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一种提高大肠杆菌裂解过程中质粒稳定性的方法: 本发明提供了一种提高大肠杆菌裂解过程中质粒稳定性的方法。具体步骤如下：1）菌体重悬，所述重悬液含二糖类化学物质；2）碱裂解；3）中和；4）澄清；5）浓缩换液；6）分子筛层析；7）制剂换液。本发明的工艺简便，通过在菌体重悬...; 胡海兵韦厚良潘讴东由庆睿贾国栋

一种提高大肠杆菌裂解过程中质粒稳定性的方法: 本发明提供了一种提高大肠杆菌裂解过程中质粒稳定性的方法。具体步骤如下：1）菌体重悬，所述重悬液含二糖类化学物质；2）碱裂解；3）中和；4）澄清；5）浓缩换液；6）分子筛层析；7）制剂换液。本发明的工艺简便，通过在菌体重悬...; 胡海兵韦厚良潘讴东由庆睿贾国栋

发酵条件对天冬氨酸转氨酶重组菌高效表达与质粒稳定性的影响: 2022年; 通过对以pET-22b质粒为载体,大肠杆菌BL21为宿主构建的产天冬氨酸转氨酶的重组菌BL21/pET-aspC,质粒稳定性与重组菌产酶活性的发酵条件优化,对比了不同发酵条件对基因工程菌菌体生长、质粒稳定性和转氨酶酶活性的影响,得到较工程菌常用LB培养基更利于工程菌生长的培养基CSN。考察了该培养基主要成份玉米浆、酵母粉和柠檬酸钠对重组菌生长及质粒稳定性的影响。优化后,该发酵体系的发酵成本为LB培养基的10%,外源基因的质粒稳定性得到明显改善,重组菌生物量与天冬氨酸转氨酶活性显著提高。优化后培养体系成本低廉,发酵稳定,适于基因工程菌的大规模工业化生产发酵使用。; 宫长斌何冰芳曾杨张霞谢宁昌; 关键词：质粒稳定性天冬氨酸转氨酶

适应性进化和改造质粒稳定性促进枯草芽孢杆菌合成N-乙酰神经氨酸被引量：4: 2021年; N-乙酰神经氨酸(N-acetylneuraminic acid,NeuAc)作为营养化学品和药物中间体在保健品和医药领域具有广泛的应用。为了提升重组枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)合成NeuAc的产量,首先利用NeuAc生物传感器(NeuAc-Biosensor)调控抗生素抗性基因表达,在抗生素存在条件下将细胞生长与NeuAc合成相关联。进而通过增加抗生素浓度进行适应性进化,促进NeuAc合成效率提升。研究结果显示,当利用NeuAc-Biosensor分别调控壮观霉素抗性基因(spc)和红霉素抗性基因(erm)时,高产菌株能够在较高抗生素浓度条件下生长。通过在培养过程中逐步增加抗生素浓度开展适应性进化,结果表明采用壮观霉素和红霉素进行双抗性适应性进化时,进化获得的菌株中假阳性率(产量未提高的菌株比例)为46.7%,显著低于采用壮观霉素或红霉素单一抗生素进化获得的菌株中假阳性率(73.3%和66.7%)。通过适应性进化与发酵验证得到1株NeuAc产量为(3.16±0.19)g/L的菌株,产量比出发菌株提高了31.7%。为进一步解决发酵过程中重组B.subtilis质粒丢失的问题,通过将必需基因folB(编码二氢喋呤醛缩酶,dihydroneopterin aldolase)插入携带NeuAc合成途径关键酶编码基因重组质粒并且敲除基因组中的folB基因,质粒的丢失率由34.1%下降至11.8%。该研究提升了重组B.subtilis合成NeuAc的产量和稳定性,为重组B.subtilis发酵法生产NeuAc奠定了基础。; 钱蕾刘延峰李江华刘龙堵国成; 关键词：生物传感器适应性进化质粒稳定性 N-乙酰神经氨酸枯草芽孢杆菌

质粒稳定性的研究进展及其在代谢工程领域的应用: 质粒是基因重组技术中最常用载体之一，然而在微生物工业生产过程中，常常出现重组质粒不稳定发生突变或者丢失的现象，极大地影响了质粒上目的基因表达产物的产量，是一个亟待解决的既有理论意义又有实际应用价值的重要问题。质粒不稳定性...; 郭丽微霍毅欣; 关键词：质粒稳定性基因重组代谢工程

