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副干酪乳酪杆菌ZY-1内源性质粒分析及其表达系统的构建与应用被引量：2: 2023年; 高效稳定的乳杆菌表达载体的构建是实现其菌种改良和个性化菌株开发的关键。本研究从副干酪乳酪杆菌(Lacticaseibacillus paracasei) ZY-1中分离出4个内源性质粒并进行功能分析。通过将pLPZ3与pLPZ4的复制子rep,与pNZ5319质粒的氯霉素乙酰转移酶报告基因cat、pUC19的复制子ori构建大肠杆菌-乳酸菌穿梭载体pLPZ3N与pLPZ4N,进一步加上启动子Pldh3和mCherry红色荧光蛋白,获得表达载体pLPZ3E与pLPZ4E。pLPZ3与pLPZ4质粒大小分别为6 289 bp和5 087 bp,GC含量分别为40.94%和39.51%。2个穿梭载体可成功转化至乳酪杆菌属中,pLPZ4N的转化效率(5.23×10^(2)-8.93×10^(2)CFU/μg)略高于pLPZ3N。乳酸菌表达载体pLPZ3E与pLPZ4E转化至副干酪乳酪杆菌S-NB后,成功获得了mCherry红色荧光蛋白的表达。以P_(ldh3)为启动子构建的重组表达载体pLPZ4E-lacG转化得到的重组菌,其β-半乳糖苷酶酶活性高于野生型菌株。本研究成功构建了大肠杆菌-乳酪杆菌穿梭载体和表达载体,为乳酪杆菌基因工程菌株的研发提供了新的工具。; 肖路遥石婷婷王苏滢赵庆尧李伟; 关键词：穿梭载体

一株同时携带bla_(CTX-M-14)和bla_(CTX-M-15)基因的多重耐药宋内志贺菌耐药基因及质粒分析: 2023年; 目的对1株同时耐头孢菌素和阿奇霉素的多重耐药宋内志贺菌进行全基因组测序分析,明确其携带的耐药基因和质粒特征。方法通过对2011年上海市的60株宋内志贺菌进行抗菌药物敏感性分析,筛选出1株同时耐头孢菌素和阿奇霉素的菌株Sh11sh529,使用二代和纳米孔测序技术获得其基因组序列,分析基因组的耐药基因、质粒、可移动遗传元件等。结果Sh11sh529基因组中检测到了11个耐药基因以及gyrA基因喹诺酮耐药决定区(QRDR)的突变位点gyrA-S83L,耐药基因包括2种CTX-M型超广谱β内酰胺酶(ESBL)基因bla_(CTX-M-14)和bla_(CTX-M-15),其中bla_(CTX-M-14)、mphA、aac(3)-IId、dfrA17、aadA5、sul1和qacEdelta基因由1个IncB/O/K/Z型质粒pSh11sh529-2携带,bla_(CTX-M-14)上游有1个ISEcp1插入子,mphA上游有1个IS26插入子。而bla_(CTX-M-15)由IncFII型质粒pSh11sh529-3携带,在其上游有1个ISEcp1插入子。该菌株表现出多重耐药性,对头孢菌素类、大环内酯类、氨基糖苷类、磺胺类、青霉素类等5类抗菌药物中的9种耐药。结论应当加强对多重耐药菌株以及同时携带多个类型ESBL菌株的监测和研究,以制定策略减少其流行和传播。; 刘康康李春晓; 关键词：宋内志贺菌

弯曲菌中氟苯尼考耐药基因fexA功能鉴定及其携带质粒分析: 2023年; 为确证氟苯尼考耐药基因fexA在弯曲菌中的功能并分析fexA基因遗传环境,本试验采用药物敏感性试验、聚合酶链式反应(PCR)、fexA单基因克隆、电转化、全基因组测序和分析方法对fexA基因功能进行鉴定,并基于全基因组序列对fexA基因环境进行分析。结果显示:氟苯尼考对构建的单基因克隆11168-fexA菌株最小抑菌浓度(MIC)值为32μg/mL,比受体菌株NCTC 11168对氟苯尼考的MIC值提高了32倍;fexA基因定位于长度为13793 bp的新型质粒(pC19-fexA),该质粒不能通过电转化转移至受体菌。综上所述,fexA基因可介导弯曲菌对氟苯尼考的高水平耐药表型;携带fexA基因的质粒虽然不能通过电转化发生水平传播,但其作为fexA基因的新型载体应得到关注。; 陈宇焦典赵文博张程姚红; 关键词：弯曲菌氟苯尼考耐药性

