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- 清腹通肠颗粒通过抑制结肠Cajal间质细胞自噬治疗慢传输型便秘的实验研究
- 目的:本研究旨在探讨清腹通肠颗粒对于慢传输型便秘(slow transit constipation,STC)大鼠模型的结肠Cajal间质细胞自噬的机制研究。方法:1.将100只SD大鼠随机分为2组:空白组、造模组。造模...
- 高西京
- 关键词：慢传输型便秘CAJAL间质细胞胃肠道动力自噬
- 化瘀通便汤调节STC大鼠结肠Cajal间质细胞自噬相关蛋白表达的实验研究被引量：9
- 2022年
- 目的该实验通过观察复方地芬诺酯诱导的慢传输型便秘(slow transit constipation,STC)模型大鼠结肠组织中Cajal间质细胞(ICCs)自噬情况,探讨化瘀通便汤治疗STC机制及其量效关系。方法选择成年72只SD大鼠,随机分为6组,空白对照组12只大鼠给予纯净水灌胃,剩余5组用复方地芬诺酯灌胃制备慢传输型便秘大鼠模型,造模2周后随机抽取1组实验组,和空白组一起收集粪便,采用检测粪便含水率和炭末推进率的方法进行肠道功能障碍的测定。确定造模成功后除模型对照组外,3组分别给予低、中、高剂量化瘀通便汤治疗,1组给予西药治疗,模型组予等量纯水灌胃,对6组大鼠各项指标进行观察,包括大鼠一般情况(精神状况、进食量、饮水量、首次排黑便时间),利用透射电镜观察ICCs形态变化,并使用免疫组化法、免疫荧光、蛋白免疫印迹法检测ICCs及自噬相关蛋白Beclin1、Atg5、LC3B、p62的表达。结果(1)与空白组相比,造模组大鼠一般情况较差,首次排黑便时间延长(P<0.01)。(2)相较于空白组,模型组Cajal间质细胞出现严重损伤,各干预组Cajal间质细胞的损伤均有所改善和修复,化瘀通便汤高剂量组Cajal间质细胞改善和修复最明显。(3)与空白组相比,模型组ICCs细胞结构明显改变,Beclin1、LC3B、Atg5蛋白表达上升,p62表达下降(P<0.01);与模型组相比,低、中、高剂量化瘀通便汤组自噬相关蛋白表达均有不同程度的变化,差异有明显统计学意义(P<0.01);高剂量化瘀通便汤与低、中组间差异显著(P<0.05)。结论(1)运用复方地芬诺酯成功复制STC大鼠模型,且STC大鼠模型稳定性好,安全性高,可用于后期实验研究。(2)化瘀通便汤能明显改善STC症状,修复Cajal间质细胞结构,主要机制可能与下调Beclin1、LC3B、Atg5表达而调节ICCs过度自噬,上调p62表达促进ICCs修复有关,从而能刺激肠道蠕动,增加肠道水分。(3)化瘀通便汤治疗S
- 满如于永铎陈萌张斯瑶姜洪宇
- 关键词：慢性传输型便秘CAJAL间质细胞自噬
- 枳术丸汤剂含药血清对大鼠结肠Cajal间质细胞增殖及PI3K/Akt信号通路的影响被引量：11
- 2022年
- 目的 探讨枳术丸汤剂含药血清对大鼠结肠Cajal间质细胞(ICC)增殖以及对PI3K/Akt信号通路的影响。方法 20只大鼠随机分为枳术丸汤剂组、空白血清组,每组各10只,枳术丸汤剂组灌胃枳术丸汤剂5.8 g/kg,空白血清组灌胃等量蒸馏水,每天1次,连续7 d,取血制备血清;分别设立不同浓度血清、不同干预时间、不同浓度PI3K/Akt抑制剂LY294002作用于大鼠结肠ICC细胞,计算增殖率并筛选出最佳干预措施;将不同因素处理的大鼠结肠ICC细胞分为正常组(培养液)、模型组(正常细胞+LY294002)、空白血清组(模型组+10%空白血清)、枳术丸汤剂组(模型组+5%枳术丸汤剂含药血清),分别加入空白血清和含药血清干预;免疫荧光检测、Western blot、RT-qPCR分析药物对PI3K、Akt蛋白及基因表达的影响。结果 25μmol/L PI3K/Akt抑制剂LY294002、5%枳术丸汤剂含药血清及10%空白血清干预大鼠结肠ICC细胞24 h为最佳干预措施;免疫荧光、Western blot、RT-qPCR检测均显示,与正常组比较,模型组ICC细胞PI3K、Akt表达降低(P<0.01);与模型组和空白血清组比较,枳术丸汤剂组ICC细胞PI3K、Akt表达均升高(P<0.05,P<0.01)。结论 枳术丸含药血清在一定浓度下能促进ICC细胞的增殖,其机制可能与调控PI3K/Akt信号通路相关。
