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促红细胞素对牦牛肾间质纤维细胞凋亡因子表达的影响
2024年
旨在探讨促红细胞素(EPO)对牦牛肾间质纤维细胞(RIFs)中凋亡因子的影响。本研究首先分别采集3头4岁龄的健康牦牛和黄牛的肾脏组织,采用免疫组织化学方法和Western blot检测牦牛和黄牛肾脏中EPO的准确分布及其表达量。同时对牦牛RIFs进行原代培养鉴定,并对其进行不同药物处理来调控RIFs中EPO表达水平,检测EPO对凋亡相关基因Bax,Bcl-2,PCNA在mRNA和蛋白表达水平的影响。免疫组化学检测结果显示,EPO在牦牛和黄牛肾脏中集合管上皮细胞、肾小管上皮细胞和小管周间质纤维细胞中均呈阳性表达。qRT-PCR和Western blot结果显示,EPO在牦牛肾脏中的表达量显著高于黄牛(P<0.001)。随后对生EPO的RIFs进行原代培养并调控EPO的表达,结果表明:激活组显著升高RIFs中Bcl-2和PCNA的表达,降低Bax的表达(P<0.001)。EPO抑制组显著降低RIFs中Bcl-2、PCNA的表达,上调Bax的表达(P<0.001)。综上表明,EPO在牦牛和黄牛肾脏中集合管上皮细胞、肾小管上皮细胞和小管周间质纤维细胞中均呈阳性表达,牦牛肾脏中的EPO高表达能够促进RIFs中Bcl-2和PCNA的表达,并降低Bax的表达,说明EPO可以在牦牛肾脏中起到抗凋亡的作用。
卢增华崔燕余四九余四九卢鸿琴何俊峰卢凯何俊峰祁正满
关键词:牦牛凋亡
槲皮素干预肾间质纤维细胞糖酵解抗肾间质纤维化机制研究被引量:5
2023年
目的:从干预肾间质纤维细胞的糖酵解角度研究槲皮素(Que)在体内外抗纤维化的作用和机制。方法:体内实验,小鼠分组给药,剖取肾脏,称重并进行组织病理学检查和生化指标检测;体外实验,不同试剂处理大鼠正常肾纤维细胞(NRK-49F细胞),提取蛋白,采用蛋白免疫印迹(Western Blot)法检测NRK-49F细胞活化指标α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、增殖细胞核抗原(PCNA)等蛋白的表达情况;采用荧光法考查Que对转化生长因子-β(TGF-β1)和表皮细胞生长因子(EGF)诱导的NRK-49F细胞葡萄糖摄取的影响;乳酸检测试剂盒检测不同实验组细胞的乳酸含量;荧光定量PCR法检测Que对TGF-β1和EGF诱导的NRK-49F细胞糖酵解关键酶己糖激酶(HK2)、磷酸果糖激酶1(PFK1)和肌肉丙酮酸激酶同工酶2(PKM2)的mRNA的影响。结果:与UUO组比较,Que给药组肾脏组织形态结构均有不同程度的缓解,与抑制糖酵解有关,且小鼠血清中尿素氮(BUN)水平和血肌酐(Scr)水平呈现明显的下降趋势;NRK-49F细胞中乳酸生和葡萄糖摄取量逐渐减少,Que对TGF-β1和EGF诱导的RIF的糖酵解关键酶的mRNA水平逐渐降低,并与PKM2有关。结论:Que能够抑制NRK-49F细胞PKM2酶活性和糖酵解,并减少TGF-β1诱导的肌纤维细胞活化。
马月马旺博周智华常静雯范方田
关键词:肾间质纤维化槲皮素糖酵解
LINC00703增强肾间质纤维细胞骨样表型参与兰德尔斑块形
目的:草酸钙(Calcium oxalate,CaOx)结石是最常见的一种肾结石。越来越多的证据表明,兰德尔斑块(Randall's plaque,RP)为CaOx结石提供附着点是CaOx结石形的机制之一。目前关于RP...
