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一步法检测SFTSV、HTNV、问号 钩 端 螺旋体 和莫氏立克次体 的试剂盒 本发明涉及一种可同时检测SFTSV、HTNV、问号 钩 端 螺旋体 和莫氏立克次体 的试剂盒,包括用于检测SFTSV的引物对I、用于检测HTNV的引物对II,用于检测问号 钩 端 螺旋体 的引物对III,以及用于检测莫氏立克次体 的引物对I... 孙健红 唐桂华 孟庆辉 许娜 龚星威问号 钩 端 螺旋体 感染诱导人巨噬细胞发生自噬及自噬作用研究2024年 目的了解问号 钩 端 螺旋体 (简称钩 体 )对人巨噬细胞自噬的影响,并研究自噬在巨噬细胞杀灭钩 体 过程中的作用。方法人THP-1单核细胞用佛波酯(PMA)预处理使其分化为巨噬细胞。采用透射电镜法检测细胞内钩 体 及自噬小体 形态。采用激光共聚焦显微镜法结合LC3-II-GFP质粒脂质体 转染技术检测胞内自噬小体 形成情况及与钩 体 共定位水平。采用Western blotting技术检测自噬相关蛋白LC3和P62表达水平。采用激光共聚焦显微镜技术检测自噬小体 与溶酶体 共定位情况及胞内问号 钩 体 活力。结果钩 体 感染巨噬细胞后,胞内出现包裹有钩 体 的自噬小体 ,胞内LC3-II-GFP聚集点的数量增加,LC3-II-GFP与钩 体 共定位水平增加,且自噬小体 与溶酶体 共定位率增加。Western blotting检测结果显示,钩 体 感染巨噬细胞后,胞内LC3-II蛋白表达量增加,P62蛋白表达水平降低。自噬激活后细胞内问号 钩 体 死亡数量增加,反之亦然。结论问号 钩 体 感染可诱导人巨噬细胞产生自噬,且自噬有助于人巨噬细胞杀灭问号 钩 体 。 谷媛媛 谢玲 唐东 谭燕 陈旭关键词:钩端螺旋体病 问号钩端螺旋体 人巨噬细胞 自噬 短链脂肪酸丁酸增强巨噬细胞预防问号 钩 端 螺旋体 的急性感染 2024年 钩 端 螺旋体 病(钩 体 病)是一种全球性自然疫源性人兽共患传染病。研究表明,肠道菌群代谢产物短链脂肪酸参与宿主免疫调节、影响疾病进程。本试验旨在探究肠道菌群代谢产物短链脂肪酸在钩 体 病中的作用。结果表明,补充短链脂肪酸丁酸能显著提高金黄地鼠钩 体 病存活率。体 外试验表明,丁酸处理抑制感染钩 体 后巨噬细胞Cat和Gsr基因表达,但上调了NOX1和NOX4基因表达。同时,丁酸刺激增加了感染钩 体 巨噬细胞ROS水平,而高水平的ROS可增强巨噬细胞杀菌功能。体 内试验也证实丁酸通过调节ROS的产生保护金黄地鼠抵抗急性钩 端 螺旋体 病。综上所述,肠道菌群代谢产物短链脂肪酸丁酸通过调节ROS表达增强巨噬细胞杀菌功能,从而保护宿主抵抗钩 体 病。 陈曦 谢旭峰 刘鑫 刘久茜 张文龙 曹永国关键词:丁酸 钩体病 巨噬细胞 宏基因二代测序联合体 外膜肺氧合诊治问号 钩 端 螺旋体 病1例 被引量:2 2022年 报道浙江省宁波市第九医院2019年10月收治的1例,以发热、咳嗽为主诉症状的重症肺炎病例,通过mNGS检测快速诊断为问号 钩 端 螺旋体 病感染,住院期间患者出现呼吸衰竭,查支气管镜见肺泡内弥漫性出血,行ECMO治疗,1周后成功下机,半月后好转出院。 虞丽莎 罗启航 许善战关键词:钩端螺旋体病 ECMO 问号 钩 端 螺旋体 溶血素Sph2经HMGB1放大炎症反应的研究被引量:1 2021年 目的探讨问号 钩 端 螺旋体 溶血素Sph2经高迁移率组蛋白B1(high mobility group box-1,HMGB1)放大炎症反应的可能机制。方法一定浓度的rSph2与小鼠J774A.1巨噬细胞共孵育一定时间,乳酸脱氢酶(LDH)量的变化检测细胞的膜结构损伤情况;冷冻电镜观察细胞结构的改变;ELISA方法检测细胞上清液中HMGB1的含量变化。商品化的HMGB1与小鼠J774A.1巨噬细胞共孵育一定时间,Western blot检测NF-κB、p38-MAPK及JNK炎症信号通路关键分子的磷酸化水平;ELISA检测IL-1β、IL-6、KC(IL-8)等促炎细胞因子的表达情况。