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基于MDCK细胞培养的B流感病毒液的超滤浓缩工艺研究
2025年
目的研究在不同工艺参数下,使用超滤膜包和中空纤维柱超滤浓缩基于MDCK细胞培养的B流感病毒液的效果。方法制备6批次基于MDCK细胞培养的B流感病毒澄清液,采用超滤膜包和中空纤维柱对B流感病毒澄清液2倍浓缩后洗滤。取鸡红细胞悬液检测病毒浓缩液的血凝滴度,使用Lowry法2测定蛋白含量并计算抗原回收率和杂蛋白去除率,以考察不同洗滤次数和超滤膜类对以上指标的影响;对洗滤10次的病毒洗滤液进行超滤浓缩,分析使用2种超滤膜超滤浓缩后不同膜清洗次数下的病毒残留情况;评价病毒浓缩液在不同保存温度下的稳定性。结果超滤膜包和中空纤维柱洗滤后,病毒洗滤液的血凝滴度保持稳定,洗滤次数为5次时,杂蛋白去除率较高,达到90%以上。中空纤维柱处理后的病毒浓缩液抗原回收率(61.95%)略高于超滤膜包(49.91%),2种超滤膜处理后收获的病毒浓缩液杂蛋白去除率均在96%左右。冲洗超滤浓缩后的超滤膜包和中空纤维柱1次,超滤系统中含有残留的病毒抗原,占病毒澄清液抗原含量的10%以上。2种超滤膜处理后的病毒浓缩液在2~8℃保存1周血凝滴度稳定,在-70℃保存1周后血凝滴度大幅度下降。结论超滤膜包和中空纤维柱洗滤病毒澄清液的次数在5次及以上时,可获得较高病毒含量、低杂蛋白含量的病毒液。
吴熠潇刘海东朱绍荣
关键词:超滤流感病毒B型
NF2基因/蛋白作为靶点在制备预防或治疗AB流感病毒感染药物中的应用
NF2基因/蛋白作为靶点在制备预防或治疗AB流感病毒感染药物中的应用,属于生物基因工程技术领域。本发明为解决现有技术中缺少AB流感病毒的共同靶点,以及能够同时有效抑制AB流感病感染的药物,提供了NF2基...
常德李开龙张咪焦鹏涛
NRP1基因作为靶点在抑制AB流感病毒复制中的应用
NRP1基因作为靶点在抑制AB流感病毒复制中的应用,属于生物基因工程技术领域。本发明为解决现有技术中缺少AB流感病毒的共同靶点,以及能够同时有效抑制AB流感病毒复制的药物,提供了NRP1基因作为靶点在抑...
常德李开龙张咪焦鹏涛
同步检测A、B流感病毒和肺炎衣原体、支原体IgM抗体的联合装置及检测方法
本发明属于医疗检测设备领域,提供了一种同步检测流感病毒AB和肺炎衣原体、肺炎支原体的IgM抗体的联合装置,它包括双通道卡壳、并列设置于双通道卡壳中的试纸条FluA&B和试纸条CP∓试纸条Flu...
