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搜索到159篇“ 重组山羊痘病毒“的相关文章

135位点表达ORFVF1L基因的重组山羊痘病毒的构建被引量：1: 2023年; 【目的】采用Cre/Loxp基因编辑系统,在羊痘病毒135基因位点插入ORFV外源基因F1L,同时引入标记基因,从而构建重组山羊痘病毒,为临床上预防羊口疮疫苗的设计、研制提供参考。【方法】以pDonor载体为基础,135基因编码区两侧500 bp左右的片段作为上下重组同源臂,中间插入羊口疮病毒F1L基因编码区及标记基因gpt、EGFP、痘病毒早晚期启动子p7.5、p11,并且含有loxp位点,构建同源重组供体质粒命名为pGTPV(135)-ORFV-F1L;并对阳性克隆菌液进行PCR鉴定并测序,经测序正确的菌液接种氨苄LB液体培养基培养过夜,提取去内毒素的质粒并进行双酶切鉴定。山羊痘病毒弱毒株感染永生化山羊睾丸细胞2 h后,重组质粒经脂质体法转染永生化山羊睾丸细胞,观察细胞病变及EGFP标记基因的表达情况;48 h后收获病毒液,反复冻融后离心,盲传3代,通过PCR鉴定目标基因的整合情况,以羊口疮病毒阳性血清为一抗,驴抗山羊IgG为二抗,通过蛋白免疫印迹分析目标基因的表达情况来对获得的重组病毒进行鉴定。【结果】经PCR筛选,成功获得表达羊口疮病毒F1L基因的同源重组供体质粒。经过测序并与目标序列进行比对,结果正确,表明重组质粒成功构建。重组质粒经去内毒素提取后测定浓度并进行双酶切鉴定,结果与预期相符,经鉴定的重组质粒转染山羊睾丸细胞,在48 h后观察到细胞病变及绿色荧光,PCR鉴定结果表明F1L基因整合到重组病毒上。蛋白免疫印迹分析显示,检测到目标蛋白条带,说明重组山羊痘病毒插入的外源基因F1L基因成功表达。【结论】本研究成功构建了一种在135基因位点表达羊口疮病毒F1L基因的重组山羊痘病毒,并在永生化山羊睾丸细胞中,该重组病毒展现出目的基因的稳定表达。以羊痘病毒弱毒株135基因位点插入羊口疮病毒F1L外源基因,该重组病毒在永生化山羊睾丸细胞中获得,目的�; 余远迪牟豪张阳郑华李幸付利芝; 关键词：羊痘病毒羊口疮病毒重组病毒

一种共表达小反刍兽疫病毒H和F蛋白的重组山羊痘病毒: 本发明提供一种用于重组山羊痘病毒构建的重组转移载体。所述的转移载体主要包含：TK基因的左臂和右臂、两个逆向的p7.5K启动子及其分别调控的小反刍兽疫病毒H基因和F基因、p11K启动子、增强型绿色荧光蛋白(eGFP)基因、...; 刘拂晓李岭邹艳丽

一种共表达羊口疮病毒B2L和F1L蛋白的重组山羊痘病毒: 本发明提供一种用于重组山羊痘病毒构建的重组转移载体。所述的转移载体主要包含：TK基因的左臂和右臂、两个逆向的p7.5K启动子及其分别调控的羊口疮病毒B2L基因和F1L基因、p11K启动子、增强型绿色荧光蛋白(eGFP)基...; 刘拂晓邹艳丽李岭

表达大熊猫犬瘟热病毒H、F基因重组山羊痘病毒的疫苗、其制备方法及免疫应用方法: 本发明公开了一种表达大熊猫犬瘟热病毒H和F基因重组山羊痘病毒的疫苗，疫苗中含有以山羊痘病毒为载体，分别转染表达大熊猫犬瘟热病毒H或F基因的重组转移载体质粒pTK‑H‑Eg或pTK‑F‑Eg而获得的重组山羊痘病毒vpTK‑...; 陈武程松罗满林郑敏黄勉吴其锐彭仕明单芬李婉萍张晓明植广林张马龙陈绚姣党楠楠梁玉珍左珂菁李少基

