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细菌外膜蛋白BamA突变体构建及位点运动性分析: 2022年; 目的构建细菌外膜β桶状蛋白组装机器(BAM)核心组分BamA点突变原核表达载体,获得特定位点突变BamA蛋白,并分析该蛋白多肽易位相关(POTRA)结构域上G313位点运动特性。方法利用重叠延伸PCR(SOE-PCR)将BamA蛋白第690和700位天然半胱氨酸(C)突变为丝氨酸(S),将POTRA结构域上第313位氨基酸由甘氨酸(G)突为C,构建含BamA-C690S-C700S-G313C突变的原核表达载体pET22b-Strep-BamA。异丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷(IPTG)诱导突变蛋白表达后,利用Strep-Tactin Sepharose柱亲和层析方法对突变体蛋白进行纯化。甲烷硫代磺酸(MTSL)标记所得纯化蛋白的半胱氨酸后,进行电子顺磁共振(EPR)波谱检测,通过EPR波谱拟合获得旋转相关时间τ_(c),分析G313C氨基酸位点的运动特性。结果构建了BamA-C690S-C700S-G313C突变体原核表达载体,实现了突变体蛋白有效表达和纯化。G313C位点EPR波谱为单成分运动状态波谱,其τc值为(2.30±0.03)ns。结论该研究建立了BamA点突变原核表达和蛋白纯化方法,并获得BamA蛋白G313C运动性特征参数,为进一步研究BamA蛋白在外膜蛋白整合过程中的结构机制提供了数据。; 王媛李志慧魏倩董国福储引娣王长振; 关键词：细菌外膜蛋白质类突变运动性

细菌外膜囊泡纳米载体的制备及其免疫调节作用被引量：6: 2017年; 目的:以细菌外膜囊泡(OMV)结合三嵌段聚合物普朗尼克F127(PEO_(100)-PPO_(65)-PEO_(100)),构建能够有效促进巨噬细胞分泌抗肿瘤细胞因子的纳米载药体系OMV-F127。方法:培养减毒沙门菌,用超滤离心法与超声破碎法提取OMV,机械挤压法制得OMV-F127;蛋白质定量试剂盒和SDS-PAGE法检测OMV的蛋白含量和成分;荧光显微镜、透射电镜、动态光散射法检测OMV-F127形态学特征、粒径、电位及其稳定性;以小鼠巨噬细胞RAW246.7为细胞模型,ELISA检测OMV-F127对抗肿瘤细胞因子的分泌作用。结果:两种方法成功提取到减毒沙门菌的OMV,其蛋白质总量分别为2.8 mg/mL和2.7 mg/mL。成功制备OMV-F127且含有OMV的标志蛋白OmpF/C。OMV为纳米级囊泡结构,F127以及OMV-F127为球形纳米颗粒。OMV、F127、OMV-F127颗粒平均直径分别为(72±2)nm、(90±3)nm、(92±2)nm。OMV-F127能促进抗肿瘤细胞因子IL-12、α-TNF、γ干扰素的分泌。结论:基于细菌OMV的纳米载体OMV-F127能够有效促进巨噬细胞分泌抗肿瘤细胞因子,具有免疫调节作用。; 陈琪吴敏白宏震郭则灵周峻王青青汤谷平; 关键词：佐剂细菌外膜蛋白质类药理学巨噬细胞细胞因子类细胞

