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人乳头瘤病毒 16型E6和E7细胞毒 性 T 淋巴细胞 表位 的预测与筛选 2024年 毒 16型(HPV16)E6和E7癌蛋白为靶抗原,通过生物信息学方法及小鼠体内实验,筛选出能被人与鼠主要组织相容性 复合体(MHC)共呈递的细胞毒 性 T 淋巴细胞 (CT L)优势表位 。方法在美国国家生物技术信息中心(NCBI)网站上获取HPV16 E6和E7的参考蛋白序列,通过免疫表位 数据库(IEDB)网站中的MHC-Ⅰ加工和MHC-Ⅰ结合方法,预测出人类白细胞 抗原(HLA)-A*02:01、HLA-A*11:01、HLA-A*24:02限制性 和C57BL/6小鼠H-2b限制性 的CT L表位 ,根据评分筛选出两者共同呈递的CT L表位 。同时,构建表达HPV16 E6和E7的DNA疫苗(pVAX1-E6E7Com),免疫小鼠后分离脾淋巴细胞 ,以预测得到的CT L表位 作为抗原,与小鼠脾淋巴细胞 共培养40 h后,通过酶联免疫斑点法来评估各CT L表位 诱导的特异性 T 细胞 免疫应答的能力。所有实验数据均通过单因素方差分析和Dunnett t检验进行组间比较。结果预测筛选获得10条人鼠共呈递的抗原肽。酶联免疫斑点法检测结果表明,实验组的每种表位 均能诱导小鼠淋巴细胞 产生特异性 免疫应答,与阳性 参考肽(E7-^(49)RAHYNIVT F^(57))相比,实验组中每种表位 差异均无统计学意义(均P>0.05),其中E6-^(38)VYCKQQLL^(45)(175.60±52.88)、E6-^(49)VYDFAFRDL^(57)(202.20±108.50)、E6-^(86)YCYSLYGT T L^(95)(157.00±44.46)和E7-^(77)RT LEDLLMGT L^(87)(162.20±49.35)激发的特异性 斑点数比阳性 参考肽E7-^(49)RAHYNIVT F^(57)(156.20±97.40)的斑点数量多。结论通过这种生物信息学方法预测和筛选得到的10个CT L表位 均具有一定的免疫原性 ,可作为HPV16型治疗性 疫苗的优势候选表位 。关键词：人乳头瘤病毒16型 E6 E7 细胞毒性T淋巴细胞表位 癌-睾丸抗原MAGEC2 HLA-A3限制性 细胞毒 性 T 淋巴细胞 表位 的鉴定 2018年 性 MAGEC2抗原特异性 细胞毒 性 T 细胞 (CT L)表位 肽,为基于超型表位 的MAGEC2治疗提供实验基础及新的候选靶标。方法:通过BIMAS、SYFPEIT HI和IEDB软件预测打分来选取MAGEC2的HLA-A3限制性 表位 ;结合力实验用于检测候选表位 与T 2A3细胞 表面HLA-A3分子的结合能力,ELISPOT 实验检测候选表位 肽诱导的CT L分泌IFN-γ的能力,体外细胞毒 实验检测侯选表位 肽诱导的CT L杀伤靶细胞 的能力。结果 :表位 肽P147、P167、P196、P229和P251具有较好的HLA-A3结合力。ELISPOT 实验结果显示表位 肽P167、P196和P251诱导的CT L具有分泌IFN-γ的能力。细胞毒 实验结果显示表位 肽P196和P251诱导的CT L对靶细胞 有一定的杀伤作用(P<0.05或P<0.01)。结论 :P196和P251有更高的HLA-A3分子亲和力,保留了原有的免疫原性 ,是优秀的MAGEC2抗原的HLA-A3限制性 CT L候选表位 ,可以成为新的抗肿瘤多肽免疫治疗疫苗的候选表位 。关键词：细胞毒性T淋巴细胞 原发性 肝癌高表达抗原GPC-3的HLA-A2限制性 细胞毒 性 T 淋巴细胞 表位 预测 2013年 性 肝癌高表达抗原GPC-3的HLA-A2限制性 细胞毒 性 T 淋巴细胞 (CT L)表位 。方法通过国家生物技术信息中心(NCBI)数据库获取GPC-3蛋白的氨基酸序列,利用超基序、量化基序法和NetCT L数据库预测分析GPC-3的HLA-A2限制性 CT L表位 。结果初步筛选出GPC-3肿瘤抗原的HLA-A2限制性 CT L优势表位 ,分别为GPC-3 102～110,155～163,169～177,229～237,281～289,319～327,326～334,367～375,522～530,564～572。