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- 脑卒中血清培养骨髓间质干细胞移植对大鼠脑缺血再灌注的影响
- 2023年
- 目的观察脑卒中血清预处理的骨髓间质干细胞(mesenchymal stem cell,MSCs)移植对大鼠脑缺血再灌注的影响。方法分离培养骨髓MSCs并观察细胞形态,流式细胞术检测CD44、CD90、CD34、CD45抗原表达以鉴定细胞。分离缺血性脑卒中和正常大鼠血清,与MSCs共培养,制备SS-MSCs(脑卒中血清),NS-MSCs(正常脑组织血清)及FBS-MSCs(胎中血清)。Zea Longa线栓法制作MCAO大鼠模型,MSCs经尾静脉注射移植,分为MCAO组(等体积PBS)、MCAO+FBS-MSCs组(2×10^(6) cells FBS-MSCs)、MCAO+NS-MSCs组(2×10^(6) cells NS-MSCs)、MCAO+SS-MSCs组(2×10^(6) cells SS-MSCs),并设sham组(等体积PBS)。监测大鼠MSCs移植后第1、7、14天行为变化。TTC、HE、Tunel染色观察脑组织梗死情况、组织状态及细胞凋亡情况。ELISA检测脑组织中脑源性神经营养因子(BDNF)、神经生长因子(NGF)、肝细胞生长因子(HGF)、血管内皮细胞生长因子(VEGF)表达水平。同时行免疫组织化学染色观察BrdU、BDNF、NGF表达。结果成功分离高纯度MSCs,分组预处理移植后,与MCAO组比较,各干预组第7、14天双侧贴纸去除时间、mNSS评分均降低,MCAO+SS-MSCs组行为改善最显著(P<0.01)。TTC、HE、Tunel染色结果显示与MCAO组比较,MSCs移植干预均可降低大鼠脑梗死面积,改善脑组织损伤,抑制细胞凋亡,且MCAO+SS-MSCs组改善程度最大(P<0.05)。此外,MCAO+SS-MSC组BDNF、NGF、HGF、VEGF水平较MCAO组升高(P<0.01),且高于其他干预组(P<0.05)。免疫组化结果显示MCAO+SS-MSC组Brdu、BDNF、NGF表达水平较MCAO组升高(P<0.05),且高于其他干预组(P<0.05)。结论脑卒中血清预处理骨髓MSCs移植可有效改善MCAO大鼠脑组织损伤,可通过抑制脑组织细胞凋亡,上调BDNF、NGF、HGF、VEGF水平,发挥保护作用。
- 贾韩静童一心黄哲华
- 关键词:脑缺血再灌注骨髓间质干细胞
- 基于JAK2/STAT3信号通路探讨补阳还五汤联合骨髓间质干细胞移植治疗大鼠脊髓损伤的机制被引量:3
- 2023年
- 目的探讨补阳还五汤联合骨髓间质干细胞(MSCs)移植治疗脊髓损伤的作用机制。方法选择8~10周的健康清洁级成年Sprague-Dawley大鼠45只,随机分为假手术组,空白对照组、补阳还五汤组、MSCs移植组、补阳还五汤+MSCs组,每组9只。采用改良式的Allen’s打击法造模,分别于术后1、3、5周后通过改良Tarlov评分和斜板试验判断其对神经功能的影响,并且免疫组化检测脊髓组织中Brdu的水平,Western检测p-JAK2、p-STAT3、GP130、IL-6的蛋白表达水平。结果补阳还五汤和MSCs移植能够改善脊髓损伤大鼠的脊髓损伤程度,提高了脊髓损伤大鼠的Tarlov评分,倾斜平面临界角度也明显增加,与假手术组相比,模型组中p-JAK2、p-STAT3、p-AKT、GP130、IL-6的表达水平均显著上调;与模型组相比,补阳还五汤、MSCs细胞移植、补阳还五汤+MSCs组中的p-JAK2、p-STAT3、GP130、IL-6的蛋白表达水平均显著下调。脊髓损伤模型大鼠中Brdu含量与假手术组相比随着时间的增加明显降低,而补阳还五汤、MSCs细胞移植组中Brdu含量与模型组相比在不同的作用时间明显上升,MSCs细胞移植、补阳还五汤+MSCs组Brdu含量在第1周时表达最多。结论补阳还五汤和MSCs移植能够改善脊髓损伤,且能够抑制p-JAK2、p-STAT3、GP130、IL-6的蛋白表达,促进SCI后的神经再生修复功能,可能与补阳还五汤和MSCs移植能够抑制IL-6蛋白的表达,从而抑制JAK2/STAT3信号通路的表达有关。
- 吴成林郭德华许洋刘小舟罗露洁张国福
- 关键词:补阳还五汤骨髓间质干细胞移植脊髓损伤
- 基于JAK2/STAT3信号通路探究补阳还五汤联合骨髓间质干细胞移植治疗脊髓损伤的机制研究
- 目的: 1.研究补阳还五汤联合骨髓间质干细胞移植对脊髓外伤性截瘫的治疗作用;2.基于JAK2/STAT3信号通路研究补阳还五汤促进骨髓间质干细胞趋化迁移治疗脊髓外伤性截瘫的机制。 方法:选择8~10W的Sprague...
