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非酶消化法获取树鼩大脑星形胶质细胞的分离培养方法: 本发明涉及一种非酶消化法获取树鼩大脑星形胶质细胞的分离培养方法，属于细胞分离培养技术领域。本发明以gentleMACS全自动组织处理器解离脑组织，消化传代时用TrypLE Express替代常用的胰酶来消化树鼩大脑星形胶...; 代解杰施梅言王文广罕园园阮蕾颖陆彩霞李娜孙晓梅仝品芬

小鼠肠道固有层单细胞悬液制备的酶消化法比较研究: 2024年; 目的探究小鼠小肠固有层单细胞悬液制备的最佳酶消化法。方法采集10根长度一致的小鼠小肠,随机分为两组,每组分别采用以胶原酶A或胶原酶VIII为主的酶消化法制备固有层单细胞悬液,比较这两种酶消化法对单细胞悬液细胞获得率、细胞活性和细胞表面抗原的影响,然后对较优酶消化法制备的单细胞悬液进行流式检测。结果与以胶原酶VIII为主的酶消化法相比,以胶原酶A为主的酶消化法可以获得更高的细胞产量(9.48±1.10)×10^(9) vs(4.18±1.02)×10^(9)、活细胞比例(86.36±3.32)%vs(61.62±10.93)%以及活性CD45^(+)细胞比例(57.19±5.11)%vs(26.01±11.44)%、活性CD3^(+)细胞比例(8.73±2.89)%vs(4.52±2.49)%、活性CD4^(+)细胞比例(6.19±2.09)%vs(3.22±1.91)%和活性B220^(+)细胞比例(15.06±4.27)%vs(5.07±2.20)%,为后续流式检测提供了高质量细胞。结论以胶原酶A为主的酶消化法更适合于小鼠小肠固有层单细胞悬液的制备。; 曾勤梁莹王新慧闫蕾王湘鹏杨嘉仪余仁欢; 关键词：单细胞悬液酶消化法流式细胞术

不同酶消化法提取猪原代肝细胞的效果比较: 2024年; 猪肝细胞是猪圆环病毒的靶细胞,简单快速地提取猪原代肝细胞对于研究猪圆环病毒病的致病机制具有重要意义。该文采用离体酶消化法,比较胰蛋白酶、Ⅱ型胶原酶、Ⅳ型胶原酶、Ⅱ型和Ⅳ型胶原酶混合物提取猪原代肝细胞的效果。结果显示,这4种酶消化法均能获得有功能的肝细胞,其中胶原酶混合物分离的肝细胞数量最多,胰蛋白酶法分离的肝细胞数量较少,Ⅱ型、Ⅳ型胶原酶消化法分离的肝细胞排列整齐、边界清晰。; 周徐倩董磊; 关键词：原代肝细胞圆环病毒圆环病毒病

酶消化法结合人工智能技术在法医学溺死硅藻检验中的应用被引量：1: 2023年; 【目的】人工智能(AI)全涂片自动化硅藻检验技术能比人类专家更快速、高效进行法医病理学溺死硅藻检验。然而,该技术仅与硅藻提取率较低的硝酸消化法联用过,本研究拟采用更加高效的蛋白酶K组织消解法(以下简称酶消化法)作为硅藻提取方法,探究该技术在其他硅藻提取方法中的泛化能力及可行性。【方法】收集6例溺死尸体的肺组织进行蛋白酶K消解并制成涂片,利用数字化图像矩阵切割方法将涂片进行数字化处理并据此建立硅藻-背景数据库,将数据集按照3:1:1的比例分为训练集、验证集和测试集,在ImageNet预训练基础上对卷积神经网络(CNN)模型进行训练和内部验证及外部测试。【结果】结果显示最佳模型外部测试的准确率达97.65%,且模型特征提取区域即为硅藻所在区域。实际应用中最佳的CNN模型对溺水尸体的硅藻检测精准率高达80%以上。【结论】研究表明,基于CNN模型的AI自动化硅藻检验技术和酶消化法联用能高效识别硅藻,可以作为溺水鉴定中硅藻检测的辅助方法。; 于慧潇朱永正赵天琦程奇李周儒殷文江陈敏蔡红星; 关键词：法医病理学硅藻溺死

