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一株用绿色荧光蛋白标记NS1蛋白的重组蓝舌病毒: 本发明属于基因工程领域，具体涉及一株用绿色荧光蛋白标记NS1蛋白的重组蓝舌病毒。本发明通过在野生型蓝舌病毒非结构蛋白NS1的156位和157位氨基酸之间插入增强型绿色荧光蛋白(enhanced green fluores...; 独军政宋昱庆刘学春田占成关贵全罗建勋殷宏

一株用绿色荧光蛋白标记NS1蛋白的重组蓝舌病毒: 本发明属于基因工程领域，具体涉及一株用绿色荧光蛋白标记NS1蛋白的重组蓝舌病毒。本发明通过在野生型蓝舌病毒非结构蛋白NS1的156位和157位氨基酸之间插入增强型绿色荧光蛋白(enhanced green fluores...; 独军政宋昱庆刘学春田占成关贵全罗建勋殷宏

利用绿色荧光蛋白标记植物愈伤组织及种子的方法: 本发明提供一种利用绿色荧光蛋白标记植物愈伤组织及种子的方法，通过优化合成绿色荧光蛋白mGL基因，将其构建于组成型启动子(如花椰菜花叶病毒的35S启动子)及种子特异性启动子(如水稻谷蛋白GluB‑4基因启动子)下游。转化水...; 赵光苗金雄霞李应将安保光吴永忠黄培劲

四株革兰氏阴性细菌的红绿色荧光蛋白标记及其生物学特性研究: 2024年; 【目的】构建广谱复制型荧光蛋白质粒,并对革兰氏阴性细菌标记以评价荧光蛋白质粒适用性。【方法】将gfp、mCherry和组成型启动子PpsbA克隆到质粒pBBR1MCS2'以构建表达载体pBBR1MCS2'-PpsbAGFP和pBBR1MCS2'-PpsbAmCherry,通过接合转移将上述载体分别导入茄科劳尔氏菌(Ralstonia solanacearum)EP1、胡萝卜果胶杆菌(Pectobactererium carotovorum subsp.carotovorum)WB、肺炎克雷伯氏菌(Klebsiella Pneumoniae)JF和洋葱伯克霍尔德氏菌(Burkholderia cepacia)1-2中,观察菌落及细胞荧光表现,检测其生长曲线和质粒保持率,并验证相关功能。【结果】荧光蛋白表达载体pBBR1MCS2'-PpsbAGFP和pBBR1MCS2'-PpsbAmCherry被成功构建,并成功地利用绿色和红色荧光蛋白标记了上述4株革兰氏阴性细菌。荧光蛋白标记菌的菌落及细胞个体均有对应的荧光发出,生长速率与野生型菌株一致。然而,荧光蛋白质粒在此4株细菌中的稳定性存在较大差异:绿色和红色荧光蛋白质粒在JF菌株中的稳定性最高,无选择压力继代培养40 h后的质粒持有率分别达90.33%和94.67%,在WB和EP1菌株中次之,在1-2菌株中的稳定性均最差,分别在培养5 h和25 h后就检测不到荧光。此外,荧光标记的1-2菌株溶磷活性和WB致病性与各自野生型菌株无显著差异。【结论】成功构建2种荧光蛋白表达载体,并对R.solanacearum EP1等4株不同革兰氏阴性细菌的荧光蛋白标记。其在质粒保持率中,绿色和红色荧光蛋白在1-2菌株中稳定性较差,在其余3株菌株中均能稳定表达,为后续为革兰氏阴性细菌的标记及其相关功能研究提供重要的研究材料。; 吴启叶卢丽娜刘迎龙平媛何鹏搏何月秋吴毅歆何鹏飞; 关键词：革兰氏阴性细菌