不同耐药性鲍曼不动杆菌分泌的外膜泡毒力比较被引量：4: 2016年; 目的：比较不同耐药性鲍曼不动杆菌分泌的外膜泡（ OMVs）的毒力。方法提取、纯化4株不同耐药性鲍曼不动杆菌（菌株33、3237、B29和10）分泌的OMVs，BCA法定量后，使用不同浓度的OMVs刺激RAW264．7细胞24 h，CCK-8试剂检测OMVs的细胞毒性，q-PCR法检测细胞因子，包括肿瘤坏死因子（TNF）-α、白细胞介素（IL）-6、IL-1β、角化细胞源性生长因子（KC）和巨噬细胞炎性蛋白2（MIP-2）的表达，并采用单因素方差分析进行统计学比较。结果药敏试验结果显示，菌株10为泛耐药鲍曼不动杆菌（XDRAB），菌株B29为多重耐药鲍曼不动杆菌（MDRAB），而菌株33和3237为非MDRAB。将不同浓度OMVs与RAW264．7细胞共孵育24 h后，细胞存活率随着OMVs浓度增加而降低。其中，菌株10、B29、3237产生的OMVs在5μg／mL时可引起明显的细胞死亡，而菌株33产生的OMVs毒力明显低于其他菌株，在25μg／mL时细胞存活率仍未见明显降低。4株鲍曼不动杆菌分泌的OMVs均能刺激RAW264．7细胞分泌细胞因子TNF-α、IL-6、IL-1β、KC和MIP-2，且随着OMVs浓度增加，细胞因子的表达水平也增加。菌株33分泌的OMVs促炎能力最低，菌株10分泌的OMVs促炎能力最高，且在5μg／mL时，菌株10产生的OMVs促进KC、MIP-2表达的能力急剧上升，明显高于其他菌株（F＝19．094和19．032，P＜0．05或＜0．01）。结论不同耐药性鲍曼不动杆菌分泌的OMVs毒力各不相同，其中泛耐药和多重耐药菌株分泌的OMVs具有较强的细胞毒力以及促炎能力。; 张瑞凌李志涛毕筱刚冼盈王颖谢丹李晓洁吴忠道张扣兴; 关键词：鲍氏不动杆菌细菌外膜蛋白质类毒力

沙眼衣原体多形外膜蛋白PmpI的原核表达、纯化、抗体制备及鉴定: 2016年; 目的：克隆、表达沙眼衣原体多形外膜蛋白I（PmpI）基因，并进行免疫原性鉴定，分析其生物学特征。方法用生物信息软件分析沙眼衣原体多形外膜蛋白PmpI的基因序列并预测PmpI蛋白的B细胞抗原表位。以D型沙眼衣原体DNA为模板，PCR扩增PmpI基因N端90~1464碱基序列，构建原核载体进行诱导表达。Ni离子亲合层析柱纯化重组蛋白，制备PmpI多克隆抗体并用Western印迹法检测其免疫原性。结果对蛋白质的二级结构和柔性区、氨基酸的亲水性、抗原指数和表面可及性预测结果综合分析，推测该蛋白含有8个优势B细胞表位。PCR扩增D型沙眼衣原体PmpI基因核苷酸序列长度为1375 bp。成功构建pET28a-PmpI原核表达重组体，经诱导表达、亲和层析纯化后获得了相对分子质量为50000的重组蛋白并制备其多克隆抗体。结论成功克隆并表达了D型沙眼衣原体多形外膜蛋白N-PmpI，为研究该蛋白的生物学功能奠定了一定基础。; 郭睿刘原君郑蕾王生魏世娟刘全忠; 关键词：沙眼衣原体细菌外膜蛋白质类

烧伤患者中产VIM-2型金属β内酰胺酶鲍氏不动杆菌耐药机制及同源性分析被引量：3: 2015年; 目的探讨我院烧伤患者中产VIM-2型金属β内酰胺酶（MBL）的鲍氏不动杆菌（AB）对碳青霉烯类抗生素的耐药机制及同源性。方法2011年9月-2014年3月，收集从笔者单位收治的烧伤住院患者痰液、尿液、血液、脓液、引流液中分离的400株AB（经鉴定）。采用全自动微生物鉴定及药敏分析系统测定菌株对复方磺胺甲嗯唑、氨曲南等15种抗生素的耐药性。针对抗碳青霉烯类抗生素菌株，采用改良Hodge试验筛选产碳青霉烯酶菌株。PCR法及测序检测产碳青霉烯酶AB的碳青霉烯酶基因、携带blaVIM-2基因的产碳青霉烯酶AB的可移动基因元件1类整合子（Intll）及其保守片段（cs）。针对携带blaVIM-2基因产碳青霉烯酶AB行亚胺培南-乙二胺四乙酸（EDTA）协同试验以及亚胺培南．EDTA与头孢他啶-EDTA增效试验验证其产MBL情况，并分析产VIM-2型MBL的AB的耐药情况。对产VIM-2型MBL的AB行质粒接合试验检测质粒转移情况，PCR法检测外膜蛋白CarO基因。十二烷基硫酸钠．聚丙烯酰胺凝胶电泳检测携带CarO基因的产VIM-2型MBL的AB菌株的CarO蛋白表达量。肠杆菌基因间重复一致序列（ERIC）-PCR法对产VIM-2型MBL的AB菌株进行基因分型，分析同源性。结果（1）400株AB对左氧氟沙星和复方磺胺甲嘿唑的耐药率低。共筛选出381株抗碳青霉烯类抗生素AB，其中240株产碳青霉烯酶。（2）240株产碳青霉烯酶AB中检出18株携带VIM-2酶基因6laVIM-2，占7．5％；133株携带bla TEM-1基因，占55．42％；195株携带blaOXA-23基因，占81．25％；188株携带bla armA基因，占78．33％。（3）18株携带blaVIM-2基因的产碳青霉烯酶AB均携带Intll基因，呈现Intll．VIM连锁携带型，Infll可变区Cs呈现多样性。（4）经验证，18株携带blaVIM-2基因的产碳青霉烯酶AB均为产VIM-2型MBL的AB。该18株AB菌株对复方磺胺甲嘿唑的耐药率最低，其次为左氧氟沙星和头�; 杨喜丽李悦詹剑华郭菲闵定宏王年云李国辉郭光华; 关键词：烧伤鲍氏不动杆菌 Β内酰胺酶类细菌外膜蛋白质类碳青霉烯酶

