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ShRNA靶向干扰BHRF1{1}抑制鼻咽癌细胞增殖: 2015年; 目的针对ShRNA靶向干扰BHRF1{1}抑制鼻咽癌细胞增殖以分析癌症靶向治疗的前景。方法通过{1}测序法鉴定所构建的siRNA表达载体。用四唑盐比色(MTT)法、流式细胞术评价转染siRNA后对鼻咽癌细胞增殖、凋亡的影响。结果与NC-shRNA组相比,BHRF1-shRNA组细胞凋亡增加,凋亡率为(31.51±1.59)%。结论由慢病毒载体介导的shRNA表达载体进入细胞后,可以有效下调BHRF1{1}表达水平,抑制细胞增殖,促进细胞凋亡。; 张艳平丁矢李雪兰杨杰唐峰欧勇; 关键词：慢病毒 SHRNA 靶向干扰 BHRF1基因细胞增殖

ShRNA靶向干扰BHRF1{1}抑制鼻咽癌细胞增殖的实验研究: 2014年; 目的观察BHRF1 shRNA质粒载体转染对人鼻咽癌CNE2细胞中的BHRF1基因沉默及细胞增殖和凋亡的影响,以及肿瘤细胞对放射敏感性的变化。方法利用RNAi技术将负载BHRF1 shRNA的质粒载体转染至人鼻咽癌CNE2细胞,一组为BHRF1 shRNA质粒载体转染过的CNE2细胞(观察组),未进行转染的CNE2细胞确定为对照组,经RT-PCR扩增人鼻咽癌组织中BHRF1 cDNA片段,RT-PCR和Western blot检测BHRF1基因的蛋白水平的表达。并且利用顺铂进行实验,观察使用顺铂后,BHRF1 shRNA转染后的肿瘤细胞是否对放射敏感性有变化。结果 BHRF1 shRNA转染鼻咽癌CNE2细胞后,细胞内BHRF1 mRNA表达量(2.02±0.53),对照转染前明显下调,明显下调,与对照组的(29.82±0.64)比较,差异有显著性意义(P<0.01);DDP和8G放疗作用24 h以后,被转染的细胞的中的蛋白表达大大降低(P<0.05),癌细胞凋亡率上升,明显比对照组癌细胞的凋亡率高(P<0.05)。结论利用RNA干扰技术对人鼻咽癌治疗具有潜在应用价值,BHRF1 shRNA质粒载体不仅仅能调控细胞基因的表达,而且还能够提高癌细胞对顺铂的敏感性。; 张艳平; 关键词：BHRF1 SHRNA CNE2细胞 BHRF1

EB病毒BHRF1{1}慢病毒载体的构建及功能鉴定被引量：2: 2013年; 目的:构建并制备能够有效表达EB病毒BHRF1{1}的重组慢病毒载体,观察BHRF1表达对人胚肺成纤维细胞(KMB17)凋亡的影响。方法:采用RT-PCR法,从B95-8细胞扩增EBV BHRF1{1},克隆至pWPI GW慢病毒载体上,与pVSVG及pSPAX质粒共转染人胚肾293T细胞,包装出重组慢病毒。将纯化后的重组慢病毒直接感染293T和KMB17细胞,荧光显微镜、实时定量RT-PCR、免疫印迹等方法检测BHRF1在细胞中的表达水平。流式细胞仪检测BHRF1表达对凋亡诱导剂或无血清培养诱发KMB17细胞凋亡的影响。结果:重组慢病毒介导BHRF1在293T和KMB17细胞内获得表达,能有效地抑制KMB17细胞的凋亡。结论:成功构建了表达BHRF1{1}的重组慢病毒载体。; 孙静孙强明李建芳李彦涵乌美妮廖芸王晶晶胡云章; 关键词：EB病毒 BHRF1 慢病毒载体细胞凋亡

BHRF1{1}与绿色荧光蛋白融合{1}慢病毒载体的构建: 2012年; 目的构建BHRF1{1}与绿色荧光蛋白融合{1}慢病毒表达载体及获得稳定表达BHRF1的慢病毒的方法。方法通过实时定量聚合酶链反应(RT-PCR)方法从鼻咽癌组织中扩增获得BHRF1的{1}全长CDS序列,并克隆于带GFP荧光报告{1}慢病毒表达载体中,酶切验证测序正确后,将质粒pWPXL-hBHRF1-IR ES-GFP与慢病毒包装质粒共转染293T细胞,将浓缩纯化后的病毒上清感染293T细胞,荧光显微镜观察下293T细胞的绿色荧光表达及转染效率。结果电泳鉴定与目的{1}表达条带完全吻合,测序结果显示扩增得到的BHRF1序列与GenBank公布的参考序列完全一致,双酶切和测序结果证明BHRF1已正确地克隆到慢病毒表达载体中,包装后慢病毒颗粒可高效转染293T细胞,荧光显微镜下可观察到大量绿色荧光表达,转染效率>90%。结论成功构建了BHRF1与GFP融合{1}慢病毒表达载体,为进一步研究BHRF1{1}的相关功能提供了适合的稳定转染载体。; 张艳平; 关键词：BHRF1基因慢病毒载体鼻咽癌绿色荧光蛋白

