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外膜蛋白CsgG影响禽致病性大肠杆菌生物被膜形成被引量：1: 2025年; 【背景】禽致病性大肠杆菌(avian pathogenic Escherichia coli,APEC)能够引起禽类气囊炎、心包炎等症状,严重制约养禽业的健康发展。同时,APEC与人类肠道外致病性大肠杆菌(extraintestinal pathogenic Escherichia coli,ExPEC)具有相似的毒力因子,严重威胁公共卫生。APEC形成生物被膜可抵抗抗生素杀伤及逃避宿主免疫。因此,探究APEC生物被膜形成的关键基因和调控机制,对于防控APEC具有重要的理论和实践意义。【目的】探讨外膜蛋白CsgG在APEC生物被膜形成中的作用,揭示APEC生物被膜形成的分子机制,为禽大肠杆菌病的防治提供理论基础。【方法】利用Red同源重组技术构建的csgG基因缺失株ΔcsgG及其互补株CΔcsgG,分析了csgG对APEC生长、运动能力、膜通透性、胞外多糖(extracellular polysaccharides,EPS)产量及生物被膜形成能力的影响。【结果】csgG的缺失并不影响APEC的生长和细胞膜的通透性,但增强了APEC的运动性。csgG的缺失显著降低了APEC生物被膜形成能力,扫描电子显微镜观察发现缺失株生物被膜细菌组成由多层变为单层,细菌间黏附减少。激光扫描共聚焦显微镜观察发现csgG的缺失导致生物被膜结构松散,黏附的细菌数量减少,同时发现csgG缺失显著降低APEC的EPS产量。实时荧光定量PCR分析显示,csgG的缺失导致与生物被膜形成相关基因的转录水平显著降低。【结论】CsgG在APEC生物被膜形成过程中起着关键作用,严重影响生物被膜结构的完整性。; 彭浩恒林子竹胡剑刚张贝贝郭伟奇王欣宇王芷洋祁晶晶田明星鲍衍清李海花王少辉; 关键词：禽致病性大肠杆菌生物被膜胞外多糖

江苏省、山东省和安徽省禽致病性大肠杆菌的分子流行病学调查: 2025年; 为了探明江苏省、山东省和安徽省鸡源禽致病性大肠杆菌(APEC)的分子流行病学特征,本试验于2023年从三省部分规模化鸡养殖场采集鸡粪便、鸡毛蛋、鸡卵黄以及病死鸡的鸡腿、骨髓、关节、心脏、脾脏、肺脏和肠道内容物样品共918份,使用选择性培养基分离APEC;利用微量肉汤稀释法测定分离菌株对常用抗菌药物的敏感性;基于全基因组测序分析分离菌株的耐药基因和毒力基因携带情况;通过多位点序列分型(MLST分型)、菌体(O)抗原分型和系统发育树分析分离菌株的主要流行特征。结果显示,共分离获得390株APEC,分离率为42.48%;分离菌株对氨苄西林(91.03%,355/390)、头孢噻呋(82.82%,323/390)、庆大霉素(81.03%,316/390)和四环素(77.95%,304/390)的耐药率较高,对美罗培南(0.51%,2/390)和黏菌素(3.08%,12/390)比较敏感,耐药基因以blaEC(98.97%,386/390)、blaTEM(80.00%,312/390)、aph(6)-Id(54.10%,211/390)、erm(D)(98.46%,384/390)、tet(A)(81.79%,319/390)和floR(63.33%,247/390)为主;毒力基因分析发现,所有分离菌株至少含有4种毒力基因。共鉴定出68种血清型,其中优势血清型为O78(11.03%,43/390)、O180(7.95%,31/390)和O15(7.18%,28/390),MLST共鉴定出71种ST型,主要的ST型为ST117(15.90%,62/390)、ST155(8.46%,33/390)和ST162(8.21%,32/390);系统发育树结果显示,分离菌株共分为4个进化分支,不同省份鸡养殖场分离菌株之间的遗传进化关系相距较远。结果表明,江苏省、山东省和安徽省鸡源APEC的流行血清型为O78、O180和O15,主要流行ST型为ST117,携带的耐药基因和毒力基因较多,鸡养殖场应当继续加强APEC的流行病学监测。; 邵立志吉星孙利厂朱树娇王佳芸何涛王冉杨章平; 关键词：耐药基因毒力基因血清型流行病学调查