江西省脑膜炎奈瑟菌分离株分子分型和菌群结构分析被引量：4: 2013年; 目的分析江西省脑膜炎奈瑟菌（Neisseriameningitidis，Nm）分离株的分子分型和菌群结构。方法选取于1976-1987年和2005-2008年在江西省分离自患者、密切接触者和健康人群的123株Nm菌株作为研究对象。采用多位点序列分型（MLST）、外膜蛋白编码基因proAPCR扩增并测序等方法，检测Nm基因型特征及porA的序列特征。使用BioNumerics软件构建最小生成树，分析菌株菌群结构。结果1976-1987年分离67株Nm菌，血清群分布为A群（43株）、B群（18株）、C群（1株）和W135群（5株）；2005-2008年分离56株Nm菌，血清群分布为A群（3株）、B群（7株）、C群（45株）和不可分群（1株）。123株Nm菌株分为40个序列（ST）型，46株A群菌株分为14个ST型，以ST-3型为优势型别，共29株菌，占A群菌株的63．0％（29／46），分离于1976年至1987年，分离自患者（14株）、密切接触者（9株）、健康人群（6株）；46株C群菌株分为5个ST型，以ST-4821为优势型别，共41株，占89．1％（41／46），分离于2005年至2008年，分离白患者（6株）、密切接触者（6株）、健康人群（29株）。123株Nm菌株的porA基因分属于32个不同的型别，包含了24个不同VRI型和22个VR2型。1976—1987年的流行菌株为ST-3型A群Nm，PorA分型为P1．7-1，10，为优势型别，菌株数为18株，占A群Nm的39．1％（18／46），分离自患者（11株）、密切接触者（4株）、健康人群（3株）；2005-2008年的流行菌株为ST-4821型c群Nm，PorA分型2005年以P1．20，9为主，共19株，占ST-4821型c群Nm流行菌株的46．3％（19／41），分离自密切接触者（1株）、健康人群（18株）；2006年开始以P1．7-2，14型为主，共22株，占ST-4821型C群Nm流行菌株53．7％（22／41），分离自患者（6株）、密切接触者（5株）、健康人群（11株）；B群菌株不存在优势序列群，呈多型性特点；W135群菌株5株均为ST-174�; 杨梦周海健袁辉熊长辉徐晓倩陈福辉; 关键词：细菌分型技术细菌外膜蛋白质类

