公共文化服务平台

搜索到1092篇“ 绿色荧光蛋白质类“的相关文章

血小板源性生长因子受体α调控小鼠锌指蛋白阳性间充质干细胞双向分化的研究: 2023年; 目的探讨血小板源性生长因子受体α(platelet derived growth factor receptor alpha,PDGFRα)对小鼠锌指蛋白阳性间充质干细胞(glioma-associated oncogene homolog 1-positive mesenchymal stem cells,Gli1^(+)-MSC)双向分化的调控作用。方法繁育双报告转基因小鼠ROSA^(mT/mG)/Gli1-Cre^(ERt2)/PDGFRαfl(实验组)和ROSA^(mT/mG)/Gli1-Cre^(ERt2)(对照组),选取两组4周龄小鼠各20只,从小鼠主动脉外膜中分离间充质干细胞,使用他莫昔芬诱导,通过绿色荧光蛋白标记和流式细胞仪分选,筛选两组Gli1^(+)-MSC,实验组Gli1^(+)-MSC中条件性敲除PDGFRα,对照组Gli1^(+)-MSC正常表达PDGFRα。对两组Gli1^(+)-MSC分别进行成脂肪诱导和成纤维诱导,蛋白质印迹法检测两组PDGFRα、脂肪细胞标志物[脂滴包被蛋白和CCAAT/增强子结合蛋白(CCAAT/enhancer binding protein alpha,C/EBPα)]和成纤维细胞标志物[α-平滑肌肌动蛋白(alpha smooth muscle actin,α-SMA)、成纤维细胞特异蛋白1(fibroblast-specific protein 1,FSP-1)]的蛋白表达,并进行半定量分析。油红O染色观察两组Gli1^(+)-MSC双向诱导后的细胞脂肪分化程度,并进行半定量分析。结果他莫昔芬诱导后,可通过绿色荧光蛋白的表达标记准确地从流式细胞仪中分离出Gli1^(+)-MSC。成脂肪诱导后,实验组PDGFRα蛋白表达(0.017±0.002)显著小于对照组(0.184±0.012)(t=25.48,P=0.002),脂滴包被蛋白(3.138±0.414)和C/EBPα(3.565±0.289)蛋白表达均显著大于对照组(分别为2.312±0.218、2.179±0.103)(t=6.21,P=0.025;t=6.69,P=0.022),即PDGFRα的敲除增强了Gli1^(+)-MSC的成脂肪分化能力。成纤维诱导后,实验组PDGFRα、α-SMA和FSP-1的蛋白表达(分别为0.030±0.001、0.932±0.177和0.276±0.020)均显著小于对照组(分别为0.439±0.006、1.352±0.170和0.835±0.097)(t=149.40,P<0.001;t=66.38,P<0.001;t=11.41,P=0.008),即PDGFRα的敲除显著抑制Gli1^(+)-MSC向纤维细胞分化。双向诱导后,对照组可见脂肪细胞形成明显减少,实验; 张智星肖丽吴来迪于成博毛靖曹颖光宋珂; 关键词：血小板源性生长因子间充质干细胞细胞分化成脂分化锌指蛋白绿色荧光蛋白质类