- 吴成林
- 关键词:脊髓损伤信号通路补阳还五汤骨髓间质干细胞移植
- 基于行为学及皮层体感诱发电位研究补阳还五汤联合骨髓间质干细胞移植对脊髓外伤性截瘫的治疗作用
- 目的:探讨补阳还五汤联合BMSCs移植对脊髓外伤性截瘫的治疗作用及可能的作用机理。 方法:使用改良Allen重物打击法建立大鼠脊髓外伤性截瘫模型。将50只大鼠随机分为假手术组、模型组、补阳还五汤组(25g/kg)、BM...
- 郭德华
- 关键词:补阳还五汤骨髓间质干细胞皮层体感诱发电位
- 基于PI3K/Akt信号通路探究补阳还五汤联合骨髓间质干细胞移植治疗脊髓损伤的作用机制被引量:6
- 2023年
- 目的:探讨补阳还五汤联合骨髓间质干细胞(BMSCs)移植治疗脊髓损伤(SCI)的作用机制。方法:用不同浓度(12.5、25、50 g·kg^(-1))的补阳还五汤灌胃,通过改良Tarlov评分测定大鼠脊髓功能,筛选出补阳还五汤最合适的浓度。再将SD大鼠分为6组,即假手术组(灌胃等体质生理盐水)、模型组(灌胃等体质生理盐水)、补阳还五汤组(灌胃25 g·kg^(-1)补阳还五汤)、BMSCs移植组(尾静脉注射BMSCs 1 mL)、补阳还五汤+BMSCs组(灌胃25 g·kg^(-1)补阳还五汤同时尾静脉注射BMSCs1mL)、补阳还五汤+BMSCs+LY294002组(灌胃25g·kg^(-1)补阳还五汤,同时尾静脉注射BMSCs1mL和LY29400240 mg·kg^(-1)),各10只。改良Tarlov评分、斜板试验和皮层体感诱发电位波潜伏期测定大鼠脊髓功能;免疫组化法检测脊髓组织中5-溴-2-脱氧尿嘧啶核苷(Brdu)标记的阳性细胞数;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测脊髓组织中磷酸化蛋白激酶B(p-Akt)、糖蛋白130(gp130)、白细胞介素-6(IL-6)蛋白表达。结果:与假手术组比较,模型组的Tarlov评分和倾斜平面临界角度明显降低(P<0.05),皮层体感诱发电位波潜伏期和p-Akt、gp130、IL-6蛋白表达均明显升高(P<0.05)。与模型组比较,假手术组和各治疗组的Tarlov评分和倾斜平面临界角度均明显升高(P<0.05),皮层体感诱发电位波潜伏期和p-Akt、gp130、IL-6蛋白表达均明显降低(P<0.05)。和BMSCs组比较,补阳还五汤+BMSCs组Tarlov评分和倾斜平面临界角度明显升高(P<0.05),皮层体感诱发电位波潜伏期和p-Akt、gp130、IL-6蛋白表达明显降低(P<0.05),移植5周后,补阳还五汤+BMSCs组Brdu标记阳性细胞数明显增多(P<0.05)。和补阳还五汤+BMSCs组比较,补阳还五汤+BMSCs+LY294002组Tarlov评分和倾斜平面临界角度明显升高(P<0.05),皮层体感诱发电位波潜伏期和p-Akt、gp130、IL-6蛋白表达明显降低(P<0.05),移植5周后,补阳还五汤+BMSCs+LY294002组Brdu标记阳性细胞数明显增�
- 许洋吴成林郭德华喻胤禛张国福
- 关键词:脊髓损伤补阳还五汤
- 骨髓间质干细胞移植联合超声介入治疗犬急性脑梗死模型价值的实验研究被引量:1
- 2021年