76例耐亚胺培南铜绿假单胞菌B类碳青霉烯酶与耐药现状研究被引量：9: 2013年; 目的调查耐亚胺培南铜绿假单胞菌的耐药现状及其B类碳青霉烯酶和膜孔蛋白基因的存在情况,指导临床合理使用抗菌药物。方法连续收集2012年2月至2012年8月该院临床标本中分离的耐亚胺培南铜绿假单胞菌共76株,采用聚合酶链反应技术(PCR)检测耐亚胺培南铜绿假单胞菌产碳青霉烯酶耐药基因及膜孔蛋白基因情况,并通过药物敏感试验了解耐亚胺培南铜绿假单胞菌耐药特征。结果 76株耐亚胺培南铜绿假单胞菌主要分布在神经外科ICU、神经内科ICU、烧伤科,分别占36.8%、25.0%、13.2%;所检菌株对多黏菌素B敏感,对其余9种抗菌药物均不同程度耐药;50株携带VIM基因,17株携带IMP基因,2株携带SIM基因,膜孔蛋白基因均未检出。结论耐亚胺培南铜绿假单胞菌多药耐药及泛耐药现象严重,其原因可能与多耐药基因表达及膜孔蛋白缺失有关,耐药基因以VIM、IMP为主,应加强耐药性监测,合理使用抗菌药物,防止耐亚胺培南铜绿假单胞菌的蔓延。; 王丽娟李武平史皆然徐修礼刘冰孙慧英马春丽; 关键词：亚胺培南碳青霉烯酶细菌外膜蛋白质类抗药性

B群脑膜炎球菌疫苗开发与临床前评价（待续）被引量：1: 2013年; 脑膜炎球菌（Neisseria meningitidis,Nm）感染可导致流行性脑脊髓膜炎和败血症,有较高的病死率.荚膜多糖及多糖结合疫苗能有效控制A、C、W135和Y群Nm感染,而对B群Nm （MenB）感染的预防,只有外膜囊泡疫苗在局部地区取得成功.目前,针对MenB疫苗的研究以外膜蛋白为基础.此文对MenB疫苗的研发进展及临床前研究中的几个关键评价指标进行综述.; 吴根鹏朱为; 关键词：疫苗细菌外膜蛋白质类

B群脑膜炎球菌疫苗开发与临床前评价（续）: 2013年; 脑膜炎球菌（Neisseria meningitidis,Nm）感染可导致流行性脑脊髓膜炎和败血症,有较高的病死率.荚膜多糖及多糖结合疫苗能有效控制A、C、W135和Y群Nm感染,而对B群Nm （MenB）感染的预防,只有外膜囊泡疫苗在局部地区取得成功.目前,针对MenB疫苗的研究以外膜蛋白为基础.此文对MenB疫苗的研发进展及临床前研究中的几个关键评价指标进行综述.; 吴根鹏朱为; 关键词：疫苗细菌外膜蛋白质类

感染过程中钩端螺旋体外膜蛋白抗原表达水平变化及其调控机制被引量：3: 2013年; 目的:了解感染人巨噬细胞过程中问号钩端螺旋体(简称钩体)黄疸出血群赖型赖株主要外膜蛋白(OMP)抗原表达水平变化及其OmpR相关基因调控机制。方法:采用生物信息学技术预测问号钩体赖株OmpR及其组氨酸激酶(HK)基因和结构功能域。采用实时荧光定量RT-PCR检测钩体感染人THP-1巨噬细胞前后钩体主要OMP编码基因mRNA水平的变化。采用HK胞外区多肽抗血清封闭试验及氯氰碘柳胺阻断试验,检测OmpR及其HK对感染过程中问号钩体OMP编码基因mRNA水平变化的影响。结果:生物信息学分析结果显示,LB015和LB333可能是问号钩体赖株OmpR编码基因,LB014可能是其HK编码基因。问号钩体赖株感染THP-1细胞后,lipL21、lipL32、lipL41基因mRNA水平迅速并持续下降(P<0.01),groEL、mce、loa22、ligB基因mRNA水平瞬时迅速升高(P<0.01)。氯氰碘柳胺或HK抗血清处理可使感染THP-1细胞而显著下降的问号钩体lipL21和lipL48基因mRNA水平明显回升(P<0.01),氯氰碘柳胺处理可使感染THP-1细胞而显著升高的groEL、mce、loa22、ligB基因mRNA水平明显下降(P<0.01)。结论:问号钩体赖株感染人巨噬细胞后主要OMP抗原表达水平发生明显变化。问号钩体赖株染色体中存在一组编码OmpR及其HK的基因,其主要功能可能是下调感染过程中部分OMP抗原表达水平。; 郑林立葛玉梅胡玮琳严杰; 关键词：问号钩端螺旋体细菌外膜蛋白质类逆转录聚合酶链反应外膜蛋白 OMPR

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