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一种重组葡激酶突变体纯化制备工艺: 本公开提供一种重组葡激酶突变体纯化制备工艺，其包括步骤1工程菌菌体匀浆及匀浆液处理，步骤2重组蛋白的捕获，以及步骤3离子交换层析色谱精制；其中所述步骤2重组蛋白的捕获是将工程菌菌体匀浆处理液上样至镍亲和柱，通过改变咪唑浓...; 田赵源范敏陆游于东安游猛谭小钉梅菲王宇钱子俊; 文献传递

制备重组葡激酶-水蛭素融合蛋白的方法: 本发明提供了一种制备重组葡激酶‑水蛭素融合蛋白的方法，该方法采用Sepharose Q‑XL阴离子交换层析‑Uni Phenyl‑30L疏水层析‑中空纤维柱脱盐‑UniQ‑30L阴离子交换层析‑中空纤维柱超滤置换。本发明...; 王学海涂荣华许勇杨仲文吕兴凯任科云马梵辛鄢方兵陈爱芳何昆张帆田吕明黄璐; 文献传递

重组葡激酶对小型猪冠脉血栓的溶栓作用研究: 2020年; 目的:评价重组葡激酶的溶栓效力,并与相同作用方式的重组链激酶进行比较。方法:30只中国实验小型猪分成5组,分别为溶剂对照组、阳性药对照组和三个重组葡激酶组,每组6只,采用麻醉动物、手术开胸、直流电刺激形成冠脉血栓;在冠脉血栓形成30 min后开始静脉给药,采用先推注、再蠕动泵恒速输注的方式给药;溶剂对照组静脉推注对照液,阳性药对照组静脉给予重组链激酶4 mg·kg^-1,三个重组葡激酶组分别静脉给予4 mg·kg^-1、2 mg·kg^-1、1 mg·kg^-1重组葡激酶,静脉推注体积为5 ml,1 min内注毕,输注速度为0.5 ml·min-1,60 min内输毕,120 min后放血处死动物。于给药前及给药后30、60、120 min取静脉血,实验结束后取血栓形成部位的冠脉血管段,分别检测优球蛋白溶解时间(ELT)、血纤维蛋白原含量(Fbg)、纤维蛋白(原)降解产物(FDP)和伤口出血量,检测冠脉血栓溶解率、心肌缺血程度及缺血范围。结果:与溶剂对照组相比,试验组ELT明显缩短(P<0.05或P<0.01),FDP明显升高(P<0.05或P<0.01),较少量实验动物Fbg降解超过20%,对小型猪血压及心率无明显影响。与对照组相比,试验组高、中2个剂量组,最大血栓面积分别减少34.3%、15.4%(P<0.05)。与等剂量的重组链激酶相比,重组葡激酶对电刺激引起的冠脉血栓具有更强的溶栓作用(P<0.05或P<0.01),引起的出血副反应少。结论:重组葡激酶对小型猪冠脉血栓有较好的溶栓作用,相比重组链激酶,溶栓速度快、具有更高的纤维蛋白专一性,出血副反应较少。综合比较,2 mg·kg^-1重组葡激酶具有较好的临床疗效和安全性保障。; 李光方晓兰任仲李克强周松辉胡道奇吴刚强王太林李卫平; 关键词：重组葡激酶重组链激酶溶栓小型猪

RGD‑重组葡激酶‑人α微球蛋白融合蛋白及其制备与应用: 本发明提供了一种RGD‑重组葡激酶‑人α微球蛋白融合蛋白及其制备与应用。本发明所述RGD‑重组葡激酶‑人α微球蛋白融合蛋白的氨基酸序列如SEQID NO.12所示。本发明的融合蛋白通过以下制备方法获得：采用重叠延伸PCR...; 周建中汪德强苟冶然龙小滨陈检杨可白垒雷寒黄爱龙何泉张宏鹏; 文献传递

制备重组葡激酶-水蛭素融合蛋白的方法: 本发明提供了一种制备重组葡激酶-水蛭素融合蛋白的方法，该方法采用Sepharose Q-XL阴离子交换层析-Uni Phenyl-30L疏水层析-中空纤维柱脱盐-UniQ-30L阴离子交换层析-中空纤维柱超滤置换。本发明...; 王学海涂荣华许勇杨仲文吕兴凯任科云马梵辛鄢方兵陈爱芳何昆张帆田吕明黄璐; 文献传递

一种用于重组葡激酶生产的发酵系统搅拌装置: 本实用新型涉及一种用于重组葡激酶生产的发酵系统搅拌装置，其包括整体呈圆柱形的发酵罐、气源以及搅拌部；发酵罐的顶端开设有加料口、底部固定设置有支架；气源固定设置在发酵罐的顶部；搅拌部包括固定设置在发酵罐底部的电机、中空结构...; 李光任仲; 文献传递