- 目的探讨骨髓间质干细胞(BMSCs)移植联合超声介入治疗犬急性脑梗死模型的价值。方法18只杂种犬,犬龄6~10年,体重5~20 kg,所有犬均建立急性脑梗死模型,随机数字表法平分为3组-模型组、介入组、干细胞组,介入组给予超声介入治疗,干细胞组给予BMSCs移植联合超声介入治疗,模型组不进行任何治疗处理。观察比较3组治疗第2周与第4周的mNSS神经功能评分、凝血酶原时间(PT)与纤维蛋白原(FIB);评价3组治疗第4周的脑血管造影总有效率;测定3组治疗第4周的海马组织Caspase-3、Bax蛋白相对表达水平。结果介入组、干细胞组治疗第2周与第4周的mNSS神经功能评分均低于模型组,且干细胞组低于介入组,差异均有统计学意义(P<0.05)。3组治疗不同时间点的PT与FIB等凝血纤溶功能指标在组内与组间对比差异均无统计学意义(P>0.05)。模型组、介入组、干细胞组治疗第4周的脑血管造影总有效率分别为100.0%、50.0%和16.7%,干细胞组总有效率显著低于模型组、介入组,差异有统计学意义(P<0.05)。介入组、干细胞组治疗第4周的海马组织Caspase-3、Bax蛋白相对表达水平低于模型组,且干细胞组低于介入组,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论BMSCs移植联合超声介入治疗犬急性脑梗死能抑制海马组织细胞凋亡,且不会影响犬的凝血及纤溶状况,从而可提高总体治疗效果,改善神经功能状况。
- 张敏楠蒋俊金兰
- 关键词:骨髓间质干细胞超声介入海马组织
- 小神经胶质细胞去除联合骨髓间质干细胞移植修复小鼠脊髓损伤的实验研究被引量:2
- 2021年
- 目的探讨小神经胶质细胞去除联合骨髓间质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)移植修复脊髓损伤(spinal cord injury,SCI)的效果。方法培养表达绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)的BMSCs并进行干细胞鉴定,体外检测GFP-BMSCs分泌营养因子情况,与背根神经节(dorsal root ganglions,DRGs)共培养,观察其促进轴突生长效果;应用集落刺激因子1受体(colony stimulating factor 1 receptor,CSF1R)抑制剂PLX3397去除小鼠脊髓中小神经胶质细胞,并对脊髓进行钳夹损伤(Crush损伤),成功建立去除小神经胶质细胞小鼠SCI模型,将GFP-BMSCs移植到去除小神经胶质细胞小鼠SCI区域。将小鼠随机分为单纯饲料组和PLX3397组。于术后7、30、60 d分别取材,进行HE染色、免疫荧光染色对比观察移植GFP-BMSCs存活情况及神经组织修复情况;应用Basso mouse scale(BMS)评分来评价小鼠运动功能恢复情况。结果体外GFP-BMSCs能够分泌大量的神经营养因子,其与DRGs共培养,促进了DRGs神经轴突的生长。去除小神经胶质细胞明显提高SCI区域移植GFP-BMSCs存活,与单纯GFP-BMSCs移植相比,两者联合作用能够在一定程度上减少损伤区域面积,但差异无统计学意义(t=2.141,P=0.065)。免疫荧光染色显示单纯移植GFP-BMSCs或去除小神经胶质细胞后移植GFP-BMSCs均未能使皮质脊髓束(corticospinal tract,CST)轴突跨过损伤中心到达脊髓远端,在损伤后1、7、14、21、28 d行BMS评分,单纯饲料组分别为(1.20±0.45)、(3.20±0.45)、(3.80±0.45)、(4.20±0.45)、(4.60±0.55)分,PLX3397组分别为(0.60±0.55)、(3.00±0.71)、(3.80±0.84)、(4.20±0.84)、(4.40±0.89)分,两组各个时间点BMS评分差异无统计学意义(均P>0.05)。结论去除小神经胶质细胞提高了SCI区域移植GFP-BMSCs存活,但是未能促进CST轴突再生及脊髓损伤小鼠运动功能恢复,可能需要联合促轴突再生策略以提高SCI后神经功能恢复。