Tol-Pal系统tolQ基因对禽致病性大肠杆菌生物学特性及毒力的影响: 2025年; 本研究利用Red同源重组系统和互补质粒构建禽致病性大肠杆菌(avian pathogenic Escherichia coli,APEC)菌株APCE50的tolQ基因缺失株ΔtolQ和互补株CΔtolQ,以探究tolQ基因对APEC生物学特性以及对细菌致病性的影响。对APCE50、ΔtolQ和CΔtolQ的生长曲线、运动能力、形态特征、生物被膜形成能力、酸碱耐受性、抗血清杀菌、细胞黏附侵袭能力及毒力进行了比较分析。结果显示,ΔtolQ与APCE50、CΔtolQ的生长速度无明显差异,但ΔtolQ的运动能力下降并影响细菌形态。缺失tolQ基因导致APEC生物被膜形成能力、酸碱耐受性及抗血清杀菌能力显著降低。细胞及动物感染试验结果显示,tolQ基因缺失显著降低了APEC的黏附侵袭能力和毒力。综上表明,tolQ基因在APEC运动能力、生物被膜形成、耐受性及致病性方面发挥作用,这为阐明APEC的环境适应性、生存能力及致病机制提供了参考。; 李双阳张贝贝胡剑刚王欣宇祁晶晶田明星鲍衍清石玉祥王少辉; 关键词：禽致病性大肠杆菌生物学特性毒力

禽致病性大肠杆菌HlyE蛋白的免疫原性研究被引量：2: 2024年; 为评估禽致病性大肠杆菌(APEC)溶血素HlyE蛋白的免疫原性,本研究对APEC溶血素HlyE蛋白进行原核表达和纯化,并对表达的重组蛋白进行SDS-PAGE和western blot分析,将纯化蛋白利用透析袋在4℃透析后,利用血琼脂平板对其溶血活性进行检测。SDS-PAGE和western blot结果显示,表达并纯化到分子量约为36 ku的重组HlyE蛋白(rHlyE),经ND-2000超微量核酸蛋白测定仪测定纯化后蛋白浓度为0.65 mg/mL;溶血活性检测结果显示,rHlyE具有溶血活性。以透析后的rHlyE作为抗原,按照50μg/只的剂量免疫小鼠,对照组于相同时间点注射等量PBS,共免疫3次间隔14 d,并于首免后不同时间采血,采用间接ELISA方法检测两组小鼠血清特异性抗体水平,并于三免后18 d以2 LD_(50)的APEC菌液攻毒小鼠,观察7 d内小鼠的死亡情况;于首免后28 d剖杀各组小鼠取其脾脏制备脾淋巴细胞,采用流式细胞术分别检测CD3^(+)、CD4^(+)、CD8^(+)T淋巴细胞亚型比率,对rHlyE的免疫原性进行评估。间接ELISA检测结果显示,该蛋白能够诱导机体产生体液免疫应答,分泌高表达量的IgG抗体,抗体水平于三免后15 d达到最高水平。rHlyE免疫攻毒保护试验结果显示,免疫组小鼠基本无明显临床症状,7 d内存活率达80%;而对照组小鼠表现明显临床症状,于攻毒后3 d内全部死亡。流式细胞术结果显示,与对照组相比,免疫组小鼠的CD3^(+)、CD4^(+)和CD8^(+)T淋巴细胞亚型比率均升高。上述结果表明,rHlyE在大肠杆菌BL21中为部分可溶性表达,将其免疫小鼠后可诱导小鼠产生较高水平的体液免疫应答,并且可对小鼠产生较好的免疫保护效果。本研究明确了APEC HlyE蛋白的免疫原性,为APEC免疫保护蛋白的筛选以及疫苗研发提供了借鉴与参考。; 张春晓王利丽赵奇孙欣艺侯冠欣刘畅史秋梅吴同垒张志强; 关键词：禽致病性大肠杆菌溶血活性免疫原性流式细胞术