人β防御素3对绿色荧光蛋白标记水疱性口炎病毒复制的作用: 2024年; 目的探讨人β防御素-3(HBD3)对绿色荧光蛋白(GFP)-水疱性口炎病毒(VSV)病毒株复制的作用。方法取对数生长期非洲绿猴肾细胞(Vero)分为Control组、1.00感染复数(MOI)组、0.10 MOI及0.01MOI组,Control组为无病毒对照组,后3组Vero细胞用1.00 MOI、0.10 MOI、0.01MOI VSV-GFP感染,采用噬斑形成实验观察感染第3天时各组Vero细胞存活情况,采用实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-PCR)检测感染24 h时1.00、0.10及0.01 MOI组Vero细胞内病毒基质蛋白(M)和GFP信使RNA(mRNA)表达;取对数生长期人非小细胞肺癌细胞(A549)分为未处理组、VSV-GFP组及VSV-GFP+HBD3组,采用Imag J软件对各组镜下A549荧光进行相对定量分析,使用RT-PCR检测各组A549细胞内M和GFP mRNA表达。结果随着病毒滴度的增加,Vero细胞内空斑形成数目增多;Vero细胞内M和GFP mRNA表达表现为0.01 MOI组<0.10 MOI组<1.00 MOI组(P<0.05);VSV-GFP+HBD3组A549细胞单位面积内的荧光强度较VSV-GFP组减弱(P<0.05),M和GFP mRNA表达较VSV-GFP组降低(P<0.05)。结论HBD3可抑制VSV-GFP进入细胞后的病毒复制。; 张乙进安利娟罗红舒莉萍江滟; 关键词：水疱性口炎病毒病毒复制抗菌肽抗病毒

α_(1A)-肾上腺素能受体与增强型绿色荧光蛋白标记的活化T细胞核因子2稳定共表达细胞的构建: 2024年; 目的建立α_(1A)-肾上腺素能受体(α_(1A)-AR)与增强型绿色荧光蛋白(EGFP)标记的活化T细胞核因子2(NFAT2)稳定共表达细胞。方法①将pcDNA3.1-α_(1A)-AR-3×FLAG重组质粒转染至U2OS-EGFPNFAT2细胞,经潮霉素B(Hygro-B)200 mg·L^(-1)压力筛选后加入α_(1A)-AR激动剂去甲肾上腺素(NE,10μmol·L^(-1))孵育30 min,通过高内涵筛选系统检测细胞核内绿色荧光强度,验证EGFP-NFAT2核转位,筛选得到稳定表达α_(1A)-AR的U2OS-EGFP-NFAT2-α_(1A)-AR细胞。②采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)和Western印迹法检测该细胞和对照细胞U2OS-EGFP-NFAT2中α_(1A)-AR mRNA和蛋白的表达水平。③将U2OS-EGFP-NFAT2-α_(1A)-AR细胞接种于96孔板,分别加入NE(10^(-8)~10^(-5) mol·L^(-1))或α2-AR激动剂右美托咪定(DMED,10^^(-8.8)~10^(-5) mol·L^(-1))孵育30 min,通过高内涵筛选系统检测EGFP-NFAT2核转位。④将U2OS-EGFP-NFAT2-α_(1A)-AR细胞分为溶剂对照组、α1-AR拮抗剂萘派地尔(1μmol·L^(-1))组、NE(1μmol·L^(-1))组、萘派地尔+NE(各1μmol·L^(-1)共孵育)组、α2-AR拮抗剂阿替美唑(0.1μmol·L^(-1))组、DMED(0.1μmol·L^(-1))组、阿替美唑+DMED(各0.1μmol·L^(-1)共孵育)组和萘派地尔+DMED(萘派地尔1μmol·L^(-1)与DMED 0.1μmol·L^(-1)共孵育)组,药物孵育时间均为30 min,通过高内涵筛选系统检测EGFP-NFAT2核转位,验证该细胞α_(1A)-AR功能的特异性。结果①Hygro-B压力筛选得到58株U2OS-EGFP-NFAT2-α_(1A)-AR细胞,NE 10μmol·L^(-1)孵育后,其中50号细胞核内绿色荧光强度最强,故选定其为稳定共表达α_(1A)-AR和EGFPNFAT2的U2OS-EGFP-NFAT2-α_(1A)-AR细胞。②Western印迹法结果显示,U2OS-EGFP-NFAT2-α_(1A)-AR细胞可明显表达α_(1A)-AR蛋白,而对照细胞U2OS-EGFP-NFAT2中未见α_(1A)-AR蛋白表达。RT-qPCR结果显示,该细胞在传代5~20代内α_(1A)-AR mRNA均稳定表达,其表达水平为对照细胞的500~800倍。③NE或DMED使U2OS-EGFP-NFAT2-α_(1A)-AR细胞中EGFP-NFAT2核转位明显增加,半数�; 王晓璇李玉蕾周培岚苏瑞斌; 关键词：核转位去甲肾上腺素