结果重组问号 钩 端 螺旋体 溶血素rSph2可导致J774A.1细胞明显的细胞核消失、细胞膜结构损伤、细胞裂解、膜泡胀;LDH释放量及HMGB1的含量明显增加;HMGB1增加NF-κB、p38-MAPK及JNK信号通路关键蛋白质的磷酸化水平;HMGB1上调J774A.1细胞IL-1β、IL-6、KC的表达且该上调作用可被3条通路抑制剂所抑制。结论重组问号 钩 端 螺旋体 溶血素rSph2诱导小鼠J774A.1巨噬细胞产生损伤并释放大量的HMGB1,HMGB1经NF-κB、p38-MAPK及JNK信号通路调控下游促炎细胞因子的表达,从而放大rSph2造成的炎症效应。 陈叙宏 高帅 孙爱华 严杰 林旭瑷关键词:问号钩端螺旋体 HMGB1 促炎细胞因子 问号 钩 端 螺旋体 溶血素Sph2经IL-1β/HMGB1放大炎症反应的研究 背景:问号 钩 端 螺旋体 (钩 体 )感染可引起钩 端 螺旋体 病,钩 体 可通过创口或黏膜进入机体 ,随血流进入人体 组织和器官,导致黄疸、黏膜出血和器官损伤。在钩 体 的基因组中,含有9个溶血素编码基因,其中Sph2是一种Mg 陈叙宏关键词:问号钩端螺旋体 巨噬细胞 IL-1Β HMGB1 促炎细胞因子 宿主细胞的脂筏在问号 钩 端 螺旋体 的进入和存活中起关键作用 2021年 钩 端 螺旋体 病(钩 体 病)是由致病性钩 端 螺旋体 (钩 体 )感染引起的一种全球广泛传播的自然疫源性人兽共患传染病。被钩 体 感染的人或动物可能会发展为严重的全身性疾病,严重者会导致死亡,但目前钩 体 进入细胞的机制尚不清楚。本试验探究了钩 体 (56601)进入细胞是否与脂筏相关。结果表明,J774A.1细胞和Vero细胞的脂筏被破坏后,其细胞内的钩 体 量明显降低,表明钩 体 进入细胞的过程与脂筏相关,并且钩 体 进入细胞依赖脂筏而与巨噬细胞的吞噬作用无关。透射电子显微镜、qPCR和Western blot结果显示,脂筏被破坏后加速了细胞内钩 体 的清除并减少了胞内钩 体 量,并且激活了细胞自噬。为了探究细胞清除钩 体 能力的增强是否与细胞自噬有关,采用雷帕霉素和甲基腺嘌呤(3-methyladenine, 3MA)分别刺激细胞,钩 体 培养计数结果显示,雷帕霉素处理组胞内钩 体 量明显降低,表明细胞自噬水平的提高有助于杀灭钩 体 。综上所述,钩 体 进入细胞需要脂筏,脂筏被破坏后,进入细胞的钩 体 量明显减少,并且细胞清除钩 体 的能力明显增高,这可能与细胞自噬水平的升高有关。 吕天宝 王佳琪 谢旭峰 宋宁 关钰颖 吴殿君 张文龙 曹永国关键词:钩端螺旋体 脂筏 细胞自噬 问号 钩 端 螺旋体 跨血管内皮细胞转运分子机制研究2020年 目的探讨问号 钩 端 螺旋体 (简称钩 体 )跨血管内皮细胞转运分子机制。方法采用Transwell法了解问号 钩 体 赖株穿越人脐静脉血管内皮细胞(HUVEC)单层能力。采用透射电镜和激光共聚焦显微镜法检测HUVEC内吞问号 钩 体 后形成内吞泡情况。采用细胞内吞抑制试验确定HUVEC内吞问号 钩 体 方式。采用激光共聚焦显微镜法检测HUVEC胞内问号 钩 体 与溶酶体 标志分子LAMP1共定位情况。采用暗视野显微镜Petroff-Hausser计数法检测HUVEC胞内问号 钩 体 出胞情况。结果问号 钩 体 赖株能迅速穿越HUVEC细胞单层。问号 钩 体 通过PI3K-微丝依赖的细胞内吞方式进入HUVEC并形成内吞泡。HUVEC胞内问号 钩 体 不与LAMP1共定位,提示问号 钩 体 内吞泡不与溶酶体 融合。HUVEC胞内问号 钩 体 通过FAK-微丝/微管途径出胞。结论问号 钩 体 通过跨细胞转运方式穿越人血管内皮细胞导致体 内播散并加重病情。 李丹 王运中 计雪强 邵雪君 朱宏 严杰 李阳关键词:问号钩端螺旋体 败血症 血管内皮细胞 问号 钩 端 螺旋体 vWF-A基因产物结合人胶原蛋白的作用与机制2020年 目的确定问号 钩 端 螺旋体 vWF-A基因产物结合人胶原蛋白的作用与机制。方法采用生物信息学软件分析问号 钩 端 螺旋体 黄疸出血群赖型赖株vWF-A基因(LA_0012、LA_0697和LA_4207)产物结构与功能。