重组葡激酶-水蛭素融合蛋白的构建表达: 2015年; 背景:重组融合蛋白是根据凝血酶识别顺序将葡激酶与水蛭素串联而成的蛋白,具有双重功能,分子质量为23 ku,可在工程菌高密度发酵状态下获得高效表达。目的:通过对工程菌进行高密度发酵,构建重组葡激酶-水蛭素融合蛋白纯化工艺,并探讨其构建可行性及表达价值。方法:对工程菌进行高密度培养,并诱导表达重组葡激酶-水蛭素融合蛋白,对菌体进行离心收取,多次冻融后通过超滤、两部阴离子交换层析方法收集上清液,对重组葡激酶-水蛭素融合蛋白进行分离纯化,观察其纤溶比活性及在菌体中的高效表达价值。结果与结论:发酵培养工程菌,并在第17小时时予以诱导。结果发现,诱导0.5 h时,便能观察到重组葡激酶-水蛭素融合蛋白表达,且发酵时间越长重组葡激酶-水蛭素融合蛋白表达量相应越大;至发酵20 h时,表达达到顶峰。菌体干质量为32.20 g/L,目的蛋白表达量约为1.48 g/L。经过纯化处理后,重组葡激酶-水蛭素融合蛋白纯度高达98%,纤溶比活性约为2.6×104 IU/mg,回收活性的概率为56%。实验通过构建重组葡激酶-水蛭素融合蛋白纯化工艺,并分析其表达价值,提示该纯化工艺较为便捷,耗时较短,且能重复使用,可用于大规模生产。; 徐华董耘杨进刘少帮刘少华陈武; 关键词：融合蛋白

抗凝溶栓重组葡激酶-水蛭素融合蛋白的构建与表达被引量：1: 2015年; 目的:探讨抗凝溶栓重组葡激酶-水蛭素融合蛋白的构建效果与抗凝溶栓活性表达情况。方法:在间接实验中,选择p BV-重组葡激酶-水蛭素融合蛋白质质粒进行酵母大量表达,再进行两级纯化分析;去纯化的单位进行抗凝溶栓的检测。结果:工程菌酵母发酵培养诱导1 h后就可以检测到重组葡激酶-水蛭素融合蛋白表达,表达量随发酵时间的增加而递增。两级纯化的重复性非常好,纯度经RP-HPLC测定在98%以上。重组葡激酶-水蛭素融合蛋白的溶栓活性明显高于水蛭素与葡激酶的单纯溶栓活性(P<0.05)。重组葡激酶-水蛭素融合蛋白具有更强的纤溶酶原激活活性,明显高于水蛭素与葡激酶的单纯纤溶酶原激活活性(P<0.05)。结论:重组葡激酶-水蛭素融合蛋白生产工艺具有很好的诱导与纯化效果,重组葡激酶-水蛭素融合蛋白能发挥较好的抗凝与溶栓作用。; 徐华徐昕杨进国杨剑曾文强刘少帮刘少华陈武; 关键词：抗凝溶栓

RGD-重组葡激酶-人α微球蛋白融合蛋白及其制备与应用: 本发明提供了一种RGD-重组葡激酶-人α微球蛋白融合蛋白及其制备与应用。本发明所述RGD-重组葡激酶-人α微球蛋白融合蛋白的氨基酸序列如SEQID NO.12所示。本发明的融合蛋白通过以下制备方法获得：采用重叠延伸PCR...; 周建中汪德强苟冶然龙小滨陈检杨可白垒雷寒黄爱龙何泉张宏鹏; 文献传递

RGD-重组葡激酶-人α微球蛋白融合蛋白原核表达、纯化及鉴定被引量：3: 2015年; 目的构建RGD-重组葡激酶-人α微球蛋白融合蛋白的原核表达质粒,在大肠杆菌中表达融合蛋白,纯化并初步鉴定其生物学活性。方法利用重叠延伸PCR获得目的融合基因片段RGD-r SAK-α1M,插入带有His-GST标签的原核高效可溶性表达载体PEGX-6P-1中。经酶切鉴定后,将重组表达质粒转化大肠杆菌BL21菌株,IPTG诱导目的蛋白表达,经Ni+亲和层析柱纯化后用3C蛋白酶切除重组蛋白的His-GST标签,再利用DEAE离子交换柱和分子筛纯化蛋白。最后应用纤维蛋白平板溶圈法和血小板聚集抑制试验分别测定评价重组融合蛋白的溶栓活性和抗血小板聚集作用。结果 1)成功构建了RGD-重组葡激酶-人α微球蛋白融合蛋白。2)实现了目的融合蛋白在大肠杆菌上清液中的高效表达,并纯化了融合蛋白。3)体外实验表明纯化后的融合蛋白纤溶活性同尿激酶标准品无明显差异。4)融合蛋白抗血小板聚集作用较单纯重组葡激酶明显提高。结论经文献检索确认为首次获得了纯化的RGD-重组葡激酶-人α微球蛋白融合蛋白,并验证了其纤溶活性和尿激酶标准品无明显差异,而抗血小板聚集作用较单纯重组葡激酶增强,为下一步进行融合蛋白免疫原性鉴定奠定了基础。; 苟冶然龙小滨白磊何泉陈检张绍城汪德强周建中; 关键词：重组葡激酶 RGD 融合蛋白抗血小板聚集

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