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支链氨基酸氨基转移酶1在转化生长因子-β1刺激的NIH-3T3纤维细胞向肌纤维细胞表型转变中的作用
2025年
目的探索纤维细胞向肌纤维细胞转化中支链氨基酸氨基转移酶1(branched-chain amino acid transaminase-1,BCAT1)对纤维化相关基因表达及表型的调控作用。方法NIH-3T3小鼠胚胎纤维细胞系分别转染腺病毒为载体的BCAT1敲低和过表达病毒后,给予转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1,TGFβ1)诱导NIH-3T3细胞转化为肌纤维细胞。利用实时定量PCR、Western blot、免疫荧光实验等检测TGFβ1诱导的纤维化相关基因表达变化。同时通过细胞划痕实验、Transwell、胶收缩实验等检测NIH-3T3细胞向肌纤维细胞转化的迁移、收缩等表型变化。结果TGFβ1刺激诱导NIH-3T3细胞转化为肌纤维细胞时BCAT1 mRNA及蛋白表达水平显著升高(均P<0.01)。使用短发卡RNA(short hairpin RNA,shRNA)敲低NIH-3T3细胞的BCAT1表达显著抑制TGFβ1诱导的纤维化相关基因Acta2和Postn的mRNA表达(均P<0.01)及与纤维化过程相关的细胞迁移、收缩等肌纤维细胞表型(均P<0.01)。反之,过表达BCAT1显著促进TGFβ1诱导的纤维化相关基因表达和肌纤维细胞表型(均P<0.01)。结论BCAT1是调节纤维细胞纤维化相关基因表达及其向肌纤维细胞表型转变的关键分子,可能为治疗和调控器官纤维化的潜在靶点。
王正阳尹佳辉任晨阳张富洋陈希瑶
关键词:成纤维细胞肌成纤维细胞纤维化
一种基于纳米抗体的三维免疫荧光像方法分析NIH-3T3纤维细胞球体及PTGDS在肺腺癌细胞的表型研究
随着研究人员对生物体的三维结构和组织学的日益重视,3D细胞培养和三维像技术已经为了细胞和癌症生物学、药物筛选和疾病途径研究的首选方法。然而,对于紧密排列的纤维细胞球体的三维免疫荧光像仍然存在挑战。在本研究中,我们...
周航
关键词:三维细胞培养肺腺癌
肺纤方对小鼠肺纤维化模型及NIH3T3纤维细胞作用机制的研究被引量:5
2021年
目的在前期二次造模实验基础上,建立小鼠肺纤维化模型,观察肺纤方对肺纤维化小鼠模型的干预作用,并探讨不同浓度的肺纤方煎剂对体外培养NIH3T3纤维细胞{3}增殖的影响及可能的作用机制。方法将60只雄性昆明小鼠,随机取出其中50只,气管内雾化吸入博莱霉素(8 mg/kg)造模,造模第10天后再次给予吸入博来霉素(8 mg/kg)二次造模,第25天将其随机分为5组:模型组、甲泼尼龙组、肺纤方高、中、低剂量组,每组10只。其余10只小鼠气管内滴入及灌胃等容生理盐水作为空白对照组。处死后取肺脏标本进行肺组织肺泡炎、纤维化评价方法和肺组织羟脯氨酸(Hyp)测定。培养小鼠NIH3T3纤维细胞,分为对照组、肺纤方低、中、高剂量组,分别给予生理盐水、低、中、高浓度剂量肺纤方煎剂处理,一段时间后进行平板克隆形实验和Western blot法测定{3}增殖和CyclinD1、MMP2、TIMP1蛋白的表达水平。结果采用肺纤方各组及甲泼尼龙组小鼠肺泡炎、纤维化评分和Hyp含量均明显低于模型组(P<0.05),且肺纤方各组上述指标值随着肺纤方剂量的增加而降低,但高剂量组与甲泼尼龙组比较,无显著性差异(P>0.05);肺纤方各组具有抑制NIH3T3{3}的增殖能力,且呈时间依赖,但无浓度依赖性;肺纤方各组对CyclinD1和MMP2蛋白的表达均有下调,且一定范围内随药物浓度增加,CyclinD1蛋白表达下调越明显;同时肺纤方各组TIMP1蛋白的表达有所增加,但是差异不显著;而肺纤方各组GAPDH条带灰度比值无明显差异。结论肺纤方能够有效抑制博来霉素致小鼠肺纤维化,同时能抑制NIH3T3{3}的增殖,可能机制为其抑制CyclinD1蛋白表达和改善MMPs/TIMPs系统平衡,但上述效应与药剂浓度无正相关性。
谢纬唐明文郭竹英陈生黄俊浩曾梓苑
关键词:肺纤方肺纤维化
血凝酶-海藻酸钙复合微球对小鼠3T3纤维细胞活力及凋亡影响被引量:1
2020年