犬小孢子菌丝氨酸水解酶家族1蛋白的亚细胞定位分析: 2020年; 目的对丝氨酸水解酶家族1(FSH1)蛋白在犬小孢子菌中进行亚细胞定位分析。方法以前期构建的犬小孢子菌FSH1质粒及载体pCAMBIA-LRP-增强型绿色荧光蛋白(EGFP)为模板,PCR扩增FSH1基因及EGFP基因;同时利用SnaBI/KpnI对pCAMBIA-LRP-EGFP质粒双酶切获得载体DNA,将扩增的EGFP基因克隆至酶切好的载体DNA中获得EGFP表达载体;将扩增的FSH1基因及EGFP基因克隆至酶切好的载体DNA中获得融合载体Ptrcp-FSH1-EGFP-Ttrcp。通过根癌农杆菌介导的遗传转化方法,用重组质粒转化犬小孢子菌,使融合基因FSH1-EGFP在真菌通用启动子(Ptrpc)和终止子(Ttrpc)调控下在犬小孢子菌中整合型表达,利用激光共聚焦显微镜观察融合蛋白的细胞定位。结果成功构建根癌农杆菌转化系统及犬小孢子菌EGFP表达载体;融合基因FSH1-EGFP在犬小孢子菌中获得整合型表达。激光共聚焦显微镜显示FSH1-EGFP融合蛋白的荧光信号呈颗粒状或团块状集中于犬小孢子菌的细胞质及细胞核中。结论FSH1-EGFP融合蛋白成功定位于犬小孢子菌的细胞质及细胞核中,为进一步明确犬小孢子菌FSH1基因的功能及致病机制奠定了基础。; 张芙蓉郭春梅谭灿刘洋徐宇杨国玲; 关键词：小孢子菌属绿色荧光蛋白质类犬小孢子菌亚细胞定位

p300/CBP相关因子对大鼠血管平滑肌细胞迁移的影响及机制研究被引量：1: 2020年; 目的探讨p300/CBP相关因子(PCAF)对大鼠血管平滑肌细胞(VSMC)迁移的作用及机制。方法组织块贴壁法获取大鼠原代VSMC,使用Ad-PCAF RNAi腺病毒转染VSMC以下调PCAF表达。选择1μg/ml的脂多糖作为VSMC迁移诱导剂。将实验分为4组:不添加脂多糖(对照组)、1μg/ml脂多糖刺激(A组)、Ad-绿色荧光蛋白(GFP)腺病毒转染+1μg/ml脂多糖刺激(B组)、Ad-PCAF RNAi腺病毒转染+1μg/ml脂多糖刺激(C组)。采用Transwell实验检测细胞迁移水平。免疫荧光染色实验检测VSMC中NF-κB p65的核转位情况。Western blot检测PCAF、NF-κB p65、磷酸化NF-κB p65蛋白表达水平。结果 Western blot结果显示,与对照组比较,A组和B组PCAF和磷酸化NF-κB p65蛋白表达明显升高,差异有统计学意义(P<0.05);与B组比较,C组PCAF和磷酸化NF-κB p65蛋白表达明显降低,差异有统计学意义(P<0.05)。Transwell实验结果显示,与对照组比较,A组和B组穿出小室细胞数明显增多,差异有统计学意义[(766.30±40.86)个/视野、(794.00±76.36)个/视野vs (202.70±22.59)个/视野,P<0.05];与B组比较,C组穿出小室细胞数明显减少,差异有统计学意义[(337.00±82.95)个/视野vs (794.00±76.36)个/视野,P<0.05]。免疫荧光染色实验结果显示,与对照组比较,A组和B组细胞核内NF-κB p65蛋白表达明显升高,差异有统计学意义(P<0.05)。与B组比较,C组细胞核内NF-κB p65蛋白表达明显降低,差异有统计学意义(P<0.05)。结论下调PCAF的表达可明显抑制VSMC迁移,其机制可能与下调PCAF后抑制NF-κB信号通路介导的炎性反应有关。; 邱立强夏豪江洪徐昌武; 关键词：细胞运动绿色荧光蛋白质类

