂交cDNA文库,继而利用酵母单杂交技术筛选与BcFT启动子互作的蛋白。结果显示,本研究所得cDNA文库的库容为1.8×10^(6)CFU,重组率为100%,插入片段长度分布范围约400~2000 bp,平均长度大于1000 bp,表明不结球白菜酵母杂交cDNA文库构建成功。自激活试验表明,800 ng·mL^(-1)的金担子素(AbA)可以抑制诱饵载体的自激活。通过酵母单杂交试验筛选到结合BcFT启动子插入片段的上游蛋白BcSAP18和BcDEAR2。综上,本研究成功构建了不结球白菜酵母杂交cDNA文库并获得了BcFT启动子插入片段的互作蛋白,为进一步研究BcFT在不结球白菜开花中的调控机制奠定了基础。
徐新凤王惠玉米闵侯喜林李英王建军肖栋刘同坤
关键词:不结球白菜开花CDNA文库酵母单杂交

相关作者

高祥刚
作品数:90被引量:348H指数:11
供职机构:辽宁省海洋水产科学研究院
研究主题:圆斑星鲽 虾夷扇贝 CDNA文库 斑海豹 文蛤
李云峰
作品数:67被引量:171H指数:8
供职机构:辽宁省海洋水产科学研究院
研究主题:海蜇 刺参 养殖技术 虾夷扇贝 CDNA文库构建
刘卫东
作品数:100被引量:422H指数:14
供职机构:辽宁省海洋水产科学研究院
研究主题:虾夷扇贝 仿刺参 圆斑星鲽 文蛤 高通量测序
牛吉山
作品数:122被引量:441H指数:13
供职机构:河南农业大学国家小麦工程技术研究中心
研究主题:小麦 白粉病 黑胚病 克隆 小麦黑胚病
赫崇波
作品数:102被引量:453H指数:11
供职机构:辽宁省海洋水产科学研究院
研究主题:虾夷扇贝 圆斑星鲽 海蜇 CDNA文库 文蛤