目的探讨血凝酶-海藻酸钙复合微球对小鼠3T3纤维细胞活力及凋亡的影响。方法采用物理和化学结合的方法制备血凝酶-海藻酸钙复合微球。将细胞分为阴性对照组(正常培养基)、微球组(血凝酶-海藻酸钙复合微球浸提液)、阳性对照组(含有0.64%苯酚的DMEM培养基或含有10μmol/L VP-16的DMEM培养基)。光学显微镜观察各组24 h后细胞的生长状态。采用细胞计数试剂盒(CCK-8)检测24 h和48 h各组细胞活力。采用蛋白免疫印迹法检测各组细胞凋亡相关蛋白[剪切型的半胱天冬酶-3(cleaved caspase 3)、B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)和Bcl-2关联X蛋白(Bax)]的表达情况。结果显微镜下观察结果发现,微球呈圆形,大小形态均一,直径328.0~374.2μm,平均直径(350.0±24.9)μm。与阴性对照组比较,微球组细胞活力无明显变化(P>0.05),阳性对照组细胞活力显著下降(P<0.05)。与阴性对照组比较,微球组凋亡相关蛋白cleaved caspase 3、Bax和Bcl-2无明显变化(P>0.05);阳性对照组细胞凋亡蛋白cleaved caspase 3和Bax表达明显增加(P<0.05),抗凋亡蛋白Bcl-2表达明显下降(P<0.05)。结论血凝酶-海藻酸钙复合微球不影响小鼠3T3纤维细胞活力和凋亡,具有良好的细胞相容性。
刘丹梁明孙景阳韩雅玲
关键词:血凝酶微球成纤维细胞细胞活力
草鱼鱼皮胶原蛋白与NIH3T3纤维细胞的相容性
2017年
体外检测草鱼鱼皮酸溶性胶原蛋白(FASC)的细胞相容性。采用MTT实验,检测不同浓度的FASC溶液或FASC涂层胶对NIH3T3纤维细胞增殖能力的影响(n=6);利用transwell趋化实验,检测不同浓度的FASC溶液对纤维细胞的趋化作用(n=3);利用transwell侵袭实验,检测不同浓度FASC涂层胶的细胞通透性(n=3)。结果表明,FASC溶液浓度依赖性地促进NIH3T3纤维细胞增殖,16μg/mL的FASC溶液在48和96 h的增殖率分别为63.7%±7.9%和87.3%±8.7%,较对照组有显著性差异(P<0.001)。NIH3T3细胞能够在FASC涂层胶上生长,各实验组与对照组相比,增殖率均无显著性差异(P>0.05)。趋化实验显示,FASC溶液各浓度梯度组与阴性对照组的趋化指数均有显著性差异(P<0.05),提示FASC对纤维细胞具有趋化作用。侵袭实验结果显示,纤维细胞可以通过FASC涂层胶。实验证实,FASC与NIH3T3细胞具有良好的相容性。
余兰汪海波陈卓方成
关键词:胶原蛋白鱼皮草鱼成纤维细胞细胞相容性
促进骨与抑制脂基因共转染NIH3T3纤维细胞中的表达
2016年
目的:检测降钙素基因相关肽基因(CGRP)和沉默过氧化物酶体增殖子活化受体-γ(PPARγ)共转染NIH3T3纤维细胞中的表达。方法培养 NIH3T3纤维细胞,收集细胞随机分为五组,正常组:正常培养细胞,不做特殊处理,作为正常对照;空载体组:仅用空载体 pGFP-V-RS 质粒转染细胞,作为阴性对照组;CGRP 组:用重组载体 pGFP-V-RS-exCGRP 质粒转染细胞;siPPARγ组:用重组载体 pGFP-V-RS-siPPARγ质粒转染细胞;双基因组:用重组双基因载体 pGFP-V-RS-siPPARγ-exCGRP 质粒转染细胞。电转染功后,继续培养细胞48 h,采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)与蛋白质免疫印迹法(Western blot)分别检测各组细胞内 PPARγ、CGRP mRNA 与蛋白的表达。结果双基因组中 CGRP 基因呈高表达,明显高于正常组、空载体组、siPPARγ组,差异均有统计学意义(P <0.05);与 CGRP 组中 CGRP 基因表达量相近,差异未见统计学意义(P >0.05)。双基因组细胞中 PPARγ基因呈低表达,明显低于正常组、空载体组、CGRP 组,差异均有统计学意义(P <0.05);与 siPPARγ组细胞中 PPARγ基因表达量相似,差异未见统计学意义(P >0.05)。结论促进骨基因和抑制脂基因共转染 NIH3T3纤维细胞,能够上调细胞中 CGRP 基因表达,同时下调 PPARγ基因表达。