一种绿色荧光蛋白标记重组虹彩病毒的构建及其应用: 本发明提供了一种绿色荧光蛋白标记重组虹彩病毒的构建及其应用。采用同源重组的方法将eGFP和Flag标签插入到主要衣壳蛋白编码基因的C端，进而通过细胞分选仪和极限稀释法筛选出绿色荧光蛋白标记重组虹彩病毒。针对目标病毒，通过...; 王帆赖翠欣

利用绿色荧光蛋白标记产肠毒素大肠杆菌F4ac: 2023年; 利用电击转化法将表达绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)的原核表达载体pTurboGFP-B转化到产肠毒素大肠杆菌(enterotoxigenic Escherichia coli,ETEC)F4ac中,获得表达绿色荧光的菌株ETEC F4ac-GFP。聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)结果显示,转化菌株表达绿色荧光蛋白编码基因,且可以在蓝光仪和荧光显微镜下清晰地观察到转化菌株发出绿色荧光;将ETEC F4ac-GFP与IPEC-J2细胞系进行体外粘附试验,在细胞水平验证了转化菌株荧光表达的稳定性与可靠性,且ETEC F4ac导入荧光质粒后不改变其对宿主细胞的胞粘附能力。CCK-8(Cell Counting Kit-8)和实时荧光定量PCR(qRT-PCR)结果表明,ETEC F4ac导入荧光质粒后不改变其对宿主细胞的毒力。本研究为深入探究ETEC F4ac致病机理提供了工具菌株。; 靳荣理薛鹏翔范庆花马晓云唐辉张勤王文文; 关键词：绿色荧光蛋白粘附稳定性

绿色荧光蛋白标记解淀粉芽孢杆菌Bam22在油菜体内的定殖被引量：5: 2022年; 研究GFP标记的解淀粉芽孢杆菌Bam22在油菜植株上的定殖规律,为其开发利用提供科学依据。采用自然转化法将携带绿色荧光蛋白基因的质粒pGFP4412导入Bam22细胞中,构建GFP荧光标记菌株;对比野生型菌株Bam22与标记菌株Bam22-GFP的生长曲线和抑菌能力;通过灌根法,观察标记菌株在油菜体内不同组织部位的定殖数量,分析其定殖规律及能力。结果表明,标记菌株Bam22-GFP在激发光波长为488 nm的蓝光下发出强烈的绿色荧光,且GFP荧光蛋白标记及其基因表达不影响解淀粉芽孢杆菌Bam22的生长曲线和抑菌能力。标记菌株能够通过灌根法定殖于油菜植株内部,并由根部传导到油菜茎部和叶部,Bam22-GFP在根、茎、叶的定植规律均表现出先上升后下降趋势。接种后第45天,仍能在油菜的根、茎、叶组织中检测到标记菌株。说明解淀粉芽孢杆菌Bam22能通过灌根法在油菜体内定殖并传导,有较好的定殖能力,在农业上具有良好的应用前景。; 杨潇湘黄小琴张蕾张蕾鲜贇曦张重梅刘勇; 关键词：油菜解淀粉芽孢杆菌绿色荧光蛋白标记定殖根肿菌

基于CRISPR/Cas9系统对乳酸乳球菌进行绿色荧光蛋白标记被引量：1: 2022年; 乳酸乳球菌是治疗剂在体内运送的良好载体,研究其在体内的真实运送情况需对其进行标记。该实验利用CRISPR/Cas9系统对乳酸乳球菌(Lactococcus lactis)NZ9000进行增强型绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescent protein, eGFP)标记,用于研究乳酸乳球菌在体内的运送,评价其作为益生菌的功能。基于该实验室已构建的乳酸乳球菌CRISPR/Cas9编辑质粒pLL25构建重组质粒pYSH,其上携带eGFP及同源臂,电转入乳酸乳球菌NZ9000感受态细胞中,将基因组中的乳酸脱氢酶基因(ldh)替换为绿色荧光蛋白基因,从而使Lactococcus lactis NZ9000获得标记,表达绿色荧光蛋白。对绿色荧光标记的Lactococcus lactis NZ9000突变株,酶标仪定量分析eGFP的表达强度。荧光强度定量分析结果表明,在乳酸乳球菌不同生长阶段,eGFP基因均能稳定表达。; 宋馨王慧袁世豪黄佳伟易文涛艾连中; 关键词：绿色荧光蛋白

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