- 付海涛戚超陈进利高甲科李海峰赵夏张益申友亮张英泽于腾波
- 关键词:小神经胶质细胞间质干细胞脊髓损伤动物实验
- 骨髓间质干细胞移植对肝纤维化模型大鼠治疗效果被引量:6
- 2017年
- 目的探讨骨髓间质干细胞(MSCs)对肝纤维化模型大鼠肝功能及肝纤维化的改善情况。方法将39只健康雌性SD大鼠分为对照组(n=14)和肝纤维化模型组(n=25)。对照组给予普通食水喂养;肝纤维化模型组给予四氯化碳液体橄榄油混合液皮下注射及乙醇喂养,建立大鼠肝纤维化模型。建模成功后将存活的大鼠随机分为对照组、模型组和移植组(每组各9只)。取健康SD大鼠骨髓,利用全骨髓贴壁的方法原代培养骨髓MSCs,然后将MSCs通过大鼠尾静脉对肝纤维化模型大鼠进行移植。移植后4周,检测血清白蛋白、转氨酶、胆红素、Ⅳ型胶原;HE和Masson染色观察肝纤维化程度。结果 MSCs移植后4周,移植组和模型组大鼠肝的纤维组织增生较对照组大鼠重,差异有统计学意义(P<0.01);但移植组大鼠肝的纤维组织增生较模型组大鼠显著减轻,差异有统计学意义(P<0.05)。模型组和移植组的肝功能较对照组差,差异有统计学意义(P<0.01);但与模型组比较,移植组大鼠血清白蛋白显著增高,胆红素、转氨酶、Ⅳ型胶原显著降低,差异有统计学意义(P<0.05)。结论肝纤维化模型大鼠骨髓MSCs移植4周后肝功能改善,肝纤维化程度显著减轻。
- 刘卫余森源严和中王教学侯曦露王丽娟黎绍芳唐郡
- 关键词:骨髓间质干细胞肝纤维化
- 骨髓间质干细胞移植减轻犬急性脑梗死模型的缺血性脑损伤研究被引量:3
- 2017年
- 目的观察骨髓间质干细胞(BMSCs)对犬急性缺血脑组织的保护作用,并探讨其可能的机制。方法将24只成年杂交犬随机分为治疗组及对照组,DSA引导下行自体血栓栓塞大脑中动脉闭塞缺血模型制作,并抽取骨髓提取BMSCs,传代并给予4’,6-二脒基-2-苯基吲哚(DAPI)标记;1周后开颅行多点脑内注射BMSCs移植;移植后1周行脑DWI序列扫描,计算梗死灶体积;4周后将犬处死,每组随机选择6只动物取脑标本行TTC染色测定梗死灶体积;另外6只动物进行HE染色、VG染色、TUNEL染色评价脑损伤情况;免疫荧光染色了解脑源性神经营养因子(BDNF)、碱性成纤维生长因子(b FGF)、胰岛素样生长因子1(IGF-1)和血管内皮生长因子(VEGF)的表达情况。结果治疗组梗死灶内广泛存在DAPI阳性细胞。治疗组的梗死灶体积明显小于对照组,P<0.01。治疗组梗死灶范围、梗死灶内细胞坏死、胶质增生和胶质瘢痕均较对照组减轻。治疗组凋亡细胞明显少于对照组,P<0.05。治疗组细胞因子BDNF、BFGF、IGF-1和VEGF表达阳性的细胞均显著多于对照组。结论脑梗死后给予BMSCs移植,BMSCs能存活并自行向梗死灶迁移,并发挥脑保护作用,其机制可能和分泌多种神经营养因子有关。
- 冷辉林蔡龙
- 关键词:骨髓间质干细胞脑梗死细胞因子
- 探讨骨髓间质干细胞移植后肝星状细胞凋亡情况及其治疗肝纤维化的机制
- 目的:探讨骨髓间质干细胞移植后肝星状细胞凋亡情况及其治疗肝纤维化的机制.
方法:购买中山大学动物实验中心提供的30只清洁级SD大鼠,实验研究20只,提取骨髓间质干细胞10只作为实验组,建立肝纤维化大鼠模型,骨髓...
- 吴雄健朱海燕毛忠懿张蕾谢军
- 关键词:肝纤维化骨髓间质干细胞移植肝星状细胞细胞凋亡