大熊猫犬瘟热病毒H基因重组山羊痘病毒的构建和鉴定被引量：3: 2018年; 本研究参照GenBank上已公布的大熊猫犬瘟热病毒（CDV）H编码的基因序列,对其抗原保守结构和识别区域进行修饰,将CDV保护性抗原H基因克隆到pMDTK-pEL载体中,然后运用酶切、连接将表达盒PELH构建到pTK-Eg载体中,从而获得重组转移载体质粒pTK-H-Eg。将重组转移载体质粒pTK-H-Eg与GTPV AV41株共转染BHK细胞,使其在细胞内发生同源重组,获得重组CDV的H基因的山羊痘病毒,然后在Vero细胞上加压筛选,利用gpt培养基筛选到稳定表达EGFP的重组病毒。通过PCR、免疫荧光以及Western Blot鉴定,证明CDV H基因成功构建到GTPV基因组中,并且在细胞中获得了正确表达。本研究获得了表达CDV H基因重组山羊痘病毒,并命名为vpTK-H-Eg。; 程松王和兴郑敏罗满林单芬李婉萍陈武; 关键词：同源重组重组山羊痘病毒

大熊猫犬瘟热病毒H、F基因重组山羊痘病毒的构建和鉴定: 犬瘟热(Canine Distemper，CD)是由犬瘟热病毒(Canine Distemper Virus，CDV)引起的一种急性、高度接触性传染病。CDV的感染呈世界性分布，并且可以在不同的物种间进行传播，除感染犬科...; 程松; 关键词：大熊猫犬瘟热病毒血凝素蛋白山羊痘病毒

表达大熊猫犬瘟热病毒H、F基因重组山羊痘病毒的疫苗、其制备方法及免疫应用方法: 本发明公开了一种表达大熊猫犬瘟热病毒H或F基因重组山羊痘病毒的疫苗，疫苗中含有以山羊痘病毒为载体，分别转染表达大熊猫犬瘟热病毒H或F基因的重组转移载体质粒pTKHEg或pTKFEg而获得的重组山羊痘病毒vpTKHEg或v...; 陈武程松罗满林郑敏黄勉吴其锐彭仕明单芬李婉萍张晓明植广林张马龙陈绚姣党楠楠梁玉珍左珂菁李少基

一种表达口蹄疫病毒空衣壳的重组山羊痘病毒的构建方法: 本发明涉及一种表达口蹄疫病毒空衣壳的重组山羊痘病毒的构建方法，该方法以上、下游同源臂为基础构建转移质粒，中间依次插入口蹄疫病毒结构蛋白前体基因P1-2A、痘苗病毒背对背启动子P7.5-P11、黄嘌呤-鸟嘌呤磷酸核糖转移酶...; 马文戈魏婕杨会国魏玉荣苗书魁王延夏俊易忠薛英黄炯王力俭

表达ORFV F1L基因的重组山羊痘病毒的构建及初步鉴定被引量：3: 2014年; 目的:研制安全有效的预防羊口疮的重组山羊痘病毒活载体疫苗。方法:采用PCR技术扩增ORFV的F1L基因,将其与载体pUC-TK12连接,同时酶切插入LacZ报告基因和Pb56双向启动子,构建重组转移载体pUC-TK12-LacZ-F1L,将其转染至已感染山羊痘病毒疫苗株的BHK-21细胞,进行同源重组。通过蓝白斑筛选,收获重组病毒并进行PCR初步鉴定。结果:获得了全长为1 023bp的F1L基因,测序结果与GenBank公布的标准序列同源性为99.9%。构建了重组转移载体pTL-F1L,转染BHK-21细胞后,获得了重组山羊痘病毒蓝色蚀斑。结论:该研究成功获得了含有羊传染性脓疱病毒F1L基因的重组山羊痘病毒疫苗候选株rGPV-F1L,为羊传染性脓疱病基因工程活载体疫苗的研制奠定基础。; 张倩王震倪伟付强李瑞芳张辉陈创夫; 关键词：山羊痘病毒

羊传染性脓疱病毒B2L基因重组山羊痘病毒的构建及初步评价: 羊传染性脓疱病是由羊传染性脓疱病毒引起的绵羊、山羊等反刍动物以及人类的一种急性、高度嗜上皮性、接触性传染病。该病在世界养羊业发达的国家和地区广泛流行，危害较大，造成严重的经济损失，目前尚无有效的治疗药物；接种疫苗被认为是...; 张倩; 关键词：羊传染性脓疱病毒 B2L基因重组山羊痘病毒生物学特性

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