黄芳
关键词:草酸钙结石人肾间质成纤维细胞Β-CATENIN
间质纤维细胞TP53RK在慢性肾脏病中的作用及机制研究
慢性肾脏病(CKD)的发病率和死亡率日益攀升,已经为威胁人类健康的公共卫生问题。肾间质纤维化是CKD的主要病理表现,其中异常活化的肾间质纤维细胞在CKD过程中起重要作用。TP53RK是一种丝/苏氨酸激酶,该基因发生突...
樊姣姣
关键词:CKD肾间质纤维化肾间质成纤维细胞CKDPI3K/AKTMAPK
肾小管上皮细胞通过Klotho蛋白调控肾间质纤维细胞骨分化的机制研究
背景:肾结石大部分为草酸钙结石,草酸钙肾结石的形与Randall斑块(RP)密切相关。Randall斑块起源于Henle氏袢的肾小管基底膜下的磷酸钙晶体沉积,斑块形机制与骨相似。肾间质纤维细胞(h RIFs)具有...
阮书豪
关键词:KLOTHO蛋白肾间质成纤维细胞肾小管上皮细胞成骨分化草酸钙肾结石
miR-23b-3p调控肾间质纤维细胞骨样分化参与Randall斑形的机制研究被引量:1
2023年
目的探究miR-23b-3p对肾间质纤维(hRIFs)细胞骨样分化和Randall斑形的影响及其可能机制。方法采用qRT-PCR技术检测草酸钙(CaOx)结石患者Randall斑组织(RP)和接受肾切除术的肾肿瘤患者正常乳头状组织(nRP)的miR-23b-3p和肌细胞特异性增强子因子2C(MEF2C)、骨标志物人骨钙蛋白(OCN)、骨桥蛋白(OPN)、Runt相关转录因子2(Runx2)的mRNA表达水平;体外分离、培养hRIFs细胞,将miR-23b-3p过表达质粒pSi-miR-23b-3p及空载质粒pSi-NC和MEF2C慢病毒过表达质粒Lv-MEF2C及空载质粒Lv-NC转染至hRIFs细胞中,并诱导细胞骨分化14 d;ELISA法检测细胞碱性磷酸酶(ALP)活性;茜素红染色观察各组细胞矿化结节形情况;qRT-PCR检测细胞中miR-23b-3p和MEF2C、OCN、OPN、Runx2 mRNA表达水平;Western blot检测细胞中MEF2C蛋白表达水平;双荧光素酶报告基因实验验证miR-23b-3p与MEF2C的靶向关系。结果①与nRP组比较,RP组中miR-23b-3p低表达,而MEF2C、OCN、OPN和Runx2 mRNA高表达;②hRIFs骨诱导14 d后,细胞中ALP活性升高,矿化结节形能力增强,miR-23b-3p表达水平降低,而MEF2C、OCN、OPN和Runx2 mRNA表达水平及MEF2C蛋白表达水平升高;③miR-23b-3p过表达降低骨诱导后hRIFs细胞中ALP活性,抑制细胞矿化结节形能力,下调细胞中OCN、OPN、Runx2 mRNA表达水平;④MEF2C过表达可逆转miR-23b-3p过表达对hRIFs细胞骨分化的抑制作用;⑤MEF2C是miR-23b-3p下游靶基因。结论miR-23b-3p在RP组织及hRIFs细胞骨样分化过程中低表达,上调miR-23b-3p可抑制hRIFs细胞骨样分化,其作用机制可能与靶向沉默MEF2C有关。
雷波邱明星刘健男
关键词:人肾间质成纤维细胞草酸钙结石
低氧下牦牛、黑白花牛肾间质纤维细胞PDK1、Smad2、Caspase3等因子表达差异研究被引量:2
2023年
为了比较低氧条件下不同海拔牛种肾间质纤维细胞(RIFs)内PDK1、Smad2、Caspase3等因子的表达差异及细胞增殖差异,并进一步探究牦牛肾脏的高原低氧适应性特点,本研究采用牦牛和黑白花牛RIFs作为研究对象,低氧(1%O2)处理后,通过实时荧光定量PCR(qRT-PCR)和蛋白免疫印迹(WB)法检测细胞内PDK1等因子表达差异。波形蛋白(Vimentin)免疫组化染色鉴定结果显示,两种牛的原代RIFs纯度较高,可用于后续试验。