- 施敏刘富林涂琴蓉夏旭婷
- 关键词：枳术丸CAJAL间质细胞PI3K
- 化瘀通便汤对慢传输型便秘大鼠结肠Cajal间质细胞及相关蛋白表达调节作用的实验研究被引量：6
- 2022年
- 目的观察化瘀通便汤对慢传输型便秘大鼠结肠Cajal间质细胞损伤情况的调节作用,探索活血化瘀中药复方调控Cajal间质细胞改善肠道传输功能的可能机制。方法将72只大鼠利用随机方法分为6组,即空白对照组,模型对照组,化瘀通便汤低、中、高剂量组,西药对照组。空白对照组12只大鼠给予纯净水灌胃,剩余5组用复方地芬诺酯灌胃制备慢传输型便秘大鼠模型,造模成功后除模型对照组外,3组分别给予低、中、高剂量化瘀通便汤治疗,1组给予西药治疗,对6组大鼠各项指标进行观察,包括一般状态、体重改变、近端结肠Cajal间质细胞超微结构及数量变化,检测c-Kit、HCN1、HCN2蛋白表达水平。结果(1)进行模型制备以前,6组大鼠的一般状态均较好,各组体重差别较小,无统计学差异(P>0.05);(2)相较于空白对照组,模型对照组大鼠容易被激惹,体重增加幅度显著降低(P<0.01),Cajal间质细胞出现严重损伤,C-Kit(Cajal间质细胞)细胞数量明显减少(P<0.01),c-Kit、HCN1、HCN2蛋白表达能力明显下降(P<0.01);(3)与模型对照组比较,治疗后各组大鼠一般状态有所改善,各干预组大鼠体重均有所增加,低、中剂量组体重变化有统计学差异(P<0.05),各干预组Cajal间质细胞的损伤均有所改善和修复,C-Kit阳性细胞数量显著增多(P<0.01),c-Kit、HCN1、HCN2蛋白表达水平不同程度升高(P<0.05),化瘀通便汤高剂量组及西药对照组Cajal间质细胞改善和修复明显,C-Kit阳性细胞数量、c-Kit、HCN1、HCN2蛋白表达水平增加趋势显著。结论化瘀通便汤可恢复慢传输型便秘大鼠体重,改善和修复Cajal间质细胞超微机构,使得Cajal间质细胞数量显著增加,促进c-Kit、HCN1、HCN2蛋白表达能力的提升,对于肠道传输功能具有显著的改善效果,高剂量化瘀通便汤组改善尤为显著。
- 陈萌于永铎张斯瑶满如姜洪宇
- 关键词：CAJAL间质细胞慢传输型便秘
- 谷氨酸诱导大鼠结肠 Cajal 间质细胞构建自噬模型被引量：3
- 2021年
- 目的通过谷氨酸诱导离体大鼠结肠Cajal间质细胞(ICC)构建细胞自噬模型。方法使用不同浓度的谷氨酸不同时间点作用于原代培养的大鼠结肠ICC,免疫荧光鉴定大鼠结肠ICC细胞;CCK-8法检测谷氨酸对ICCs活力的影响;Western印迹检测不同浓度谷氨酸在不同作用时点对大鼠结肠ICC自噬蛋白微管相关蛋白轻链(LC)3表达水平的影响;透射电镜观察谷氨酸干预后细胞内自噬体和超微结构的变化。结果与空白组相比,谷氨酸(5 mmol/L)24 h显著降低大鼠结肠ICC活力(P<0.01)。谷氨酸(5 mmol/L)作用6 h、24 h均可显著提高自噬蛋白LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ的比值(P<0.05),其中以5 mmol/L谷氨酸作用24 h的LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值最高(P<0.01)。透射电镜检测5 mmol/L谷氨酸干预大鼠结肠ICC 24 h发现,细胞内自噬空泡和自噬体数量明显增加。结论谷氨酸诱导大鼠结肠ICC自噬模型的最佳浓度和时间为5 mmol/L和24 h。
- 颜帅乐音子王晓鹏
- 关键词：CAJAL间质细胞自噬
- 电针对慢传输型便秘大鼠结肠Cajal间质细胞自噬相关蛋白表达的影响研究被引量：22
- 2021年