结论预测出GPC-3的HLA-A2限制性 CT L表位 为GPC-3阳性 原发性 肝癌免疫靶向治疗奠定了基础。关键词：原发性肝癌 磷脂酰肌醇蛋白聚糖-3 细胞毒性T淋巴细胞 HBeAg人类白细胞 抗原-A0201限制性 细胞毒 性 T 淋巴细胞 表位 的筛选与鉴定 被引量：1 2013年 细胞 抗原（HLA）-A0201限制性 细胞毒 陛T 淋巴细胞 （CT L）表位 ，为HBeAg表位 的特异l生治疗陛疫苗的开发奠定基础。方法选择中国人群最常见的B基因型中的adw血清型的HBVe基因序列，通过网络在线表位 筛选服务，分析得到分数比较高，而且是一样的表位 ，然后采用量化基序方案、延展基序方案以及超基序方案等通用表位 筛选原则进行进一步的筛选，得到4条较为理想的九肽（HBel，HBe2，HBe3，HBe4）作为候选表位 。随后借助于流式细胞 技术，通过T 2细胞 实验分析各候选肽以及阳性 、阴性 、空白对照的荧光系数，从而对所筛选的表位 进行体外鉴定。结果获得的4个候选表位 （HBel：LLWFHISCL；HBe2：YIM、FGVwI；HBe3：CLT FGRET VlHBe4：DLLDT ASAL）中，HBe2和HBe3的亲和较高lHBel、HBe2和HBe3的稳定f生较好。结论YLVSFGVWI和CLT FGRET V是HBeAg潜在的HLA-A0201限制性 CT L表位 ，有可能作为HBV慢性 感染治疗陛DNA疫苗的候选表位 。关键词：HLA抗原 表位 MAGE-12的HLA-A2限制性 细胞毒 性 T 淋巴细胞 表位 肽的预测及其三维结构构建 2012年 性 细胞毒 性 T 淋巴细胞 (cytotoxic T lymphocyte,CT L)表位 肽并构建其三维结构。【方法】以肿瘤特异性 抗原MAGE-12为研究目标,采用超基序法、量化基序法、多项式法、延展基序法与三维结构构建相结合的CT L表位 预测方法。【结果】预测出的MAGE-12的表位 中有4个符合HLA-A2限制性 CT L表位 要求。【结论】预测出的4个HLA-A2限制性 CT L表位 为MAGE-12的表位 的可能性 较大,经后续实验筛选、鉴定后,可用于基于MAGE-12的肿瘤治疗性 多肽疫苗的设计研究。关键词：肿瘤抗原 MAGE-12 表位 肿瘤转移相关基因1 HLA-A3限制性 细胞毒 性 T 淋巴细胞 表位 的预测与鉴定 被引量：1 2012年 T A1)的HLA-A3限制性 细胞毒 性 T 淋巴细胞 (CT L)表位 。方法:首先运用RT -PCR方法检测MT A1mRNA在肿瘤细胞 系EC-1、EC-109和T -47D中的表达情况。然后通过BIMAS、SY-FPEIT HI、NetCT L1.2及IEDB4个软件预测筛选MT A1HLA-A3限制性 的候选表位 。候选表位 通过标准Fmoc化学法合成,通过结合力实验检测表位 与T 2A3细胞 表面HLA-A3分子的结合力水平,通过体外细胞毒 实验检测候选肽诱导CT L的能力。结果:MT A1mRNA在EC-1、EC-109和T -47D细胞 中均有表达。候选表位 P130与HLA-A3分子有弱结合力,P294、P559与HLA-A3分子有中等结合力。细胞毒 实验结果显示多肽P130、P294和P559对EC-1细胞 均有一定的杀伤作用(F细胞 =176.107,F效靶比=48.306,F交互=35.686,P均<0.001)。结论:多肽P130、P294、P559能够诱导体外抗肿瘤免疫反应,可能成为新的抗肿瘤多肽疫苗的候选表位 。关键词：肿瘤转移相关基因1 细胞毒性T淋巴细胞 前列腺特异性 抗原细胞毒 性 T 淋巴细胞 表位 多抗原肽的抗肿瘤免疫效应研究 被引量：1 2012年 性 抗原(PSA)来源的细胞毒 性 T 淋巴细胞 (CT L)表位 多抗原肽对前列腺癌的抗肿瘤免疫效应。