BHRF1{1}对丝裂霉素诱导胃癌细胞SGC7901凋亡影响被引量：1: 2011年; 目的探讨EB病毒早期基因{1}1的表达对丝裂霉素诱发胃癌细胞SGC7901凋亡的影响。方法构建pcDNA3.1-{1}1表达载体,应用脂质体转染法将{1}1表达载体转染胃癌细胞系SGC7901,MTT法检测细胞生长情况。实验分为细胞对照组、空载体对照组和目的基因转染组,细胞对照组仅接种SGC7901细胞,空载体对照组将pcDNA3.1空载体转染入SGC7901细胞中,目的基因转染组将重组质粒pcDNA3.1-{1}1转染入SGC7901细胞中。分别培养24、48和72 h后,用浓度为30 mg/L的丝裂霉素处理,流式细胞术检测细胞凋亡率,Hoechst33258荧光染色方法检测凋亡小体。结果 pcDNA3.1-{1}1重组质粒构建成功。MTT实验显示目的基因转染能明显拮抗由于丝裂霉素作用导致的细胞生长抑制;{1}1转染+丝裂霉素处理组凋亡小体明显少于对照组,细胞凋亡率明显低于对照组,差异均有统计学意义(F=6 250.510,q=56.992、51.613,P<0.01)。结论 {1}1基因具有明显拮抗丝裂霉素诱导胃癌SGC7901细胞凋亡的作用。; 孔祥硕李欣罗兵孙萍; 关键词：丝裂霉素

BHRF1{1}对丝裂霉素诱发胃癌细胞SGC7901凋亡的影响: 背景和目的：BHRF1{1}是EB病毒早期{1}，其编码产物结构和功能均与人类抗凋亡蛋白bcl-2同源，有抑制细胞凋亡的作用。本文旨在探讨该{1}表达对丝裂霉素诱发胃癌细胞凋亡的影响。　　方法：构建pcDNA3.1-BHR...; 孔祥硕; 关键词：丝裂霉素胃癌基因表达; 文献传递

地塞米松对SUNE-1和B_(95-8)细胞株中EB病毒BHRF1{1}转录水平的影响: 1999年; 目的：以Ｋ５６２细胞为阴性对照，观察ＳＵＮＥ－１和Ｂ９５８两种含ＥＢＶ－ＢＨＲＦ１基因的肿瘤细胞株在２×１０６ｍｏｌ／Ｌ地塞米松（ｄｅｘａｍｅｔｈａｓｏｎｅ，ＤＥＸ）作用１８ｈ后，细胞内ＥＢＶ－ＢＨＲＦ１基因转录水平的改变。方法：细胞ＲＮＡ的提取、ＲＮＡ的点杂交（Ｄｏｔｂｌｏｔ）及反转录ＰＣＲ（ＲＴ－ＰＣＲ）。结果：上述两种肿瘤细胞在２×１０６ｍｏｌ／Ｌ地塞米松作用１８ｈ等诱导细胞凋亡的条件下，细胞内ＥＢＶ－ＢＨＲＦ１基因的转录水平（ｍＲＮＡ）明显提高。结论：本结果初步显示ＥＢＶ－ＢＨＲＦ１基因的转录与宿主细胞抵抗凋亡的关系密切。; 朱振宇邓诣群戴克胜张清秀马润泉; 关键词：地塞米松 EB病毒 BHRF1基因

EB病毒BHRF 1{1}表达对鼻咽癌细胞周期分布影响的研究被引量：2: 1999年; ＥＢ病毒感染与鼻咽癌的发生和发展明显相关。近来研究发现，ＥＢ病毒编码基因的表达与病毒介导的细胞转化与恶变有关。ＢＨＲＦ１为ＥＢ病毒编码的一个早期基因，其与原癌基因Ｂｃｌ－２具有部分相同的序列和共同的超微结构定位，提示其具有相似的功能和机理，即有抑制细...; 黄海潘星华余龙余龙余龙李兆基; 关键词：EB病毒 BHRF1基因鼻咽肿瘤细胞周期

鼻咽癌组织中BHRF1{1}的研究被引量：3: 1998年; 目的：探讨鼻咽癌组织中ＥＢ病毒基因ＢＨＲＦ１的存在和表达与癌细胞分化及其患者预后间的关系。方法：利用斑点杂交技术检测鼻咽未分化癌、低分化及高分化鳞癌中ＢＨＲＦ１的存在和表达情况，并且观察患者对放疗的效果。结果：ＢＨＲＦ１的存在与表达与鼻咽癌的分化无关，但其表达可导致癌细胞对辐射敏感性的下降（Ｐ＜０．０１）。结论：ＢＨＲＦ１在鼻咽癌细胞中的表达可增强其抵抗辐射诱发细胞凋亡的能力，这在鼻咽癌诊断、治疗和预后判断上具有重要意义。; 黄海潘星华周水淼李兆基李兆基余龙温武孙喜元余龙; 关键词：EB病毒基因鼻咽肿瘤细胞分化

EB病毒BHRF1{1}抗辐射作用的研究被引量：1: 1998年; 为了解EB病毒编码基因{1}1的表达对鼻咽癌细胞抵抗放射线损伤能力的改变，构建携有{1}1的高表达载体，并转染鼻咽癌细胞株CNE2细胞，观察转染前后的癌细胞在放射线照射后于裸鼠体内成瘤能力改变的情况。结果发现，在放射线照射前，{1}1表达细胞在裸鼠体内形成肿瘤时间较晚，肿瘤重量较轻（P＜0．01）；而经放射线照射后，{1}1表达细胞在裸鼠体内的成瘤能力强于对照组（P＜0．01），经原位末端标记检查发现其凋亡指数小于对照组（P＜0．01）。提示{1}1的表达能通过阻止细胞的凋亡，增强鼻咽癌细胞抵抗放射线对其DNA的损伤作用。; 黄海潘星华孔宪涛余龙周水淼李兆基温武傅强孙喜元; 关键词：EB病毒 BHRF1基因鼻咽肿瘤放射疗法抗辐射

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