构建上述基因vWF-A功能结构域片段原核表达系统,采用SDS-PAGE和Ni-NTA亲和层析法检查目的重组蛋白rLep0012、rLep0697和rLep4207表达情况和提纯效果。采用ELISA和表面等离子共振法(SPR)检测目的重组蛋白与人Ⅰ、Ⅲ、Ⅳ和Ⅵ型胶原蛋白(hCOL1/3/4/6)的结合能力。采用实时荧光定量RT-PCR和Western blot检测问号 钩 端 螺旋体 赖株感染人和小鼠血管内皮细胞(HUVEC和EOMA)时vWF-A基因转录和表达水平变化。结果vWF-A基因产物均为含vWF-A超家族结构域表面或跨膜蛋白,但LA_0697和LA_4207基因还含有金属离子依赖性黏附位点(MIDAS)。所构建的原核表达系统能有效表达目的重组蛋白,Ni-NTA亲和层析法提纯后SDS-PAGE检测均显示为单一蛋白条带。ELISA结果显示rLep0697与hCOL3/6、rLep4207与hCOL1/4呈强结合。SPR结果显示rLep0697快速结合hCOL3/6但快速解离(KD值=5.71×10-8和5.89×10-8 mol/L),rLep4207快速并稳定结合hCOL1/4(KD值=6.4×10-9和3.2×10-9 mol/L)。感染HUVEC和EOMA细胞时,上述vWF-A基因转录和表达水平均显著升高(P<0.05)。结论LA_0697和LA_4207基因产物可作为问号 钩 端 螺旋体 感染过程中的黏附因子。 李淑佩 孙爱华 林旭瑷 胡玮琳 严杰关键词:问号钩端螺旋体 胞外基质 胶原蛋白 问号 钩 端 螺旋体 Sigma N信号系统调控靶基因鉴定2020年 目的确定致病性问号 钩 端 螺旋体 (简称钩 体 )LA2404基因产物为Sigma N转录因子,鉴定Sigma N信号系统参与调控的下游靶基因。方法采用生物信息学软件并根据Sigma N调控基因启动子序列特征,预测并分析钩 体 基因组中LA2404基因及其调控的靶基因。采用等位交换原理构建问号 钩 体 LA2404基因敲除株(ΔLA2404)。采用实时荧光定量RT-PCR(qRT-PCR)检测ΔLA2404敲除株中候选靶基因mRNA水平变化。构建LA2404基因原核表达系统并提纯目的重组蛋白(rSigma N)。采用凝胶迁移试验(gel electrophoresis mobility shift assay,EMSA)验证Sigma N调控的靶基因。结果致病性问号 钩 体 黄疸出血群赖型赖株有一个Sigma N编码基因以及22个含Sigma N启动子序列的靶基因。ΔLA2404敲除株有钩 体 典型、活泼的运动方式,外形无明显变化。ΔLA2404敲除株中LA1188、LA2306、LA3426、LA1968、LA1313、LA3806和LA0773基因mRNA水平显著下调(P<0.05),其他靶基因mRNA水平无明显变化。EMSA结果显示,rSigma N可与上述靶基因启动子序列结合。结论LA2404基因产物为Sigma N调控基因。LA1188、LA2306、LA3426、LA1968、LA1313、LA3806和LA0773的启动子序列能与转录因子Sigma N结合,上述7个基因表达受Sigma N通路调控。 丁士标 李凯旋 李淑佩 陈叙宏 高帅 严杰 胡玮琳关键词:钩端螺旋体
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严杰 作品数:359 被引量:1,073 H指数:14 供职机构:杭州医学院 研究主题:问号钩端螺旋体 钩端螺旋体 幽门螺杆菌 原核表达系统 外膜蛋白 郭晓奎 作品数:282 被引量:1,419 H指数:16 供职机构:上海交通大学医学院 研究主题:钩端螺旋体 健康 噬菌体 问号钩端螺旋体 医学微生物学 林旭瑷 作品数:39 被引量:63 H指数:4 供职机构:浙江大学 研究主题:问号钩端螺旋体 钩端螺旋体 溶血素 鸟苷酸 细菌 毛亚飞 作品数:62 被引量:191 H指数:9 供职机构:浙江省舟山市妇幼保健院 研究主题:问号钩端螺旋体 原核表达系统 幽门螺杆菌 钩端螺旋体 J774A.1细胞 罗冬娇 作品数:58 被引量:155 H指数:7 供职机构:杭州师范大学 研究主题:问号钩端螺旋体 哮喘 钩端螺旋体 LIPL32 哮喘大鼠