产普鲁兰酶重组大肠杆菌质粒稳定性的研究被引量：6: 2015年; 通过对产普鲁兰酶的重组大肠杆菌E.coli BL21(DE3)/p ET28a-s-pul菌株在发酵过程中质粒稳定性和普鲁兰酶生成量的考察,发现不同宿主对质粒稳定性及酶活性有重要影响。本文利用E.coli BL21(DE3)p Lys S菌株为宿主,构建重组菌E.coli BL21(DE3)p Lys S/p ET28a-s-pul,通过控制外源蛋白的本底表达,提高了重组菌株的质粒稳定性。优化发酵培养基和发酵条件以后,重组菌产普鲁兰酶能力由480 U/m L提高至627 U/m L,增幅为30.6%。研究结果认为,严格控制外源蛋白的本底表达,是改善重组菌稳定性的重要方法之一。; 翟成一徐岩聂尧穆晓清; 关键词：普鲁兰酶大肠杆菌质粒稳定性发酵优化

产丙酮酸氧化酶重组大肠杆菌的发酵过程质粒稳定性研究被引量：3: 2015年; 研究了碳源、温度、溶氧、pH值及外源丙酮酸氧化酶表达对重组大肠杆菌DH5α/pSML-PyOD质粒稳定性的影响.结果表明,以甘油为碳源,37℃,装液量10%~15%条件下重组菌质粒稳定性最好.当发酵过程中体系pH值在6~7之间时,质粒稳定性较高,但当pH提高至7.5时,质粒稳定性会有所下降,重组菌在低pH值条件下有利于产丙酮酸氧化酶.外源蛋白表达使得重组菌质粒稳定性有所下降.; 赵劼王永红储炬张嗣良庄英萍; 关键词：丙酮酸氧化酶重组大肠杆菌质粒稳定性

一种化学诱变酿酒酵母基因工程菌提高重组质粒稳定性的方法: 本发明公开了一种化学诱变酿酒酵母基因工程菌提高重组质粒稳定性的方法，包括如下步骤：1）化学诱变；2）筛选；3）PCR检测质粒稳定性；4）诱导表达与活性检测。本发明通过化学诱变剂硫酸二乙酯诱变酿酒酵母基因工程菌株，用含有五...; 查向东马利娟赵大伟余忠丽车媛媛徐雪娇

重组干酪乳杆菌贮存期内质粒稳定性及活菌数的检测被引量：1: 2013年; 目的检测产肠毒素性大肠杆菌(Enterotoxigenic E.coli,ETEC)基因重组干酪乳杆菌(Lactobacillus casei,L.casei)贮存过程中质粒的稳定性及活菌数的变化。方法将ETEC K88重组干酪乳杆菌(pLA-K88/L.casei)接种于MRS培养基,转种WPC培养基,收集菌液,置4、15、37℃贮存。通过抗生素MRS(+)和MRS(-)平板计数菌落数的方法及PCR法检测重组质粒在4℃贮存1、15、30、60、90和120 d的稳定性;Dot ELISA法检测菌液外源蛋白免疫学活性的变化;平板计数法检测4、15、37℃贮存1、2、3、7、15、30、60、90、120、210和240 d的活菌数。结果在4℃贮存120 d内,重组质粒稳定性良好,目的基因片段无缺失,外源蛋白活性稳定,乳清蛋白对工程菌的稳定性及外源蛋白的免疫原性均无影响;工程菌在4℃贮存效果最好,存活时间最长,第240 d活菌数仍保持在9×106cfu/ml以上,15和37℃贮存期仅为90和15 d。结论 ETEC基因重组干酪乳杆菌于4℃贮存条件下,质粒及外源基因表达稳定。; 曹宁侯喜林谭君刘彩霞武龙宇余丽芸; 关键词：干酪乳杆菌质粒稳定性活菌数

L-色氨酸生产菌质粒稳定性工艺研究被引量：2: 2011年; 从工程应用的角度研究L-色氨酸生产菌E.coliTRJH的质粒稳定性,采用30L自动控制发酵罐观察选择压力、温度、溶氧、酵母抽提物和葡萄糖浓度等条件对质粒稳定性的影响。结果表明,该菌具有分裂不稳定性,上述培养条件的变化均会对该菌的质粒稳定性产生较大影响。; 黄静程立坤刘倩徐庆阳谢希贤陈宁; 关键词：L-色氨酸发酵质粒稳定性

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