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成年小鼠触液神经元体外分离培养及自我更新能力的鉴定: 2025年; 背景:课题组前期成功在体外分离培养乳鼠触液神经元,尚无研究报道有效分离培养高纯度成年小鼠触液神经元的方法,且触液神经元的自我更新能力是否随着年龄发生变化尚无研究。目的:建立一种高纯度成年小鼠触液神经元体外分离培养的方法,并鉴定成年小鼠触液神经元与乳鼠触液神经元在体外的自我更新能力。方法:从成年3月龄小鼠颈髓分离含有触液神经元的原代细胞贴壁培养并利用融合多模态成像基因的慢病毒转染细胞,通过嘌呤霉素筛选得到高纯度成年小鼠触液神经元细胞,在完全培养基中悬浮培养。通过免疫荧光检测成年小鼠触液神经元表达神经干细胞标记物巢蛋白(Nestin)及SOX2情况,观察成年小鼠触液神经元体外成球与传代能力;将同等数量(5×10^(3))的第3代成年小鼠及乳鼠触液神经元在同等条件下分为2组,分别接种在含有完全培养基的超低黏附培养板中,在体积分数5%CO_(2),37℃恒温箱悬浮培养,通过体外成球、CCK8实验、qPCR和Western blot鉴定成年小鼠及乳鼠触液神经元的自我更新能力。结果与结论:①实验成功在成年小鼠体内分离出高纯度触液神经元,在体外表达Nestin及SOX2,能形成神经球并连续传代。②成年小鼠触液神经元体外自我更新能力较乳鼠相比明显减弱,细胞培养到第4天时乳鼠触液神经元已经形成直径约为150μm的神经球,而成年小鼠触液神经元所形成的神经球直径仅为40μm(P<0.0001)。③CCK8增殖实验结果表明,成年小鼠触液神经元的增殖活性在培养后各时间点显著弱于乳鼠(P<0.0001)。④qPCR和Western blot检测发现成年小鼠触液神经元Nestin及SOX2的mRNA(P<0.0001)和蛋白表达量(P<0.01)较乳鼠显著下降。⑤上述结果证实,成年小鼠触液神经元的体外自我更新能力显著弱于乳鼠。; 上官泽宇陈婵娟李琦哲谭伟颜海健王春庆豆晓伟李青; 关键词：内源性神经干细胞自我更新能力

GABABR1调控MAPK通路促进PKD2L1+触液神经元增殖的机制研究: 目的:本研究旨在深入理解GABABR1在脊髓损伤后促进PKD2L1+触液神经元增殖,进一步探索GABABR1通过调控MAPK通路促进PKD2L1+触液神经元增殖的研究,为脊髓损伤的治疗提供新的治疗方法。方法:本研究包含动...; 熊彦祥; 关键词：脊髓损伤触液神经元丝裂原活化蛋白激酶通路增殖

跑台训练激活Pkd2l1+触液神经元神经干细胞潜能促进脊髓损伤修复作用的研究: 目的:1.探索跑台训练对脊髓损伤（spinal cord injury,SCI）小鼠Pkd2l1+触液神经元（CSF-cNs）神经干细胞潜能的激活作用;2.验证跑台训练对SCI小鼠脊髓中央管周围Pkd2l1+CSF-cN...; 陈婵娟; 关键词：触液神经元跑台训练脊髓损伤神经干细胞

Pkd2l1激活成年小鼠触液神经元神经干细胞潜能作用的研究: 上官泽宇

多模态影像分子体外验证触液神经元的神经干细胞特性被引量：1: 2023年; 背景:最近研究发现位于脊髓中央管附近的接触脑脊液神经元(简称触液神经元)具有神经干细胞潜能,但触液神经元在体外研究中纯度不高,且目前尚无体外示踪技术证明其神经干细胞特性。目的:通过多模态影像分子筛选并在体外验证触液神经元的神经干细胞特性。方法:根据触液神经元特异性表达Pkd2l1基因,针对Pkd2l1基因上游启动子设计一种使触液神经元特异性表达绿色荧光蛋白(GFP)的多模态影像分子慢病毒(Lentivirus-Pkd2l1-GFP-puromycin-luciferase)。从出生24 h内C57BL/6小鼠延髓组织中提取出原代神经干细胞贴壁培养,用多模态影像分子病毒转染含有触液神经元的原代神经干细胞,通过嘌呤霉素筛选并纯化触液神经元。对筛选纯化的触液神经元进行体外悬浮培养并连续传代4代以上,免疫荧光检测第3代触液神经元与神经干细胞标记物Nestin、Sox2共表达情况。通过对第3代触液神经元诱导分化培养,免疫荧光检测触液神经元与神经元标记物NeuN、星形胶质细胞标记物S100β、少突胶质细胞标记物O4的共表达情况。结果与结论:成功构建出多模态影像分子慢病毒,并且筛选纯化后的触液神经元能够存活、增殖并表达绿色荧光蛋白。绿色荧光蛋白阳性触液神经元能在体外连续传代4代以上,并表达神经干细胞标记物Nestin、Sox2。诱导分化后,绿色荧光蛋白阳性触液神经元表达神经元标记物NeuN、星形胶质细胞标记物S100β、少突胶质细胞标记物O4。结果表明:多模态影像分子病毒能特异性标记触液神经元,触液神经元在体外具有自我更新、多向分化能力,通过多模态影像分子在体外成功验证触液神经元具有神经干细胞特性。; 罗张荣曹亮张毅皮文俊李青; 关键词：触液神经元神经干细胞慢病毒

Pkd2l1+触液神经元促进脊髓损伤修复的作用研究: 目的:脊髓损伤(Spinal Cord Injury,SCI)后神经元发生不可逆性死亡,导致患者出现感觉、运动和自主神经功能障碍。脊髓中的神经干细胞(Neural stem cells,NSCs)能够分化为新的神经元并促...; 张毅; 关键词：脊髓损伤触液神经元 NSCS 基因敲除

GABABR通过激活Pkd2l1+触液神经元神经干细胞特性促进脊髓损伤修复: 目的:探讨能否通过调控GABAB受体激活Pkd2l1+触液神经元神经干细胞特性来促进小鼠脊髓损伤修复。方法:本研究包含动物实验及细胞实验。动物实验部分,采用6-8周C57BL/6小鼠,对小鼠T10脊髓进行钳夹损伤,按损伤...; 严伟红; 关键词：脊髓损伤修复神经干细胞 GABAB受体

VEGFR3介导PI3K/Akt通路激活Pkd2l1+触液神经元神经干细胞潜能的机制研究: 目的:脊髓损伤（Spinal cord injury,SCI）造成大量神经元缺失难以修复,进而导致神经功能无法重建。神经干细胞可分化为神经元、星形胶质细胞和少突胶质细胞并修复脊髓损伤。我们前期体外研究表明Pkd2l1+触...; 曹亮; 关键词：触液神经元神经干细胞脊髓损伤 VEGFR3 EGFR

Pkd2l1+触液神经元在脊髓损伤小鼠体内移植的实验研究: 罗张荣

VEGFR3介导PI3K/Akt通路激活Pkd211+触液神经元神经干细胞潜能的机制研究: 曹亮

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