人CREG启动子报告基因质粒的构建及转录活性分析被引量：1: 2019年; 目的构建人E1A激活基因阻遏子基因(hCREG)不同截短片段的启动子增强型绿色荧光蛋白(pEGFP1)报告基因载体,比较各启动子转录活性,从而确定hCREG核心启动子区。方法通过查询美国国立生物技术信息中心(NCBI)数据库hCREG序列并结合启动子特点,获得长度为2003(–1925/+78) bp的启动子片段。利用PCR法及双酶切法截短5个启动子片段并克隆至pEGFP1中,构建pEGFP1_hCREG_2003、pEGFP1_hCREG_945、pEGFP1_hCREG_586、pEGFP1_hCREG_478、pEGFP1_hCREG_358报告基因载体质粒。并将其与内参质粒pGL4.73[hRluc/SV40]瞬时共转染入293T细胞48 h,荧光显微镜下观察pEGFP1hCREG启动子报告基因的绿色荧光表达;采用实时定量PCR检测各启动子mRNA的表达,并确定核心启动子区。采用生物信息学方法预测核心启动子区可能结合的转录因子。结果通过双酶切和基因测序法证实成功构建5个hCREG启动子报告基因载体。荧光显微镜下的观察结果和实时定量PCR结果均显示,pEGFP_1hCREG_586转录活性最高(P<0.05),pEGFP1_hCREG_358转录活性最低(P<0.05),pEGFP1_hCREG_2003、pEGFP1_hCREG_945、pEGFP1_hCREG_478转录活性差异均无统计学意义(P>0.05),提示–867/–509 bp为负性调控区,–400/–281 bp和–508/–401 bp均存在增强子序列,故hCREG基因核心启动子区位于基因5’上游序列–508/–281 bp区域。生物信息学预测关键启动子区–508/–281 bp可能结合的转录因子为Pax5/P53、C/EBPβ、GR-β、GATA-1、GR-α、c-Jun、PRB/PRA、YY1、RXR-α、AP-2、FOXP3、GR、TFIID、STAT4、c-Ets-1。结论成功构建了hCREG基因启动子重组质粒,其核心启动子位于–508/–281 bp区域,此区域可结合多个转录因子。; 刘姗刘美丽刘丹闫承慧田孝祥刘艳霞; 关键词：E1A激活基因阻遏子转录启动子绿色荧光蛋白质类聚合酶链反应

一种高效慢病毒转染小鼠肺方法的建立被引量：1: 2019年; 目的建立一种高效慢病毒转染小鼠肺的方法。方法采用绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)和萤光素酶(luciferase,Luc)双基因标记慢病毒载体,通过293 FT细胞体外包装带有报告基因的慢病毒颗粒。选取BALB/c小鼠30只,每组15只,随机分为高压喷雾注射组和普通注射组,小鼠手术暴露气管,经气道注射报告基因标记的慢病毒颗粒,观察慢病毒转染至肺后2、4、6、8、10、12 h小鼠存活率和呼吸系统表现,并在转染后24 h体外活体荧光成像仪检测报告基因在小鼠体内的发光强度。结果荧光显微镜下观察,见多数细胞表达GFP,并见细胞融合现象,少量细胞悬浮,病毒滴度为5×107U/ml。活体荧光成像结果显示,与普通注射方法相比,高压喷雾注射组报告基因荧光强度均匀分布在肺中,荧光强度较高,两组间表达强度比较差异有统计学意义(P=0.0095);且高压喷雾注射组小鼠气促、鼻唇黏膜发绀(cyanosis)较普通注射组恢复快,两组12 h存活率分别为80%和50%。结论高压喷雾注射技术转染慢病毒颗粒至小鼠肺的技术更为高效,可用于建立外源基因小鼠肺转染模型。; 王蕾王晓英王玥付秋霞王东根詹林盛; 关键词：慢病毒属转染绿色荧光蛋白质类

