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一步法检测SFTSV、HTNV、问号螺旋体和莫氏立克次的试剂盒
本发明涉及一种可同时检测SFTSV、HTNV、问号螺旋体和莫氏立克次的试剂盒,包括用于检测SFTSV的引物对I、用于检测HTNV的引物对II,用于检测问号螺旋体的引物对III,以及用于检测莫氏立克次的引物对I...
孙健红 唐桂华 孟庆辉 许娜 龚星威
问号螺旋体感染诱导人巨噬细胞发生自噬及自噬作用研究
2024年
目的了解问号螺旋体(简称)对人巨噬细胞自噬的影响,并研究自噬在巨噬细胞杀灭过程中的作用。方法人THP-1单核细胞用佛波酯(PMA)预处理使其分化为巨噬细胞。采用透射电镜法检测细胞内及自噬小形态。采用激光共聚焦显微镜法结合LC3-II-GFP质粒脂质转染技术检测胞内自噬小形成情况及与共定位水平。采用Western blotting技术检测自噬相关蛋白LC3和P62表达水平。采用激光共聚焦显微镜技术检测自噬小与溶酶共定位情况及胞内问号活力。结果感染巨噬细胞后,胞内出现包裹有的自噬小,胞内LC3-II-GFP聚集点的数量增加,LC3-II-GFP与共定位水平增加,且自噬小与溶酶共定位率增加。Western blotting检测结果显示,感染巨噬细胞后,胞内LC3-II蛋白表达量增加,P62蛋白表达水平降低。自噬激活后细胞内问号死亡数量增加,反之亦然。结论问号感染可诱导人巨噬细胞产生自噬,且自噬有助于人巨噬细胞杀灭问号
谷媛媛谢玲唐东谭燕陈旭
关键词:钩端螺旋体病问号钩端螺旋体人巨噬细胞自噬
短链脂肪酸丁酸增强巨噬细胞预防问号螺旋体的急性感染
2024年
螺旋体病(病)是一种全球性自然疫源性人兽共患传染病。研究表明,肠道菌群代谢产物短链脂肪酸参与宿主免疫调节、影响疾病进程。本试验旨在探究肠道菌群代谢产物短链脂肪酸在病中的作用。结果表明,补充短链脂肪酸丁酸能显著提高金黄地鼠病存活率。外试验表明,丁酸处理抑制感染后巨噬细胞Cat和Gsr基因表达,但上调了NOX1和NOX4基因表达。同时,丁酸刺激增加了感染巨噬细胞ROS水平,而高水平的ROS可增强巨噬细胞杀菌功能。内试验也证实丁酸通过调节ROS的产生保护金黄地鼠抵抗急性螺旋体病。综上所述,肠道菌群代谢产物短链脂肪酸丁酸通过调节ROS表达增强巨噬细胞杀菌功能,从而保护宿主抵抗病。
陈曦谢旭峰刘鑫刘久茜张文龙曹永国
关键词:丁酸钩体病巨噬细胞
宏基因二代测序联合外膜肺氧合诊治问号螺旋体病1例被引量:2
2022年
报道浙江省宁波市第九医院2019年10月收治的1例,以发热、咳嗽为主诉症状的重症肺炎病例,通过mNGS检测快速诊断为问号螺旋体病感染,住院期间患者出现呼吸衰竭,查支气管镜见肺泡内弥漫性出血,行ECMO治疗,1周后成功下机,半月后好转出院。
虞丽莎罗启航许善战
关键词:钩端螺旋体病ECMO
问号螺旋体溶血素Sph2经HMGB1放大炎症反应的研究被引量:1
2021年
目的探讨问号螺旋体溶血素Sph2经高迁移率组蛋白B1(high mobility group box-1,HMGB1)放大炎症反应的可能机制。方法一定浓度的rSph2与小鼠J774A.1巨噬细胞共孵育一定时间,乳酸脱氢酶(LDH)量的变化检测细胞的膜结构损伤情况;冷冻电镜观察细胞结构的改变;ELISA方法检测细胞上清液中HMGB1的含量变化。商品化的HMGB1与小鼠J774A.1巨噬细胞共孵育一定时间,Western blot检测NF-κB、p38-MAPK及JNK炎症信号通路关键分子的磷酸化水平;ELISA检测IL-1β、IL-6、KC(IL-8)等促炎细胞因子的表达情况。结果重组问号螺旋体溶血素rSph2可导致J774A.1细胞明显的细胞核消失、细胞膜结构损伤、细胞裂解、膜泡胀;LDH释放量及HMGB1的含量明显增加;HMGB1增加NF-κB、p38-MAPK及JNK信号通路关键蛋白质的磷酸化水平;HMGB1上调J774A.1细胞IL-1β、IL-6、KC的表达且该上调作用可被3条通路抑制剂所抑制。结论重组问号螺旋体溶血素rSph2诱导小鼠J774A.1巨噬细胞产生损伤并释放大量的HMGB1,HMGB1经NF-κB、p38-MAPK及JNK信号通路调控下游促炎细胞因子的表达,从而放大rSph2造成的炎症效应。
