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miR-219、IGF2 mRNA在早期胎停中的表达及对绒毛滋养层细胞迁移、侵袭的影响: 2024年; 目的分析早期胚胎停止发育绒毛组织中微小RNA-219(miR-219)、胰岛素样生长因子2(IGF2) mRNA表达水平,探讨二者对胎盘绒毛滋养层细胞迁移和侵袭的影响。方法随机选取2022年5月—2024年5月保定市妇幼保健院收治的早期胚胎停止发育的88例患者作为研究组,另外选取55例同期早孕人工流产者作为对照组,实时荧光定量PCR(qPCR)方法检测两组绒毛组织中miR-219、IGF2 mRNA表达。取购买的胎盘绒毛滋养层细胞系(HTR-8/SVneo),随机分为对照组、低氧组(使用100μmol/L氯化钴培养)、低氧+miR-219 mimics组(转染miR-219 mimics后使用100μmol/L氯化钴培养)、低氧+miR-219 mimics+oe-IGF2组(转染miR-219 mimics+IGF2过表达质粒后使用100μmol/L氯化钴培养),使用蛋白质印迹(WB)法检测各组基质金属蛋白酶2(MMP-2)、MMP-9蛋白表达量,四甲基偶氮唑盐比色(MTT)法、克隆形成实验检测HTR-8/SVneo细胞增殖情况,采用划痕试验检测细胞迁移情况,采用Transwell小室检测细胞侵袭能力。结果人群研究显示:与对照组比较,研究组绒毛组织中miR-219表达较高,IGF2 mRNA表达较低(P<0.05)。细胞实验研究显示:与对照组比较,低氧组、低氧+mi R-219 mimics组、低氧+mi R-219 mimics+oe-IGF2组mi R-219表达量升高,IGF2 mRNA表达量、MMP-2、MMP-9蛋白表达量降低,增殖活性、克隆形成数、迁移、侵袭细胞数减少(P<0.05);与低氧组比较,低氧+miR-219 mimics组miR-219表达量升高,IGF2 mRNA表达量、MMP-2、MMP-9蛋白表达水平降低,增殖活性、克隆形成数、迁移、侵袭细胞数减少,低氧+miR-219 mimics+oe-IGF2组miR-219表达量降低,IGF2 mRNA表达量、MMP-2、MMP-9蛋白表达水平升高,增殖活性、克隆形成数、迁移、侵袭细胞数增加(P<0.05);与低氧+miR-219 mimics组比较,低氧+miR-219 mimics+oe-IGF2组miR-219表达量降低,IGF2 mRNA表达量、MMP-2、MMP-9蛋白表达水平升高,增殖活性、克隆形成数、迁移、侵袭细胞数增加(P<0.; 牛会坤李博韩晶吴娜张会辰薛楠; 关键词：胰岛素样生长因子2

miR-30c-5p对人绒毛滋养层细胞线粒体自噬、间充质转化及PEG10水平影响: 2024年; 目的探讨miR-30c-5p对人绒毛滋养层细胞线粒体自噬、间充质转化及PEG10水平影响。方法人绒毛滋养层细胞HTR-8/SVneo分为空白组(HTR-8/SVneo细胞正常培养)、低氧组(HTR-8/SVneo细胞低氧培养)、miR-30c-5p mimics组(HTR-8/SVneo细胞低氧培养转染miR-30c-5p mimics)、NC-mimics组(HTR-8/SVneo细胞低氧培养转染NC-mimics)、miR-30c-5p inhibitor组(HTR-8/SVneo细胞低氧培养转染miR-30c-5p inhibitor)、NC-inhibitor组(HTR-8/SVneo细胞低氧培养转染NC-inhibitor)。qRT-PCR检测各组细胞miR-30c-5p表达;Transwell小室检测细胞侵袭数目;划痕试剂盒检测细胞划痕愈合率;相关试剂盒检测ROS水平;免疫印记检测PEG10、Parkin、PINK1蛋白水平。结果空白组、低氧组、miR-30c-5p mimics组、NC-mimics组、miR-30c-5p inhibitor组及NC-inhibitor组的miR-30c-5p表达分别为1.00±0.00、1.00±0.00、1.61±0.15、1.03±0.13、0.75±0.08及0.96±0.10,差异有统计学意义(F=45.750,P<0.05);与空白组相比,低氧组HTR-8/SVneo细胞侵袭数目、划痕愈合率、PEG10、Parkin、PINK1降低,ROS升高,差异均有统计学意义(P<0.05);低氧组与NC-mimics组、NC-inhibitor组比较上述指标,差异均无统计学意义(P>0.05);与低氧组相比,miR-30c-5p mimics组细胞侵袭数目、划痕愈合率、PEG10、Parkin、PINK1降低,ROS升高,差异均有统计学意义(P<0.05),miR-30c-5p inhibitor组细胞侵袭数目、划痕愈合率、PEG10、Parkin、PINK1升高,ROS降低,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论抑制miR-30c-5p可加快低氧状态下的人绒毛滋养层细胞侵袭及迁移,并通过促进线粒体自噬降低ROS表达,机制与抑制PEG10水平相关。; 许文方黄官友杨朝徐文杰赵孝梅