人LDHA基因真核表达载体的构建及其功能鉴定被引量：1: 2019年; 目的构建带有绿色荧光蛋白(GFP)标签的人乳酸脱氢酶A(LDHA)的真核表达载体,并对其生物学功能进行初步研究。方法利用PCR技术从人乳腺文库中扩增出人LDHA基因,并将其克隆到pEGFP-C1载体上,经双酶切和测序鉴定成功后转染到肝癌HepG2细胞中,通过Western印迹检测其表达情况,免疫荧光检测其亚细胞定位,并利用生长曲线、克隆形成以及划痕实验探究LDHA对肝癌HepG2细胞增殖、迁移能力的影响。结果从人乳腺文库中扩增获得大小约为1000 bp的DNA片段,并成功克隆至pEGFP-C1载体上,经测序与目的序列完全一致;转染肝癌HepG2细胞后目的基因成功表达;荧光显微镜观察发现,GFP-LDHA融合蛋白主要聚集于细胞质中;细胞生长曲线和克隆形成实验结果显示,转染pEGFP-LDHA的肝癌细胞较空载体细胞增殖能力增强;划痕实验显示,转染pEGFP-LDHA的肝癌细胞较空载体细胞迁移性增强。结论成功构建了带GFP标签的人LDHA真核表达载体,为进一步研究LDHA在肝癌细胞中的功能奠定了基础。; 张德宇马路园朱祥刘娟杨旭辉陈玉徐小洁叶棋浓; 关键词：真核表达聚合酶链反应绿色荧光蛋白质类

带GFP标签的SQSTM1真核表达载体的构建及功能验证: 2019年; 目的构建带绿色荧光蛋白报告载体(pEGFP-C1)的死骨片1(SQSTM1/P62)真核表达载体,在获得pEGFPSQSTM1融合表达蛋白后,对其功能进行验证。方法以人乳腺文库为模板,通过聚合酶链反应(PCR)扩增人SQSTM1基因编码序列,插入到pEGFP-C1载体中,把测序正确的重组质粒转染人胚肾293T细胞,蛋白质印迹法(Western blotting)检测该融合蛋白表达情况;分别转染pEGFP-C1空载体、pEGFP-SQSTM1至乳腺癌细胞ZR75-1,荧光显微镜观察SQSTM1蛋白在细胞中的定位情况;荧光漂白后恢复实验(FRAP)验证乳腺癌细胞ZR75-1中SQSTM1小体荧光漂白后恢复情况。结果重组质粒pEGFP-SQSTM1的基因序列与目的序列完全一致,Western印迹检测蛋白表达成功;荧光显微镜观察SQSTM1的表达,结果显示,表达产物主要以点状小体形式定位于乳腺癌ZR75-1细胞的胞质中;FRAP实验验证乳腺癌细胞ZR75-1中SQSTM1小体激光漂白后绿色荧光可恢复。结论成功构建pEGFPSQSTM1真核表达载体,证实了SQSTM1蛋白在人乳腺癌细胞ZR75-1中表达,表达蛋白以点状小体形式定位于细胞质中,为进一步研究SQSTM1小体的功能提供基础。; 朱祥陈玉马路园张德宇刘娟于世炎聂秀红徐小洁; 关键词：乳腺肿瘤绿色荧光蛋白质类聚合酶链反应

重组腺病毒载体Ad-EGFP-Klotho构建的实验研究被引量：1: 2019年; 目的本研究旨在构建并制备增强型荧光蛋白(EGFP)基因和Klotho基因重组腺病毒载体AdEGFP-Klotho,并将其感染HEK293细胞,为基因治疗提供研究基础。方法设计含有NheⅠ与NotⅠ双酶切位点的引物,应用PCR方法扩增Klotho基因,将其连接到EGFP标记的pDC316-mCMV穿梭质粒上,构建重组穿梭质粒pDC316-mCMV-EGFP-Klotho,利用Polyfectin脂质体将骨架质粒和重组穿梭质粒共转染HEK293细胞进行同源重组,得到重组腺病毒Ad-EGFP-Klotho,并包装扩增,测定病毒颗粒数及滴度。采用PCR方法对重组腺病毒载体Ad-EGFP-Klotho进行鉴定,并进行Klotho基因测序。结果经PCR和NheⅠ、NotⅠ双酶切鉴定,重组腺病毒载体Ad-EGFP-Klotho中证实含有Klotho基因,测序结果和设计序列比对一致,重组腺病毒载体Ad-EGFP-Klotho构建成功。滴度为2.0×1010 Tu/mL,成功感染HEK293细胞,感染复数(MOI)=100,感染效率达91.75%,从Ad-EGFP-Klotho重组腺病毒载体中可以检测到3 045bp的条带,表明目的基因已成功整合在重组腺病毒载体Ad-EGFP-Klotho基因组中。结论应用细胞内同源重组方法成功构建了含有EGFP和Klotho基因的重组腺病毒载体Ad-EGFP-Klotho,制备获得高滴度的病毒,可高效感染HEK293细胞并表达目的蛋白。; 贾政刘茜邢正江邹弘麟李亚雄魏玲韦杰李春城孟凡棣; 关键词：KLOTHO基因绿色荧光蛋白质类杂合子