低氧处理后,两种牛的RIFs内PDK1、Smad2及Caspase3的mRNA和蛋白表达均存在不同程度上调,且种属间存在显著差异(P<0.05),牦牛HIF-1α、PDK1、Smad2及Caspase3等基因表达量于24 h达到峰值,之后下调,而黑白花牛基因则随时间呈递增趋势,且牦牛RIFs低氧下增殖能力低于黑白花牛。综上所述,低氧诱导的相关转录因子表达存在差异,两种牛RIFs的增殖能力存在差异,这可能是导致低氧下黑白花牛肾纤维化程度的加深,从而产生肾源性高原疾病的原因之一。本研究为比较不同海拔牛种肾脏的低氧适应性研究提供了基础数据,为探索牦牛肾脏高原低氧适应机制提供了一定的理论依据。
姚一凡张伊阳董仕慧李睿张兰周熳琳乔自林乔自林
关键词:牦牛黑白花牛肾间质成纤维细胞低氧
肿瘤间质纤维细胞对体外培养唾液腺多形性腺瘤细胞生物学行为的影响
2023年
目的探讨肿瘤间质纤维细胞(TSF)对体外培养唾液腺多形性腺瘤(SPA)细胞增殖、侵袭和迁移的影响。方法采用组织块培养法培养唾液腺多形性腺瘤细胞(SPAC)、TSF和瘤旁正常纤维细胞(NF),并通过免疫细胞化学染色法进行细胞鉴定。选取对数期TSF、NF制备条件培养液,培养SPAC并命名为TSF-SPAC组和NF-SPAC组,单纯培养SPAC作为对照组(SPAC组)。采用MTT实验、Transwell实验和划痕实验分别检测3组细胞的增殖、侵袭和迁移能力;酶联免疫吸附测定(ELISA)检测3组培养液中血管内皮生长因子(VEGF)的表达量。结果免疫细胞化学染色显示:波形蛋白(Vimentin)在TSF和NF中为阳性,而α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)和纤维细胞活化蛋白(FAP)在NF中为阴性,在TSF中为弱阳性。MTT结果显示:TSF-SPAC组细胞增殖与NF-SPAC组和SPAC组的差异有统计学意义(P<0.05),NF-SPAC组与SPAC组的细胞增殖的差异无统计学意义(P>0.05)。Transwell侵袭实验和迁移实验显示:3组细胞的侵袭和迁移的差异无统计学意义(P>0.05)。ELISA检测结果显示:3组VEGF的表达量的差异均无统计学意义(P>0.05)。结论TSF可能参与了SPA的生物学行为,促进体外培养的SPAC增殖,对其体外侵袭和迁移无促进作用,为SPA寻找新的治疗靶点提供了方向。
侯亚丽李荷香宋鹏杨艳霄郝亚丽刘慧娟
关键词:增殖交界性肿瘤
补体C5a及受体对人肾间质纤维细胞增殖的影响及机制研究
2022年
目的探讨补体C5a及受体(C5aR)对人肾间质纤维细胞(human renal interstitial fibroblasts,hRIFs)增殖及纤维化相关因子表达的影响。方法原代培养hRIFs细胞,对细胞进行鉴定后,检测C5aR表达情况;同用C5a和C5aR拮抗剂分别对hRIFs处理后检测细胞增殖、细胞外基质蛋白(fibronectin,Collagen-I)以及转化生长因子-β1(TGF-β1)的蛋白表达情况。结果hRIFs细胞vimentin蛋白表达阳性,desmin蛋白表达阴性,C5aR表达于hRIFs细胞表面。MTS实验结果显示:与对照组相比,C5a纯品(浓度分别为10,15,20nmol/L)刺激后第2h,8h的A值差异无统计学意义(P>0.05),刺激后第24h的A值(0.217±0.037 vs 0.613±0.016,0.793±0.041,0.887±0.039)显著升高,差异有统计学意义(t=4.891,4.211,8.408,均P<0.05)。与C5a纯品组相比,C5a纯品+C5aR拮抗剂组的A值明显降低(0.887±0.039 vs 0.424±0.016),差异有统计学意义(t=8.657,P<0.05)。