比较羊水细胞原位培养法和胰酶消化法在产前诊断染色体检查中的应用价值被引量：1: 2023年; 目的比较载玻片-原位培养法(以下简称原位法)和胰酶消化法在羊水细胞染色体检查中的应用价值。方法选取2020年7—12月来该院进行产前诊断的1105例孕妇的羊水标本,分别采用原位法和胰酶消化法进行培养、收获及制片,成功制片后用GSL-120扫描、捕获核型,对两种方法的羊水细胞培养成功率、培养时间、分裂相、核型结果等进行比较分析。结果1105例羊水标本同时采用原位法、胰酶消化法两种方法进行培养,这两种方法的培养成功率的差异无统计学意义(χ^(2)=0.33,P>0.05)。原位法和胰酶消化法羊水需求量分别为5、10 mL,培养基用量分别为7、8 mL。与胰酶消化法相比,原位法羊水细胞培养时间短,分裂相及优质分裂相数目多,差异均有统计学意义(Z=-31.83,P<0.001;Z=-2.937,P=0.003;Z=-2.943,P=0.003)。两种方法的羊水染色体核型分析均检出972例正常核型、128例异常核型,其中染色体数目异常真嵌合7例,染色体核型结果符合率为100%。结论与胰酶消化法相比,原位法具有培养时间短、培养基用量少、羊水需求量少、操作步骤简单、优质分裂相多,以及可以有效诊断真假嵌合等优点,但胰酶消化法相较于原位法具有制片可重复性相对较高且耗材相对经济的优势,结合原位法和胰酶消化法的优缺点,羊水细胞培养可以采用原位法为主、胰酶消化法为辅的培养模式,提高产前诊断的效率、准确率与成功率。; 候舒文陈薇严雅兰刘慧袁静; 关键词：羊水细胞染色体产前诊断

免过滤酶消化法在成纤维细胞提取中的应用被引量：1: 2022年; 目的探索一种操作简单且高效的成纤维细胞提取方法,并对免过滤酶消化法提取成纤维细胞的效果进行评价。方法将瘢痕疙瘩标本分别采用免过滤酶消化法、传统酶消化法、组织块贴壁法进行细胞提取。记录细胞长满瓶底80%所需时间,并检测3组细胞的增殖活性及胶原分泌情况。结果免过滤酶消化法提取细胞,在接种后2~3 d可观察到瓶底的组织碎屑周边有芽状细胞游出,向四周呈放射状生长;单独贴壁的细胞生长良好。该组细胞长满瓶底80%所需时间较传统酶消化法节约(3.25±0.89)d,较组织块贴壁法节约(9.50±1.64)d,差异有统计学意义(P<0.01)。3组成纤维细胞均未出现污染,并且3组细胞的24 h细胞增殖活性、增长率及羟脯氨酸产生量均无统计学差异(P>0.05)。结论免过滤酶消化法步骤少,操作简单,且不会增加污染概率或对细胞增殖活性及胶原分泌功能产生明显影响,是一种高效提取成纤维细胞的方法,值得推广。; 苏治国范金财刘立强焦虎; 关键词：瘢痕瘢痕疙瘩成纤维细胞酶消化法

机械-酶消化法制备大鼠膈肌单细胞悬液的最佳消化酶浓度组合筛选: 2022年; 目的使用不同浓度消化酶制备大鼠膈肌单细胞悬液,筛选最佳消化酶浓度组合。方法将胰蛋白酶稀释为0.125%、0.250%、0.375%、0.500%、0.625%,胶原酶Ⅰ型稀释为0.050%、0.100%、0.150%、0.200%、0.250%,胶原酶Ⅳ型稀释为0.050%、0.100%、0.150%、0.200%、0.250%,将三种消化酶按照浓度从低到高依次组合为五个浓度组,即胰蛋白酶0.125%+胶原酶Ⅰ0.050%+胶原酶Ⅳ0.050%、胰蛋白酶0.250%+胶原酶Ⅰ0.100%+胶原酶Ⅳ0.100%、胰蛋白酶0.375%+胶原酶Ⅰ0.150%+胶原酶Ⅳ0.150%、胰蛋白酶0.500%+胶原酶Ⅰ0.200%+胶原酶Ⅳ0.200%、胰蛋白酶0.625%+胶原酶Ⅰ0.250%+胶原酶Ⅳ0.250%。取SD大鼠新鲜膈肌组织,分成A、B、C、D、E组,采用机械—酶消化法制备膈肌单细胞悬液,分别加入上述五种浓度组合的消化酶进行消化;另设对照组,加入等量PBS。单细胞悬液经台盼蓝染色,观察悬液中细胞的形态,计数活细胞数、死细胞数、细胞团块数,计算细胞存活率和单细胞悬液浓度;经Anti-RatCD11b PE标记后进行流式细胞术检测,获得目标细胞比值,比较各组检测结果。结果A~E组获得的活细胞数分别为156.00×10^(5)、200.92×10^(5)、182.08×10^(5)、160.00×10^(5)、140.02×10^(5)/mL,细胞存活率分别为87.01%、90.02%、91.86%、90.75%、86.94%,单细胞悬液浓度分别为19.50×10^(5)、30.25×10^(5)、22.75×10^(5)、20.00×10^(5)、17.50×10^(5)/mL,均高于对照组(P均<0.05),其中B、C组活细胞数量和单细胞悬液浓度高于其他三组(P均<0.05)。经CD11b标记后,C组D11b阳性的中性粒细胞数、CD11b阳性细胞占活细胞的百分比均高于其他各组(P均<0.05)。结论采用机械—酶消化法制备大鼠膈肌单细胞悬液,不同消化酶浓度组合均能获得优质的单细胞悬液,其中以胰蛋白酶0.375%+胶原酶Ⅰ0.150%+胶原酶Ⅳ0.150%获得的单细胞悬液细胞存活率最高、死细胞数最少。; 何杰王宁张杉杉刘青铃周舟陈谡吴学东; 关键词：膈肌单细胞悬液消化酶流式细胞术动物实验