陈叙宏高帅孙爱华严杰林旭瑷
关键词:问号钩端螺旋体HMGB1促炎细胞因子
问号螺旋体溶血素Sph2经IL-1β/HMGB1放大炎症反应的研究
背景:问号螺旋体)感染可引起螺旋体病,可通过创口或黏膜进入机,随血流进入人组织和器官,导致黄疸、黏膜出血和器官损伤。在的基因组中,含有9个溶血素编码基因,其中Sph2是一种Mg
陈叙宏
关键词:问号钩端螺旋体巨噬细胞IL-1ΒHMGB1促炎细胞因子
宿主细胞的脂筏在问号螺旋体的进入和存活中起关键作用
2021年
螺旋体病(病)是由致病性螺旋体()感染引起的一种全球广泛传播的自然疫源性人兽共患传染病。被感染的人或动物可能会发展为严重的全身性疾病,严重者会导致死亡,但目前进入细胞的机制尚不清楚。本试验探究了(56601)进入细胞是否与脂筏相关。结果表明,J774A.1细胞和Vero细胞的脂筏被破坏后,其细胞内的量明显降低,表明进入细胞的过程与脂筏相关,并且进入细胞依赖脂筏而与巨噬细胞的吞噬作用无关。透射电子显微镜、qPCR和Western blot结果显示,脂筏被破坏后加速了细胞内的清除并减少了胞内量,并且激活了细胞自噬。为了探究细胞清除能力的增强是否与细胞自噬有关,采用雷帕霉素和甲基腺嘌呤(3-methyladenine, 3MA)分别刺激细胞,培养计数结果显示,雷帕霉素处理组胞内量明显降低,表明细胞自噬水平的提高有助于杀灭。综上所述,进入细胞需要脂筏,脂筏被破坏后,进入细胞的量明显减少,并且细胞清除的能力明显增高,这可能与细胞自噬水平的升高有关。
吕天宝王佳琪谢旭峰宋宁关钰颖吴殿君张文龙曹永国
关键词:钩端螺旋体脂筏细胞自噬
问号螺旋体跨血管内皮细胞转运分子机制研究
2020年
目的探讨问号螺旋体(简称)跨血管内皮细胞转运分子机制。方法采用Transwell法了解问号赖株穿越人脐静脉血管内皮细胞(HUVEC)单层能力。采用透射电镜和激光共聚焦显微镜法检测HUVEC内吞问号后形成内吞泡情况。采用细胞内吞抑制试验确定HUVEC内吞问号方式。采用激光共聚焦显微镜法检测HUVEC胞内问号与溶酶标志分子LAMP1共定位情况。采用暗视野显微镜Petroff-Hausser计数法检测HUVEC胞内问号出胞情况。结果问号赖株能迅速穿越HUVEC细胞单层。问号通过PI3K-微丝依赖的细胞内吞方式进入HUVEC并形成内吞泡。HUVEC胞内问号不与LAMP1共定位,提示问号内吞泡不与溶酶融合。HUVEC胞内问号通过FAK-微丝/微管途径出胞。结论问号通过跨细胞转运方式穿越人血管内皮细胞导致内播散并加重病情。
李丹王运中计雪强邵雪君朱宏严杰李阳
关键词:问号钩端螺旋体败血症血管内皮细胞
问号螺旋体vWF-A基因产物结合人胶原蛋白的作用与机制
2020年