Western-Blot结果显示,与对照组相比,补体C5a(20nmol/L)刺激后第24h,fibronectin(26091±128 vs 15400±105),Collagen-I(31229±129 vs 24823±136)以及TGF-β1(27855±161 vs 20326±152)蛋白表达水平都有明显增加,差异具有统计学意义(t=4.891,5.820,2.311,均P<0.05)。与C5a纯品组相比,C5a纯品+C5aR拮抗剂组fibronectin(22188±132 vs 26091±128),Collagen-I(27181±113 vs 31229±129)以及TGF-β1(25013±139 vs 27855±161)蛋白表达水平显著降低,差异具有统计学意义(t=2.349,1.618,3.774,均P<0.05)。结论补体C5a-C5aR相互作用可导致hRIFs细胞增殖、促纤因子TGF-β1表达升高及细胞外基质蛋白生增加,对肾间质纤维化具有重要意义。
朱娜冯婷冯杨萌封青李静艳
关键词:补体C5AC5A受体人肾间质成纤维细胞肾间质纤维化
抑制P2X7受体表达对高糖诱导的肾间质纤维细胞TGF-β1/p38MAPK信号通路的影响被引量:5
2022年
目的探究抑制P2X7受体(R)表达对高糖诱导的肾间质纤维细胞转化生长因子(TGF)-β1/p38丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路的影响。方法设计、合P2X7R序列并制备慢病毒悬液,分离肾间质纤维细胞,分为空白组、高糖组、过表达组、沉默组,空白组细胞使用DMEM完全培养液+5.5 mmol/L葡萄糖培养;高糖组使用DMEM完全培养液+25 mmol/L葡萄糖培养;过表达组细胞使用2 ml按照1∶1比例混合的siNC P2X7R慢病毒悬液和DMEM培养液+25 mmol/L葡萄糖培养;沉默组细胞使用2 ml按照1∶1比例所混合的siRNA P2X7R慢病毒悬液和DMEM培养液+25 mmol/L葡萄糖培养。对比4组细胞增殖、凋亡能力、丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)水平及TGF-β1/p38MAPK信号通路因子表达量。结果沉默组细胞增殖率低于过表达组,细胞凋亡率高于过表达组,具有统计学差异(P<0.05)。沉默组MDA水平低于过表达组,SOD水平高于过表达组,具有统计学差异(P<0.05)。沉默组TGF-β1、p38MAPK、Caspase-3 mRNA表达量均低于过表达组,具有统计学差异(P<0.05)。结论抑制P2X7受体表达可经影响高糖诱导的肾间质纤维细胞TGF-β1/p38MAPK信号通路,抑制氧化应激及增殖,促进凋亡,进而减轻肾损伤。
张和平谢荣刘佳丽李沁云杨琨冯江超
关键词:P2X7受体肾间质成纤维细胞

相关作者

王伟铭
作品数:365被引量:1,824H指数:21
供职机构:上海交通大学医学院附属瑞金医院
研究主题:IGA肾病 肾脏疾病 肾间质纤维化 慢性肾脏病 肾小管上皮细胞
张庆怡
作品数:126被引量:1,212H指数:19
供职机构:上海第二医科大学附属仁济医院
研究主题:糖尿病肾病 肾间质成纤维细胞 糖尿病大鼠 肾疾病 C-MET
倪兆慧
作品数:850被引量:3,984H指数:28
供职机构:上海交通大学医学院附属仁济医院
研究主题:腹膜透析 急性肾损伤 慢性肾脏病 腹膜透析患者 维持性血液透析患者
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供职机构:复旦大学附属中山医院
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牟姗
作品数:224被引量:877H指数:15
供职机构:上海交通大学医学院附属仁济医院
研究主题:慢性肾脏病 慢性肾脏病患者 急性肾损伤 IGA肾病 狼疮性肾炎