姚洪涛
基因重配对B流感病毒生长特性的影响
2024年
目的 利用反向遗传学方法研究流感病毒各基因节段对其生长特性的影响。方法 挑选系间重配病毒B/福建同安/1565/2013及B/北京怀柔/11764/2013进行生长曲线测定。提取病毒核酸,扩增病毒各基因节段,并利用pHW2000载体构建重组质粒。对构建的重组质粒在两病毒间进行单一及不同组合基因节段的替换后,构建新的重配病毒,检测重配病毒的生长特性,推测基因节段的影响作用。结果 2株系间重配病毒生长特性差异显著,B/福建同安/1565/2013比B/北京怀柔/11764/2013生长曲线的峰值点高约2倍log值,但将B/北京怀柔/11764/2013单一节段分别替换至B/福建同安/1565/2013重配出的8株病毒B/福建同安/1565/2013的生长特性差异不明显,而在同时替换HA和NA(表面蛋白)或PB2、PB1和PA(聚合酶)或PB2、PB1、PA和NP(核糖核蛋白,RNP)3种基因组合时,重配病毒的生长特性下降显著。结论 B流感病毒生长特性受单一节段影响可能性较小,多个节段的协同作用对其影响更为显著,在监测过程中应加强对重配变异病毒的监测。
张瑶周剑芳鲁健李希妍曾晓旭王大燕
关键词:B型流感病毒基因重配
2022—2023年柳州市B流感病毒全基因组遗传特征分析
2024年
目的分析2022—2023年柳州市B流感病毒全基因组遗传特征,了解柳州市B流感病毒变异情况及与WHO推荐疫苗株的匹配性。方法利用DNAStar、MEGA等生物信息学软件对分离的31株B流感病毒的全基因序列进行比对构建基因进化树,分析同源性及氨基酸位点变异。结果2022年柳州市B流感病毒分离株属于C.1亚分支,只有神经氨酸酶(neuraminidase,NA)、膜蛋白(matrix protein,MP)和聚合酶A(polymerase A,PA)3个基因片段与2020—2022年北半球疫苗推荐株B/Washington/02/2019在同一进化分支。2023年B流感病毒分离株属于C.5.6或C.5.7亚分支,8个基因片段均与2022—2024年北半球疫苗推荐株B/Austria/1359417/2021在同一进化分支;相对于B/Austria/1359417/2021,2022—2023年柳州市B流感病毒分离株血凝素(hemagglutinin,HA)基因在抗原决定簇和受体结合位点发生的氨基酸变异具有流行病学意义。柳州市31株B流感病毒分离株HA蛋白和NA蛋白均未出现糖基化插入或缺失,未发生NA蛋白酶催化活性位点及耐药位点突变。部分流感病毒在非结构蛋白(non-structural protein,NS)和核蛋白(nucleoprotein,NP)的关键位点上发生了氨基酸变异,而组成RNA聚合酶的PA、聚合酶B1(polymerase B1,PB1)及聚合酶B2(polymerase B2,PB2)的3个蛋白存在2种主要共同变异方式。结论2022年柳州市B流感病毒与北半球疫苗推荐株B/Austria/1359417/2021的匹配性较差,2023年柳州市B流感病毒与北半球疫苗推荐株B/Austria/1359417/2021的匹配性较好。流感病毒HA蛋白抗原决定簇和受体结合位点上氨基酸变异可能是引起B流感病毒在柳州市流行的主要原因之一,流感病毒对使用的神经氨酸酶抑制剂的抗流感药物敏感。
余钧池陈柳军刘一陈艺肖陈然琼居昱
关键词:B型流感病毒全基因组
基于LAMP-CRISPR-Cas12b-侧层析技术检测A、B流感病毒的方法建立
2024年
目的为在疫情现场和基层医疗卫生机构实现对A、B流感病毒的快速检测,而建立一种快速流感病毒诊断方法。方法将等温扩增技术与CRISPR-Cas12b系统联用,结合侧层析技术,建立基于LAMP-CRISPR-Cas12b-侧层析技术检测A、B流感病毒的方法。设计A、B流感病毒的特异性LAMP引物组及crRNA。采用梯度稀释法验证该方法的灵敏度;利用其他4种呼吸道病毒验证该方法的特异性;应用该方法对52例ILI监测样本进行检测,验证该方法的实用性。结果成功建立了LAMP-CRISPR-Cas12b-侧层析检测A、B流感病毒的方法,最低检测极限为10 copies/μL;该方法特异性强,与其他4种呼吸道病毒无交叉反应;52例ILI监测样本结果与qRT-PCR一致,一致性好(kappa=1)。结论建立了一种适用于疫情现场和基层医疗卫生单位对流感病毒快速检测的方法。
黄佳齐适雨黄顺武刘慧孙颖武伟华王昕邹旋房师松
关键词:流感病毒RT-LAMP
B流感病毒抗原性快速鉴别方法、装置、终端及介质
本申请公开了一种B流感病毒抗原性快速鉴别方法、装置、终端及介质。本申请首先基于现有B流感病毒Victoria谱系和Yamagata谱系毒株的血凝抑制试验数据分别判断两个谱系内部不同毒株之间的抗原关系,然后,基于两两毒...