目的确定问号螺旋体vWF-A基因产物结合人胶原蛋白的作用与机制。方法采用生物信息学软件分析问号螺旋体黄疸出血群赖型赖株vWF-A基因(LA_0012、LA_0697和LA_4207)产物结构与功能。构建上述基因vWF-A功能结构域片段原核表达系统,采用SDS-PAGE和Ni-NTA亲和层析法检查目的重组蛋白rLep0012、rLep0697和rLep4207表达情况和提纯效果。采用ELISA和表面等离子共振法(SPR)检测目的重组蛋白与人Ⅰ、Ⅲ、Ⅳ和Ⅵ型胶原蛋白(hCOL1/3/4/6)的结合能力。采用实时荧光定量RT-PCR和Western blot检测问号螺旋体赖株感染人和小鼠血管内皮细胞(HUVEC和EOMA)时vWF-A基因转录和表达水平变化。结果vWF-A基因产物均为含vWF-A超家族结构域表面或跨膜蛋白,但LA_0697和LA_4207基因还含有金属离子依赖性黏附位点(MIDAS)。所构建的原核表达系统能有效表达目的重组蛋白,Ni-NTA亲和层析法提纯后SDS-PAGE检测均显示为单一蛋白条带。ELISA结果显示rLep0697与hCOL3/6、rLep4207与hCOL1/4呈强结合。SPR结果显示rLep0697快速结合hCOL3/6但快速解离(KD值=5.71×10-8和5.89×10-8 mol/L),rLep4207快速并稳定结合hCOL1/4(KD值=6.4×10-9和3.2×10-9 mol/L)。感染HUVEC和EOMA细胞时,上述vWF-A基因转录和表达水平均显著升高(P<0.05)。结论LA_0697和LA_4207基因产物可作为问号螺旋体感染过程中的黏附因子。
李淑佩孙爱华林旭瑷胡玮琳严杰
关键词:问号钩端螺旋体胞外基质胶原蛋白
问号螺旋体Sigma N信号系统调控靶基因鉴定
2020年
目的确定致病性问号螺旋体(简称)LA2404基因产物为Sigma N转录因子,鉴定Sigma N信号系统参与调控的下游靶基因。方法采用生物信息学软件并根据Sigma N调控基因启动子序列特征,预测并分析基因组中LA2404基因及其调控的靶基因。采用等位交换原理构建问号LA2404基因敲除株(ΔLA2404)。采用实时荧光定量RT-PCR(qRT-PCR)检测ΔLA2404敲除株中候选靶基因mRNA水平变化。构建LA2404基因原核表达系统并提纯目的重组蛋白(rSigma N)。采用凝胶迁移试验(gel electrophoresis mobility shift assay,EMSA)验证Sigma N调控的靶基因。结果致病性问号黄疸出血群赖型赖株有一个Sigma N编码基因以及22个含Sigma N启动子序列的靶基因。ΔLA2404敲除株有典型、活泼的运动方式,外形无明显变化。ΔLA2404敲除株中LA1188、LA2306、LA3426、LA1968、LA1313、LA3806和LA0773基因mRNA水平显著下调(P<0.05),其他靶基因mRNA水平无明显变化。EMSA结果显示,rSigma N可与上述靶基因启动子序列结合。结论LA2404基因产物为Sigma N调控基因。LA1188、LA2306、LA3426、LA1968、LA1313、LA3806和LA0773的启动子序列能与转录因子Sigma N结合,上述7个基因表达受Sigma N通路调控。
丁士标李凯旋李淑佩陈叙宏高帅严杰胡玮琳
关键词:钩端螺旋体

相关作者

严杰
作品数:359被引量:1,073H指数:14
供职机构:杭州医学院
研究主题:问号钩端螺旋体 钩端螺旋体 幽门螺杆菌 原核表达系统 外膜蛋白
郭晓奎
作品数:282被引量:1,419H指数:16
供职机构:上海交通大学医学院
研究主题:钩端螺旋体 健康 噬菌体 问号钩端螺旋体 医学微生物学
林旭瑷
作品数:39被引量:63H指数:4
供职机构:浙江大学
研究主题:问号钩端螺旋体 钩端螺旋体 溶血素 鸟苷酸 细菌
毛亚飞
作品数:62被引量:191H指数:9
供职机构:浙江省舟山市妇幼保健院
研究主题:问号钩端螺旋体 原核表达系统 幽门螺杆菌 钩端螺旋体 J774A.1细胞
罗冬娇
作品数:58被引量:155H指数:7
供职机构:杭州师范大学
研究主题:问号钩端螺旋体 哮喘 钩端螺旋体 LIPL32 哮喘大鼠