- 目的探讨电针治疗慢传输型便秘大鼠(Slow transit constipation,STC)的可能机制。方法将40只雄性SD大鼠按随机数字表法分为空白组(10只)、STC组(30只)。采用复方地芬诺酯灌胃法复制STC模型,造模14天后评价造模效果,造模成功后STC组大鼠随机分为模型组(10只)、电针组(10只)、假电针组(10只)。电针组采用毫针交替针刺同侧"大肠俞"、"天枢",后接韩式电针仪(HANS-200E)。假电针组针刺腧穴同电针组,夹持电极但不予通电。以上两组每次均干预30 min,每日1次,5次为1个疗程,疗程之间休息2天,共治疗10次。空白组、模型组仅抓取固定。干预结束后观测各组大鼠首粒黑便排出时间及小肠推进率,Western Blot检测结肠Cajal间质细胞(Interstitial cell of Cajal,ICC)标志物C-kit蛋白及自噬相关蛋白Beclin1、P62的表达水平。结果与空白组比较,模型组大鼠首粒黑便排出时间延长(P<0.01),小肠推进率明显降低(P<0.01),结肠组织C-kit蛋白、P62蛋白表达下调,Beclin1蛋白表达上调(P<0.01);与模型组比较,电针组大鼠首粒黑便排出时间缩短(P<0.01),小肠推进率明显升高(P<0.01),结肠组织C-kit蛋白、P62蛋白表达上调,Beclin1蛋白表达下调(P<0.01);与假电针组比较,电针组大鼠首粒黑便排出时间减少(P<0.05),结肠组织C-kit蛋白、P62蛋白表达上调,Beclin1蛋白表达下调(P<0.01)。结论电针可能通过抑制结肠ICC过度自噬,促进ICC数量和结构的恢复,从而改善STC模型大鼠肠道动力障碍。
- 何昭璇熊静王福民尹海燕曾芳余曙光
- 关键词：慢传输型便秘CAJAL间质细胞细胞自噬
- 枳术丸汤剂含药血清对大鼠结肠Cajal间质细胞增殖及PLC-γ信号通路的影响被引量：12
- 2021年
- 目的探讨枳术丸治疗慢传输型便秘的可能作用机制。方法20只SD雄性大鼠随机分为枳术丸汤剂组、空白组,每组10只。枳术丸汤剂组大鼠每日给予浓度为2 g/ml枳术丸汤剂5.8 g灌胃,连续7天,空白组正常饲养。末次给药后1 h腹主动脉采血离心制备含药血清。采用CCK8法观察磷脂酶C-γ(PLC-γ)特异性抑制剂U73122对大鼠结肠原代Cajal间质细胞的细胞抑制率来筛选药物浓度,观察5%、10%、15%、20%浓度的枳术丸汤剂含药血清对Cajal间质细胞的细胞增殖率筛选药物浓度,并分别培养12、24、48 h来筛选用药时间。取二或三代Cajal间质细胞接种至96孔板中,每孔1×10^(4)个细胞,每组重复3孔。实验分为正常组、模型组(正常细胞+筛选浓度的U73122)、空白血清组(模型组+10%空白血清)、枳术丸汤剂血清组(模型组+筛选浓度枳术丸含药血清)。干预时间为实验筛选出的时间。免疫组化法检测磷脂酶C-γ1(PLC-γ1)、磷脂酶C-γ2(PLC-γ2)阳性表达,Western blot法检测PLC-γ1、PLC-γ2蛋白表达,RT-PCR法检测PLC-γ1、PLC-γ2基因表达。结果筛选出U73122最佳实验药物浓度为30μmol/L,枳术丸汤剂组最佳用药浓度为5%,实验最佳干预时间为24 h。与正常组比较,模型组PLC-γ1、PLC-γ2平均光密度值、蛋白及基因表达均降低(P<0.01);与模型组比较,枳术丸汤剂血清组、空白血清组PLC-γ1、PLC-γ2平均光密度值、蛋白及基因表达均升高(P<0.05或P<0.01);与空白血清组比较,枳术丸汤剂血清组PLC-γ1、PLC-γ2阳性表达、蛋白及基因表达明显增多(P<0.01)。结论枳术丸汤剂可能通过激活Cajal间质细胞PLC-γ信号通路,调控细胞增殖,从而促进胃肠运动。
- 夏旭婷王婷刘富林涂琴蓉滕广飞
- 关键词：枳术丸肠道动力
- 电针大肠俞募穴对慢传输型便秘大鼠结肠Cajal间质细胞自噬相关蛋白Beclin1、LC3、p62表达的影响研究
- 目的:本研究以慢传输型便秘（slow transit constipation,STC）模型大鼠为研究载体,以结肠Cajal间质细胞（interstitial cells of Cajal,ICC）自噬失衡为切入点,对比...