PEG10对人类绒毛滋养层细胞系HTR-8/Svneo细胞增殖和凋亡影响的初步研究被引量：1: 2023年; 目的初步研究父系表达印记基因PEG10低表达对人类绒毛滋养层细胞系HTR-8/Svneo细胞增殖和凋亡的影响。方法构建4组PEG10干扰载体[si-898、si-1854、si-1951及对照(si-NC)],然后转染到HTR-8/Svneo细胞株并进体外培养,si-NC组为对照组。流式细胞术检测HTR-8/Svneo细胞的细胞周期和细胞凋亡,qRT-PCR检测Cytochrome C、Caspase3、Bid、Bak、Bax及Cyclin D1 mRNA的表达情况,MTT法检测细胞增殖活力。结果与对照组比较,转染3组siRNA片段均能显著抑制PEG10基因的表达(P<0.05),其中si-898、si-1854抑制作用更显著(P<0.01)。转染si-898或si-1854的HTR-8/Svneo细胞Cytochrome C、Caspase3、Bid、Bak、Bax mRNA的表达显著升高(P<0.01),而Cyclin D1 mRNA的表达显著降低(P<0.05),并且细胞凋亡率也显著高于对照组(P<0.05)。MTT法检测细胞增殖活力显示,与对照组相比,干扰PEG10基因后细胞在48 h和72 h的增殖活力也显著降低(P<0.05)。流式细胞术检测显示,干扰PEG10基因后细胞周期阻滞在G1期。结论干扰PEG10基因能诱导人类绒毛滋养层细胞系HTR-8/Svneo细胞凋亡,降低细胞增殖活力,阻止细胞周期从G1期到S期的转化进程,导致细胞周期阻滞。; 张云山董丽娟许丽华马天仲; 关键词：不明原因复发性流产凋亡增殖

早期胚胎停育绒毛滋养层细胞病理学变化被引量：5: 2020年; 目的观察早期胚胎停育(MA)胎盘绒毛滋养层细胞的病理学变化。方法选择2011年12月至2013年12月于河北石家庄第六医院门诊就诊的260例MA患者(孕周<12周)作为研究对象(MA组),选择该院自愿行人工流产的正常早孕孕妇(孕周<12周)作为对照组,共396例。取MA组及对照组患者的胎盘绒毛组织送至北京龙迈达科技公司制成组织阵列芯片,样本按≤25岁、26~30岁、31~34岁、≥35岁年龄区间分组,每组随机挑选10对(病例及对照)进行分析。采用免疫组化法检测反映胎盘血管发生的血管内皮生长因子(VEGF)、反映滋养层细胞和间质细胞分布情况的细胞角蛋白(CK19)和波形蛋白(Vimentin)在MA组和对照组患者早孕绒毛滋养层细胞中的表达差异;通过Tunel法检测MA组和对照组患者早孕绒毛滋养层细胞的凋亡情况。结果早期MA组绒毛滋养层细胞中VEGF表达量较对照组显著降低(P<0.01),而MA组绒毛滋养层细胞中CK19及Vimentin表达与对照组无统计学差异(P>0.05));MA组绒毛滋养层细胞的凋亡指数显著高于对照组(P<0.001)。结论胎盘绒毛滋养层细胞中VEGF的低表达及细胞凋亡指数的增加与胚胎停育发生密切相关,提示胎盘血管生成减少和滋养层细胞过度凋亡是造成早期胚胎停育的部分原因。; 朱旗董艺超张璐张璐夏红飞; 关键词：胚胎停育 VEGF CK19 VIMENTIN