人血小板第4因子基因启动子报告基因载体的构建及转录活性分析: 2019年; 目的构建人血小板第4因子(PF4)基因启动子-绿色荧光蛋白(GFP)报告基因载体PLVX-PF4-promoter-GFP,并检测其转录活性。方法在NCBI数据库中获得人PF4基因启动子5’端非编码区包含转录起始位点在内的-245^+49 bp的DNA序列。以正常人全血基因组DNA为模板,利用PCR扩增该序列,与GFP序列连接并插入到PLVX-tight-puro载体上,构建重组质粒PLVX-PF4-promoter-GFP。将其包装慢病毒并感染MEG01细胞,用嘌呤霉素筛选出稳转细胞株,并用12-肉豆蔻酰-13-乙酸佛波酯(PMA)诱导MEG01细胞分化成熟,通过流式细胞术检测GFP表达率,从而验证报告基因的转录活性。结果构建的载体PLVX-PF4-promoter-GFP经酶切鉴定及测序结果比对完全正确,将其转入MEG01细胞,经药物筛选获得了MEG01-PF4-GFP细胞株。流式细胞术检测结果表明,正常培养条件下的MEG01-PF4-GFP细胞中GFP阳性细胞率低[(5.467±0.2603)%],该细胞经PMA诱导分化后,GFP阳性细胞率显著升高[(24.93±2.571)%]。结论成功构建了人PF4启动子-GFP报告基因载体,为后续深入研究PF4基因的调控机制及巨核细胞发育分化的分子生物学机制奠定了基础。; 姜佳楠覃金华范增何丽娟岳文郑敏李艳华裴雪涛; 关键词：血小板因子4 巨核细胞绿色荧光蛋白质类

犬小孢菌PQ-LRP蛋白的定位研究: 2019年; 目的用增强型绿色荧光蛋白(EGFP)标记犬小孢子菌PQ-LRP蛋白,明确PQ-LRP蛋白在犬小孢子菌中的定位。方法提取犬小孢子菌总RNA,反转录为cDNA作为模板,PCR扩增PQLRP基因,将PQ-LRP基因与EGFP基因构成融合基因,连接到pCAMBIA 1300质粒载体.采用根癌农杆菌转化法对犬小孢子菌进行转化,使融合基因LRP-EGFP在真菌通用启动子(Ptrpc)和终止子(Ttrpc)调控下在犬小孢子菌中整合型表达,激光共聚焦显微镜检测融合蛋白的细胞定位。结果成功构建表达载体pCAMBIA-LRP-EGFP,融合基因LRP-EGFP在犬小孢子菌中获得整合型表达。激光共聚焦显微镜下LRP-EGFP的荧光信号呈颗粒状或团块状集中于犬小孢子菌的细胞膜上。结论LRP-EGFP融合基因在犬小孢子菌中成功表达,且PQ-LRP蛋白定位于犬小孢子菌细胞膜上。; 刘洋徐宇张芙蓉谭灿杨国玲; 关键词：小孢子菌属绿色荧光蛋白质类犬小孢子菌蛋白定位

加载更多 ∨

相关作者

用户反馈

相关作者

用户登录

用户反馈