- 王福民
- 关键词：电针俞募穴慢传输型便秘自噬
- 文献传递
- 肠润方对功能性便秘大鼠结肠Cajal间质细胞及c-kit/SCF信号通路的影响被引量：18
- 2020年
- 目的:研究肠润方对功能性便秘大鼠结肠Cajal间质细胞及c-kit/SCF信号传导通路的影响,揭示滋阴行气法治疗功能性便秘的可能作用机制。方法:选取SD大鼠72只,随机分为空白组、模型组、麻仁丸组以及肠润方高、中、低剂量组。利用复方地芬诺脂制备功能性便秘大鼠模型,造模成功后,分别使用肠润方低、中、高剂量水煎剂(5.5、11、22g/kg/d)及麻仁丸-生理盐水混悬液(0.3g/kg/d)灌胃进行干预。通过免疫组化法、Western-Blot及RT-PCR法检测大鼠结肠组织中c-kit、SCF的分布及蛋白与基因表达水平。结果:与空白组相比,模型组大鼠结肠组织c-kit、SCF蛋白及mRNA表达水平均显著降低(P<0.01);同模型组相比,肠润方高、中剂量组结肠组织c-kit、SCF蛋白及mRNA表达水平显著升高(P<0.01),免疫组化结果显示c-kit、SCF的表达与肠润方剂量呈正相关。结论:功能性便秘与结肠ICC表达减少,功能异常相关,肠润方通过调控c-kit、SCF表达,恢复c-kit/SCF信号转导通路,恢复ICC对胃肠道节律的正常调控来治疗功能性便秘。
- 肖秋平洪燕秋耿学斯文磊
- 关键词：功能性便秘CAJAL间质细胞
- 枳术丸水煎液及其拆方含药血清对大鼠结肠Cajal间质细胞增殖和凋亡的影响被引量：15
- 2020年
- 目的:探讨枳术丸水煎液及其拆方对大鼠结肠Cajal间质细胞(ICC)增殖和凋亡的影响及其分子机制,并从细胞分子层面分析中医攻补兼施法治疗慢传输型便秘可能的机制。方法:将40只大鼠随机分成白术组、枳实组、枳术丸组、空白血清组,每组10只。白术组灌以17.7 g·kg^-1·d^-1白术水煎液,枳实组灌以8.9 g·kg^-1·d^-1枳实水煎液,枳术丸组灌以26.4 g·kg^-1·d^-1枳术丸水煎液,空白血清组灌以无菌蒸馏水3 mL,每日1次,连续7 d,取血制备含药血清和空白血清。将4组含药血清分别配成5%,10%,15%,20%4个体积分数,干预24 h,观察ICC的数量、形态,用细胞增殖毒性检测试剂盒(CCK-8)检测各组细胞增殖情况,测定各组最佳干预体积分数。将大鼠结肠ICC细胞分为正常组、空白血清组、白术组、枳实组、枳术丸组,5-乙炔基-2'脱氧尿嘧啶核苷(EdU)检测各组ICC的增殖情况,流式细胞仪检测各组ICC的凋亡情况;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测各组ICC中X连锁凋亡抑制蛋白(XIAP),增殖细胞核抗原(PCNA)蛋白表达情况。结果:与正常组比较,空白血清组、白术组、枳实组最佳干预体积分数均为10%,枳术丸组最佳干预体积分数为5%。与正常组比较,所有实验中空白血清组对ICC增殖和凋亡的影响没有明显差异;与正常组及空白血清组比较,白术组、枳实组、枳术丸组ICC增殖率有显著差异(P<0.05,P<0.01),与白术组和枳实组比较,枳术丸组对ICC增殖率明显增加(P<0.05,P<0.01);与枳实组比较,白术组对ICC增殖率变化不明显。与正常组及空白血清组比较,白术组、枳实组、枳术丸组ICC的凋亡率无明显差异;与正常组及空白血清组比较,白术组、枳实组、枳术丸组内的XIAP,PCNA蛋白水平均明显上调(P<0.05,P<0.01),三组间比较差异不明显。结论:枳术丸、枳实、白术在一定浓度下均能通过增加XIAP,PCNA蛋白表达促进ICC的增殖,且对ICC的凋亡无明显�
- 滕广飞刘富林夏旭婷涂琴蓉王婷
- 关键词：枳术丸CAJAL间质细胞攻补兼施