过氧化物酶体增殖物激活受体α对人绒毛滋养层细胞功能的影响被引量：1: 2020年; 人绒毛膜滋养层细胞(HTR8/SVneo)是胎盘建立血液循环的重要组成部分,过氧化物酶体增殖物激活受体α(PPARα)是调节脂代谢的关键转录因子亚型,本研究旨在研究PPARα对人绒毛滋养层细胞功能的影响。将构建的PPARα表达载体和PPARα小干扰RNA分别转染HTR8/SVneo细胞,检测细胞功能的变化。本实验采取EdU法和MTT法检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡,transwell小室法检测细胞迁移和浸润能力。结果显示,PPARα过表达能抑制滋养层细胞增殖、迁移和浸润能力,促进细胞凋亡能力;敲低PPARα能促进细胞的增殖、迁移和浸润能力,抑制细胞凋亡能力。PPARα表达水平与其对细胞生长和迁移的影响负相关。; 管纯一马旭马旭; 关键词：过氧化物酶体增殖物激活受体Α 细胞增殖细胞凋亡细胞迁移

棕榈酸诱导人绒毛滋养层细胞胰岛素抵抗模型的建立被引量：1: 2018年; 目的探讨人胎盘绒毛滋养层细胞HTR8-S/Vneo在高脂环境下是否会形成胰岛素抵抗。方法用MTT法测定棕榈酸和胰岛素不影响HTR8-S/Vneo细胞增殖的最适浓度,在该最适浓度下分为四组(对照组、棕榈酸组、胰岛素组、棕榈酸-胰岛素协同处理组)处理HTR8-S/Vneo细胞,检测不同处理条件及不同处理时间下,细胞葡萄糖摄取量和细胞内总糖量。结果用MTT法检测不同浓度棕榈酸及胰岛素处理的HTR8-S/Vneo细胞,发现棕榈酸浓度为0.125mmol/L、胰岛素浓度为100nmol/L时,对细胞增殖没有显著影响(P>0.05),故选择该浓度的棕榈酸与胰岛素处理HTR8-S/Vneo细胞。在处理12h、18h、24h、36h分别检测葡萄糖的消耗量和细胞内总糖量,发现与对照组相比,胰岛素处理后葡萄糖消耗量和细胞内总糖量呈上升趋势(P<0.05),而棕榈酸处理后葡萄糖消耗量和细胞内总糖量无显著变化(P>0.05);与棕榈酸单独处理组相比,棕榈酸-胰岛素协同处理组在12h和18h能显著增加细胞内总糖量(P<0.05),但在24h和36h时这种显著差异消失(P>0.05),且与单独胰岛素处理组相比,棕榈酸-胰岛素协同处理组显著降低了葡萄糖消耗量和细胞内总糖量(P<0.05)。结论棕榈酸-胰岛素协同处理24h,引起HTR8-S/Vneo细胞对胰岛素的敏感性降低,HTR8-S/Vneo细胞胰岛素抵抗模型建立;与文献报道模型相比,棕榈酸-胰岛素协同处理大大缩短了细胞出现胰岛素抵抗的时间。; 管纯一马旭夏红飞; 关键词：棕榈酸胰岛素抵抗

低分子肝素对不同氧浓度下早孕绒毛滋养层细胞侵袭力的影响作用被引量：6: 2017年; 目的:研究低分子肝素(LMWH)对不同氧浓度下早孕绒毛滋养层细胞侵袭力的影响。方法:取妊娠8~10周正常绒毛组织,酶消化法分离人早孕绒毛滋养层细胞,分别置2%和20%O_2分压的细胞培养箱培养。用不同浓度LMWH(0、0.1、5、10IU/ml)处理滋养细胞,观察滋养层细胞侵袭力的改变,检测细胞中HIF-1α、MMP-2、MMP-9、TIMP-2、TIMP-3表达。结果:低氧浓度下,早孕绒毛滋养层细胞的侵袭能力随着LMWH浓度(0,0.1,5IU/ml)升高而增强,但高浓度的LMWH(10IU/ml)对其有抑制作用;随着LMWH浓度增加,HIF-1α和MMP-2表达呈先上升后下降的趋势;TIMP-2、TIMP-3表达改变的趋势与MMP-2相同。正常氧浓度下的滋养层细胞,其侵袭能力未见显著增强,各细胞因子的表达无上调。结论:低氧环境下,一定浓度的LMWH可提高早孕绒毛滋养层细胞的侵袭能力,其发生机制可能是通过诱导、增强滋养层细胞HIF-1α和MMP-2基因表达。; 孙平王玉刘媛贾琳班艳丽苏士利; 关键词：低分子肝素细胞侵袭