杜向军 蒋太交 韩文杰 苗智超 程佩文 翟珂 曾金锋 冯镜儒 张弛 陈绎霖
多孔板对B流感病毒分离影响因素分析
2023年
目的研究B流感病毒在不同多孔板中的生长情况,探索其合适的分离条件。方法对4株B流感病毒进行血凝鉴定后将滴度调整到1∶32,稀释10000倍后接种于6孔板,按接种量(0.40ml、0.60ml、0.80ml和1.00ml)分为4组,吸附后每组加入2.00ml、2.50ml、3.00ml和3.50ml病毒维持液。接种于24孔板,按接种量(0.10ml、0.15ml、0.20ml和0.25ml)分为4组,吸附后每组加入0.80ml、1.00ml、1.20ml和1.40ml病毒维持液,每24h观察致细胞病变并进行血凝滴度(hemagglutination titer,HA)鉴定。采用χ^(2)检验对不同多孔板的HA进行分析。结果随时间增长,病毒滴度均增加,所有致细胞病变均有滴度,6孔板每24h检测各孔滴度均能达到1∶8以上,B/Yamagata和B/Victoria亚滴度最高为1∶256,24孔板每24h检测各孔阴阳性不一,B/Victoria亚的滴度最高为1∶16,B/Yamagata亚的滴度最高为1∶32。不同多孔板的HA差异有统计学意义(χ^(2)=46.30,P<0.05)。结论B流感病毒的分离与多孔板、维持液量、接种量和培养时间等有关。6孔板建议选择3.00~3.50ml+0.80ml组合,24孔板建议选择1.20~1.40ml+0.20~0.25ml组合,培养时间为72h。
杜冬冬刘斌梁磊成娉婷黄纷纷李海燕刘万静杨力史伟屈娅荣焦欢
关键词:B型流感病毒几何平均滴度多孔板病毒分离影响因素
B流感病毒为载体的SARS-CoV-2疫苗候选株及其构建方法和应用
B流感病毒为载体的新冠状病毒疫苗候选株及其构建方法和应用,涉及新冠状病毒疫苗领域,通过对B流感病毒减毒株B/Yamagata/16/88的NS1基因片段截短保留110个氨基酸后,将其插入到基因合成的新冠病毒参考...
孙伟洋高玉伟王振飞朱梦涵王铁成冯娜闫飞虎李恩涛李元果赵永坤杨松涛夏咸柱

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王大燕
作品数:206被引量:1,638H指数:24
供职机构:中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所
研究主题:流感病毒 流感 禽流感病毒 流感疫苗 B型流感病毒
舒跃龙
作品数:287被引量:2,008H指数:26
供职机构:中国疾病预防控制中心
研究主题:流感病毒 流感 禽流感病毒 H5N1 流感病毒A型
李希妍
作品数:55被引量:348H指数:12
供职机构:中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所
研究主题:B型流感病毒 神经氨酸酶抑制剂 特性分析 基因特性 流感病毒
房师松
作品数:197被引量:743H指数:14
供职机构:深圳市疾病预防控制中心
研究主题:流感病毒 流感 B型流感病毒 禽流感病毒 转基因食品
程小雯
作品数:96被引量:642H指数:12
供职机构:深圳市疾病预防控制中心
研究主题:流感病毒 流感 B型流感病毒 RT-PCR快速检测 流行病学