方法:体外分离培养来源于人白细胞 抗原(HLA)-A2.1阳性 的健康志愿者外周血单个核细胞 的成熟树突状细胞 (DC),按单抗原肽组(PSA146-154)、多抗原肽组(PSA146-154-MAP4)、阴性 对照组(人类免疫缺陷病毒 表位 肽HIVpol476-484)培养制备相应的效应细胞 ,以前列腺癌细胞 株LNCaP、DU-145和结肠癌SW480细胞 为靶细胞 ,采用标准4 h51Cr释放试验检测不同效应细胞 /靶细胞 细胞 个数比(效/靶比,10∶1、20∶1、40∶1、80∶1)的特异性 杀伤效应(以特异性 杀伤效率为指标),酶联免疫斑点(ELISPOT )法检测各组效应细胞 分泌γ干扰素(IFN-γ)的CD8+效应细胞 数量。结果:各组效应细胞 对DU-145、SW480细胞 均无特异性 杀伤效应,单抗原肽组和多抗原肽组效应细胞 对LNCaP细胞 具有明显的特异性 杀伤效应,且多抗原肽组强于单抗原肽组,与效/靶比呈正相关。与阴性 对照组比较,单抗原肽组和多抗原肽组分泌IFN-γ的CD8+效应细胞 数量明显增加;与单抗原肽组比较,多抗原肽组分泌CD8+细胞 数量明显增加(P<0.05)。结论:PSA多抗原肽能诱导机体产生强于单抗原肽的PSA特异性 抗肿瘤免疫效应,并可以在一定程度上增强非特异性 的抗肿瘤效果。关键词：前列腺特异性抗原 多抗原肽 抗肿瘤免疫效应 T 细胞 功能学与结构免疫学结合方法鉴定HLA—A2限制性 的细胞毒 性 T 淋巴细胞 表位 富集区2012年 T 细胞 表位 在抗病毒 的T 细胞 免疫中发挥核心作用，目前已在多种病原微生物的蛋白序列上发现存在T 细胞 表位 的聚集现象。本文建立了一套功能学与结构学结合的策略鉴定病原体上细胞毒 性 T 细胞 （Cytotoxic T Lymphocyte，CT L）表位 富集区的方法，并以严重急性 呼吸道综合征（SARS）相关冠状病毒 （SARS．CoV）的M蛋白为例，成功地鉴定了一个HLA—A2限制性 的表位 富集区。首先通过生物信息学的方法预测并合成M蛋白跨膜区的HLA—A2潜在结合多肽，通过体外复性 实验和T 2细胞 结合实验验证多肽与HLA．A2的结合力；然后在HLA—A2．1／Kb转基因小鼠中检测这些多肽的免疫原性 ；最后通过x射线衍射技术，成功解析了其中一条多肽与HLA—A＊0201的复合物结构，其结构显示该多肽具有典型的HLA—A＊0201表位 的结构特点，但却呈现出与以往鉴定多肽不同的构象和锚定残基。本文对于理解机体对SARS—CoV等病原体产生的T 细胞 免疫反应，以及为更广泛的人群设计T 细胞 疫苗具有重要意义。关键词：细胞免疫 主要组织相容性复合物 肿瘤抗原细胞毒 性 T 淋巴细胞 表位 鉴定和多肽疫苗的研究进展 被引量：7 2011年 性 肿瘤是当前威胁人类生命健康的主要疾病之一,尽管手术治疗联合化疗/放疗能够延长患者的生存期,但是这些治疗手段也会损伤正常细胞 ,产生很多不良反应,再加上很多恶性 肿瘤具有侵袭转移和复发等特征,因此,急需发展新的方法来治疗肿瘤患者[1]。关键词：肿瘤抗原 细胞毒性T淋巴细胞 表位 多肽疫苗 妊娠期特异性 beta1糖蛋白9 HLA-A3限制性 细胞毒 性 T 淋巴细胞 表位 的鉴定 被引量：2 2011年 细胞 中特异性 高表达的妊娠期特异性 beta1糖蛋白9(PSG9)的HLA-A3限制性 细胞毒 性 T 淋巴细胞 (CT L)表位 。方法:首先运用RT -PCR方法检测PSG9mRNA在食管癌细胞 EC9706、EC-1及EC-109中的表达情况。然后通过Bimas和Syfpeithi预测,再结合NetCT L1.2选取4条来源于PSG9的HLA-A3限制性 的表位 。候选表位 P336的2位的氨基酸由异亮氨酸替换为亮氨酸,9位的氨基酸由酪氨酸替换为赖氨酸。候选表位 P378的9位氨基酸由精氨酸替换为赖氨酸。候选表位 通过标准的Fmoc化学法合成,通过结合力实验检测表位 与T 2A3细胞 表面HLA-A3分子的结合力水平,通过细胞毒 实验检测对EC-1细胞毒 活性 。结果:PSG9在肿瘤细胞 EC9706、EC-1以及EC-109中都有表达。候选表位 P107、P201和P336-2L9K与HLA-A3分子有弱结合力,P336、P378和P378-9K与HLA-A3分子有中等结合力。细胞毒 实验结果显示P336-2L9K、P378和P378-9K对EC-1细胞 均有一定的杀伤作用。结论:多肽P336-2L9K、P378和P378-9K能诱导体外抗肿瘤免疫反应,有可能成为PSG9阳性 肿瘤细胞 的共同CT L表位 。关键词：细胞毒性T淋巴细胞 表位