基于sacB负筛选标记的Targetron质粒分析系统构建: 2022年; 目的构建基于sacB负筛选标记的Targetron质粒分析系统。方法构建sacB毒蛋白诱导表达受体质粒pACYC-sacB(携带p15A复制子),分析sacB毒蛋白对大肠埃希菌的毒性。设计sacB基因打靶位点,构建脱水四环素诱导的Targetron供体质粒pSY11-sacB(携带colE1复制子和sacB405a打靶位点)。双质粒共转化大肠埃希菌BL21(DE3),脱水四环素诱导Targetron表达并对sacB基因进行打靶。涂布含有5%蔗糖和0.1 mmol/L IPTG的选择培养基,筛选sacB基因失活的阳性菌落,利用菌落PCR进一步验证Ⅱ型内含子在靶位点的插入情况。结果sacB基因表达的大肠埃希菌不能在含有5%蔗糖的平板中生长;双质粒共转化后,脱水四环素诱导Targetron表达能够插入到sacB405a靶位点;sacB基因失活后,大肠埃希菌能够在含有5%蔗糖的平板上生长,菌落PCR验证内含子插入到DNA靶位点。结论建立了基于sacB负筛选标记的Targetron质粒分析系统,为Ⅱ型内含子功能鉴定、迁移规律分析等奠定了基础。; 崔古贞花登雄鲍江舰张馨月洪伟吴道艳向松谷俊莹陈峥宏

禽源奇异变形杆菌质粒介导AmpC酶基因型检测与质粒分析被引量：6: 2021年; 【目的】研究禽源奇异变形杆菌携带ampC基因的分型和bla_(CMY-2)阳性接合质粒pC12的序列结构,为防控多重耐药禽源奇异变形杆菌的传播提供理论基础。【方法】利用头孢西丁三维试验和PCR方法对21株奇异变形杆菌进行AmpC酶的检测和基因分型研究;对bla_(CMY-2)阳性菌株进行脉冲场凝胶电泳(PFGE)分型和接合试验;利用高通量测序技术获得pC12的核苷酸序列并进行比较分析。【结果】头孢西丁三维试验表明21株禽源奇异变形杆菌中有6株产AmpC酶。6株产AmpC酶奇异变形杆菌对氨苄西林、头孢西丁、多西环素、氟苯尼考、粘菌素全部耐药,而对头孢他啶、阿米卡星全部敏感。耐药基因PCR扩增和测序结果表明,6株菌均携带bla_(CMY-2),检出率为28.6%。接合试验表明,1株奇异变形杆菌C12接合成功并获得接合子,其余5株接合不成功。PFGE分型结果表明,酶切图谱分为3个型别,bla_(CMY-2)在禽源变形杆菌中存在垂直和水平传播。测序结果表明菌株C12含有一个1b型IncC质粒,其全长161319 bp,GC含量为52.45%,预测有161个开放阅读框,提交NCBI并获得序列号MT320534。该质粒包含3个耐药区:第一个抗生素耐药区(antibiotic resistance islands,ARI-B)携带floR、tet(A)、strA、strB和sul2;第二个耐药区是一个典型的ISEcp1-bla_(CMY-2)-blc-sugE结构,其中的ISEcp1被一个插入的IS10R截断;第三个耐药区(ARI-A)是一个杂合的Tn1696tnp-pDUmer转座子,包含一个1类整合子基因盒(aac(6')-Ib-cr|arr3|dfrA27|aadA16)和汞抗性基因簇merEDBAPTR,其插入到质粒骨架产生两个重复序列TTGTA,该耐药区也是1型IncC耐药区变化最大的区域。【结论】6株产AmpC酶禽源奇异变形杆菌均携带bla_(CMY-2),其酶切图谱分为3个PFGE型别,其中一株菌携带了一个流行的bla_(CMY-2)阳性1型IncC可接合质粒。广宿主的IncC质粒是bla_(CMY-2)、tet(A)、floR等多个耐药基因及整合子的重要载体之一,该质粒�; 赵世玉焦嘉杰董宁宁潘圆月崔孟梅潘玉善; 关键词：奇异变形杆菌 AMPCΒ-内酰胺酶