β-catenin及DDK1在URSA患者的绒毛滋养层细胞和蜕膜组织中表达被引量：1: 2017年; 目的分析β-链蛋白(β-catenin)及重组人Dickkopf相关蛋白1(DDK1)在不明复发性流产(unexplained recurrent spontaneous abortion,URSA)患者的绒毛滋养层细胞和蜕膜组织中表达,为URSA的诊断与治疗提供理论依据。方法以2014年2月~2016年2月,医院收治的URSA患者40例,作为研究对象,入选病例组,另选择同期收治的正常妊娠早期女性40例,纳入对照组。人工流产术后,取蜕膜以及绒毛组织,一部分迅速放入无RNA酶的EP管中,液氮下保存,进行实时定量PCR,免疫组化染色镜下检查,另一部分直接采用4%福尔马林溶液固定,进行蛋白提取与Western blot分析。结果病例组的绒毛组织、蜕膜组织β-catenin蛋白光密度与细胞中β-catenin蛋白表达低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);病例组绒毛组织、蜕膜组织β-catenin蛋白高表达率低于对照组,病例组细胞滋养细胞膜浅黄色着色率低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。病例组绒毛组织、蜕膜组织中的DKK1 m RNA水平分别是对照组的1.84、2.34倍。结论 URSA患者的绒毛滋养层细胞和蜕膜组织中β-catenin蛋白表达显著下降,DDK1 m RNA水平上升。; 陈彩香邹惠娥海莎刘媛玲杨海珍; 关键词：复发性流产绒毛滋养层细胞蜕膜组织 Β-CATENIN

不同阻断剂在人绒毛滋养层细胞中p38MAPK信号传导通路的作用: 2017年; 目的针对三种不同的阻断剂在人绒毛滋养层细胞中p38MAPK信号传导通路的作用进行比较,探讨人绒毛滋养层细胞受阻断剂对其侵袭性的影响程度。方法分别对阻断剂影响EMMPRIN表达的程度采用RT-PCR及Western blot方法分别进行观察。人绒毛滋养层细胞在浓度不同佛波酯作用下,对其中p38MAPK活性变化采用ELISA方法进行检测,人绒毛滋养层细胞侵袭作用采用trans well细胞侵入系统进行检测,将浓度不同的p38MAPK抑制剂加入其中,对阻断剂影响人绒毛滋养层细胞侵袭性的效果进行观察。结果 p38MAPK抑制剂分别由5、10、15及20μmol·L^(-1)浓度持续24h作用后,对EMMPIRN分别达到7.4%、24.5%、31.7%及39.2%的的抑制率;p38MAPK抑制剂10μmol·L^(-1)浓度进行24h培养后,能够对EMM PRIN基因和蛋白表达具有21.5%的抑制率,培养48h与72h可分别达到45.5%和75.9%的抑制率。分别采用佛波酯0.1、1、10μmol·L^(-1)浓度加入培养细胞中持续30min作用,采用时间剂量依赖方式将p38MAPK激活,p38MAPK抑制剂采用时间剂量依赖方式对佛波酯激活p38MAPK进行抑制。结论在人绒毛人绒毛滋养层细胞中EMMPRIN表达中体现出p38MAPK信号传导途径,该通路对于侵袭人绒毛滋养层细胞的行为具有重要作用,p38MAPK抑制剂在防治子痫前期-子痫中将发挥重要作用。; 赵颖; 关键词：P38MAPK 信号传导通路

猪胎盘绒毛滋养层细胞体外原代培养被引量：2: 2017年; 本研究旨在建立一种简便有效的猪胎盘绒毛滋养层细胞体外分离纯化方法。采用胰酶DNase I酶联合消化法消化母猪自然分娩后胎盘绒毛组织,以35%、45%2个Percoll密度梯度法进行猪胎盘绒毛滋养层细胞的分离纯化,并通过观察细胞形态、测定生长曲线、免疫荧光染色、透射电镜等鉴定猪胎盘绒毛滋养层细胞。结果表明,分离培养的猪胎盘绒毛滋养层细胞呈上皮样平铺成片生长,形态为多角形或类圆形,培养48h后部分细胞开始融合成多核合胞体滋养层细胞。免疫荧光染色结果显示,细胞角蛋白7染色阳性占91%以上,表明分离获得的猪胎盘绒毛滋养层细胞纯度较高。透射电镜观察显示,所获细胞具有典型滋养层细胞结构特征。综上表明,采用胰酶DNase I酶联合消化法和35%、45%2个Percoll密度梯度法进行分离纯化,可简便有效地获得较高纯度的猪胎盘绒毛滋养层细胞。; 董书圣田亮颜培实; 关键词：胎盘滋养层细胞原代培养

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