悬浮法及酶消化法分离培养脂肪干细胞被引量：1: 2021年; 目的:了解脂肪干细胞(Adipose-derived stem cells,ADSCs)的获取及原代培养方法,明确体外定向分化条件,为进一步ADSCs移植实验提供基础。方法:取6周龄雄性大鼠,脱颈处死,在无菌条件下取大鼠腹股沟处脂肪组织,放入装有PBS的培养皿中,剔除肉眼可见的血管及筋膜,分别用酶消化法及悬浮组织块法培养、传代及鉴定,并比对两种方案的优缺势。结果:悬浮法和酶消化法培养得到的大鼠ADSCs形态均为梭形纤维样,生长迅速,生长曲线为典型的“S”形,两种方法获得的ADSCs经成骨诱导培养3周后茜素红染色均为阳性,成脂诱导培养3周后,油红染色也均为阳性。结论:大鼠提取的脂肪组织经两种培养方法均可定向诱导分化为ADSCs,并可稳定增殖传代,但悬浮法较酶消化法更便利,价格更低廉。; 赵雅丽李瑞方熊丽娇曾治平; 关键词：脂肪干细胞酶消化法

组织块法与酶消化法培养人脐带间充质干细胞的比较被引量：3: 2021年; 目的比较组织块法与酶消化法对分离培养人脐带间充质干细胞(hUC-MSCs)的影响。方法选取5根足月妊娠自然分娩的健康婴儿的废弃脐带,采用组织块法和酶消化法进行原代分离培养,比较两种培养方法的细胞增殖情况,并测定其细胞表面免疫标志物。结果hUC-MSCs的融合状况:组织块法培养的第5天,细胞从组织块内爬出,培养2周左右细胞融合率可达80%以上;酶消化法培养5 d后,可见少量形态不规则的细胞贴壁,培养2周后细胞融合可达40%~50%。hUC-MSCs的增殖情况:组织块法原代及传代后的hUC-MSCs的增殖速度远高于酶消化法,差异有统计学意义(P<0.05)。hUC-MSCs的标志物:组织块法分离培养的P3细胞CD34、CD45、HLA-DR表达<1%,CD44、CD73、CD90和CD105表达>95%;酶消化法分离培养的P3细胞表面CD34、CD45、HLA-DR、CD105表达<1%,CD73、CD90表达>95%。结论组织块法与酶消化法相比,能获得较纯的hUC-MSCs,且方法简单、成本低,是获得hUC-MSCs的理想方法。; 袁涛刘文杰王蕾王树玉刘英; 关键词：人脐带间充质干细胞酶消化法组织块法生物学特性

非酶消化法获取树鼩大脑星形胶质细胞的分离培养方法: 本发明涉及一种非酶消化法获取树鼩大脑星形胶质细胞的分离培养方法，属于细胞分离培养技术领域。本发明以gentleMACS全自动组织处理器解离脑组织，消化传代时用TrypLE Express替代常用的胰酶来消化树鼩大脑星形胶...; 代解杰施梅言王文广罕园园阮蕾颖陆彩霞李娜孙晓梅仝品芬; 文献传递

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