蒋林栋李劲峰马源李成李月白王义生
关键词:基因转染降钙素基因相关肽NIH3T3成纤维细胞
参麦开肺散对NIH/3T3纤维细胞增殖及胶原合的影响被引量:5
2015年
目的探讨参麦开肺散对NIH/3T3纤维细胞(FB)增殖及体外纤维细胞模型胶原合的影响。方法NIH/3T3 FB常规培养后分为正常对照组、模型组和处理组,正常对照组加入含1%胎牛血清(FBS)的细胞培养液500μl,模型组加入使用含1%FBS细胞培养液配制的5 ng/mlβ型转化生长因子(TGF-β)溶液500μl,处理组加入含5 ng/ml的TGF-β+1 mg/ml的参麦开肺散混合溶液500μl,培养24 h。分别采用实时定量聚合酶链反应(PCR)、蛋白免疫印迹(Western blot)和Sircol assay检测细胞内胶原及细胞外基质(ECM)相关基因表达水平、Ⅰ型胶原表达情况以及分泌到细胞上清中胶原蛋白的含量。结果参麦开肺散显著降低胶原及其相关基因、Ⅰ型胶原蛋白的表达以及分泌到细胞上清中胶原蛋白的含量(P<0.05,P<0.01)。结论参麦开肺散可明显抑制TGF-β诱导的NIH/3T3 FB胶原的合,其发挥抗纤维化作用可能与其抑制FB增殖及胶原合相关。
郭刚王久存史颖楚海燕刘庆梅
关键词:肺纤维化胶原
PEEK/HA生物复合材料对3T3纤维细胞的影响被引量:1
2015年
体外研究PEEK/HA生物复合材料对3T3纤维细胞的影响,评价该材料的生物相容性。制备不同HA含量的PEEK/HA和PEEK/SPEEK/HA生物复合材料,与3T3纤维细胞共培养,倒置相差显微镜观察该材料对细胞形态影响,MTT法研究该材料对细胞增殖作用,评价细胞毒性,流式细胞术研究该材料对细胞凋亡的影响,扫描电镜观察该细胞在材料表面黏附形态。细胞呈长梭形贴壁生长,胞体透明,大部分呈梭形和多角形,生长态势良好。随着浸提液浓度增大,材料对细胞增殖作用显著下降,PEEK/HA复合材料随着HA含量增加,细胞增殖作用逐渐增强,PEEK/SPEEK/HA复合材料与PEEK/HA相比,对细胞增殖作用较强,细胞毒性级别为Ι级,说明该材料对3T3细胞无毒性。细胞凋亡率随PEEK/SPEEK/HA材料中的HA含量升高而降低。SPEEK的加入使PEEK/HA复合材料后黏附率增大,随PEEK/SPEEK/HA中HA含量增加,细胞黏附率增加,SPEEK和HA可改善材料的黏附性能。SEM观察发现3T3细胞能够在PEEK/SPEEK/HA复合材料表面黏附、伸展和生长。PEEK/SPEEK/HA复合材料生物相容性良好,为该人工骨替代材料的临床前研究提供实验数据和科学依据。
倪卓杨莎王应刘士德张建华田生礼
关键词:磺化聚醚醚酮3T3成纤维细胞细胞增殖
左旋肉碱对NIH3T3纤维细胞骨分化的影响
异位钙化又称异位骨化,是指钙/磷复合物沉积于非钙化的组织,继而发生新骨形的病理性现象。弹性纤维假黄瘤(pseudoxanthoma elasticum,PXE)是一种多系统的异位钙化紊乱性疾病,其典型的特征为钙磷复合物...
葛平兰
关键词:异位骨化成纤维细胞左旋肉碱成骨分化
建立人肝微粒体-小鼠3T3纤维细胞模型评价5-羟基雷公藤内酯醇代谢产物的细胞毒性被引量:1
2014年
目的:以环磷酰胺(cyclophosphamide,CPA)和他莫昔芬(tamoxifen,TMX)为模型药物,建立人肝微粒体-小鼠3T3纤维细胞模型,并用该模型评价5-羟基雷公藤内酯醇(T8)代谢产物的细胞毒性。方法:采用人肝微粒体(加或不加NADPH)-小鼠3T3纤维细胞模型,测定吸光度(A值)并计算细胞孵育液的EC50值和EC50shift,以EC50 shift评价代谢产物毒性。结果:模型药物CPA和TMX及创新药物T8的EC50 shift分别为0.34、>4.7和1.2,表明CPA和TMX的代谢物会分别增加和降低细胞毒性,而T8代谢产物不影响或稍许降低对细胞的毒性。结论:本实验功建立人肝微粒体-小鼠3T3纤维细胞模型,这为T8进入体内的安全性提供了一定依据,也为候选化合物开发初期在不合代谢物的情况下初步评价代谢物的细胞毒性提供了一种体外方法。
李华徐佳刘海燕
关键词:人肝微粒体3T3成纤维细胞细胞毒性他莫昔芬