鸭疫里默氏杆菌利福平耐药株RA--WH9基因组及其质粒分析: 鸭疫里默氏杆菌（Riemerella anatipestife，RA）是一种可引起鸭、鹅、鸡、火鸡等禽类急性或慢性败血症的黄杆菌科革兰氏阴性菌。该菌对水禽的感染在世界范围内均有报道，并由于其可造成家禽较高死亡率、低饲料转...; 刘玲俐; 关键词：鸭疫里默氏杆菌利福平质粒分析

水稻条斑病菌内源质粒分析: 2019年; 【目的】明确水稻条斑病菌(Xanthomonas oryzae pv. oryzicola,简称Xoc)内源质粒分布状况、类型及其含有的主要功能基因,为下一步开展该菌与质粒相关的毒力进化研究、抗逆机制分析及穿梭载体构建打下基础。【方法】采用数据库检索法和质粒分离鉴定法,调查水稻条斑病菌内源质粒的分布状况;以GenBank数据库中Xoc菌株基因组序列为研究对象,开展质粒信息检索,并对已发表的Xoc内源质粒序列进行系统进化分析;以Xoc中国菌株菌种库为研究对象,采用碱裂解法提取质粒,进行质粒酶切带型分析和主要功能基因鉴定。【结果】GenBank全基因组数据库中Xoc菌株内源质粒检出率为11.76%,系统进化分析结果表明这些质粒属于不同的进化分支。在257株Xoc中国菌株中,有29株菌株含有质粒,质粒检出率为11.28%,带有内源质粒的菌株均来自于华南稻区,且大部分来自广西。通过质粒酶切图谱比较,确认新发现的质粒属于9种新型Xoc内源质粒。按照已知Xoc内源质粒pXOCgx01上主要功能基因序列设计引物,PCR扩增结果表明新鉴定的Xoc质粒含有重金属抗性和DNA转移相关的基因,但在菌株间存在明显的多样性。【结论】部分Xoc菌株中含有一定数量的内源质粒,质粒类型和所含功能基因等具有一定的多样性,携带内源质粒的Xoc菌株有明显地域性。; 曾晨李康佳尹朝群牛祥娜赵嘉城朱平川姜伟何勇强; 关键词：水稻条斑病菌酶切图谱抗逆基因

两个携带optrA基因的信息素反应型多药耐药接合型质粒分析: [目的]optrA基因编码ABC-F家族的核糖体保护蛋白,可以产生对利奈唑胺和氟苯尼考的交叉耐药性,对医学和兽医临床感染治疗均可构成严重挑战。本研究对猪源肠球菌携带optrA的情况进行调查,并分析optrA基因质粒的遗传...; 商艳红李德喜单新新杨梦艳杜向党; 关键词：肠球菌耐药性

植物乳杆菌野生质粒分析及其提取方法的优化: 2018年; 乳酸菌质粒提取研究具有很长的历史。目前已有多个有效的乳酸菌质粒提取方法被报道,其中多数以乳酸球菌为研究对象,而植物乳杆菌质粒提取有效方法报道较少。该研究以植物乳杆菌为研究对象,通过对比分析并优化已报道的乳酸菌质粒提取方法,得到了高效且适于平台期植物乳杆菌野生质粒的提取方法。通过该方法进一步分析了植物乳杆菌野生质粒数和高拷贝质粒,为后续构建植物乳杆菌表达系统所需供体质粒和受体菌株提供了重要依据。; 萨初拉苏少锋吴青海其布日高娃王蕴华刘红葵呼和; 关键词：植物乳杆菌质粒

鸡源大肠杆菌mcr-1基因的检测、定位及全质粒分析: 近年来，抗生素的滥用致使细菌耐药问题日益严重，耐药菌株日渐增多。多重耐药革兰氏阴性细菌特别是大肠杆菌的耐药问题越来越严重，尤其出现了对碳青霉烯类药物耐药的细菌，导致了革兰氏阴性细菌感染找不到有效的药物可用。上世纪60年代...; 刘梦龙; 关键词：鸡源大肠杆菌多粘菌素

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