一例禽致病性大肠杆菌的分离鉴定及耐药分析: 2024年; 为了探明河南地区白羽肉鸡养殖场肉鸡大量发病死亡原因,采用细菌平板划线法对病鸡病料进行细菌分离纯化,经LB琼脂平板与伊红美蓝鉴别性琼脂平板划线培养,得到形状均匀、大小一致的菌落。PCR与生化试验鉴定结果显示,该菌株为禽致病性大肠杆菌。采用药敏纸片法试验测定常见抗生素药物敏感性,结果显示该菌株对氨苄西林、阿莫西林、土霉素、哌拉西林、四环素、庆大霉素耐药,对恩诺沙星、氟苯尼考、阿米卡星和新霉素敏感,对左氧氟沙星、氯霉素、卡那霉素和金霉素中等耐药。; 刘晓娟; 关键词：禽致病性大肠杆菌生化鉴定耐药性

禽致病性大肠杆菌高效裂解性噬菌体的筛选与初步应用: 大肠杆菌(Escherichia coli,E.coli)所引发的疾病在人类和动物中频发,尤其在家禽养殖业中,发病率和死亡率的持续上升造成了巨额经济损失。抗生素的滥用加剧了细菌的耐药性,并促进了耐药性菌株的遗传演化,使得...; 周琳娜; 关键词：禽致病性大肠杆菌噬菌体基因组分析

湖南省部分地区禽致病性大肠杆菌分离鉴定及生物特性分析被引量：1: 2024年; 为探究湖南省禽致病性大肠杆菌的生物特性,从部分地区规模肉鸡场采集122份病死鸡临床肝脏样品,采用传统细菌培养方法进行分离培养和初步鉴定,利用大肠杆菌持家基因phoA进行PCR扩增,对纯化鉴定后的分离株进行血清型鉴定、种系发育群检测、多位点序列分型(MLST)、毒力基因检测、动物致病性试验及耐药性分析。结果显示:共分离出83株禽致病性大肠杆菌,鉴定出15种血清型,其中O2、O1、O78、O14为优势血清型,种系发育群分为B2、B1、A和D群,高致病性株主要来自B2、B1群;MLST分析共得到12种ST型,其中ST95、ST481、ST350为主要ST型;分离株irp2、fyuA、iutA、fimC毒力基因携带率为100%,其中38.55%菌株同时携带irp2、afa、fyuA、iutA、hlyF、iss、papC、fimC毒力基因;雏鸡致病性试验检出高致病性菌株46株(55.42%)、中等致病性菌株31株(37.35%)、低等致病性菌株6株(7.23%);分离株对10种常用抗生素有不同程度耐药,其中对四环素和新生霉素耐药最严重,耐药率分别为96.38%和92.77%。结果表明,湖南省禽致病性大肠杆菌遗传关系整体复杂多态,且致病性较高,耐药广泛,提示该地区应加强对禽大肠杆菌病的防控。; 刘伯承燕海峰罗阳王慧杨俊陈一峰周望平; 关键词：禽致病性大肠杆菌血清型毒力基因 MLST 耐药性

双组份系统调控禽致病性大肠杆菌生物被膜的研究进展: 2024年; 禽致病性大肠杆菌是一种典型的肠道外致病性大肠杆菌,能够引起各种肠道外疾病,给禽类养殖业造成重大的经济损失。生物被膜作为一种保护细菌的物理屏障用于抵御抗生素的损伤及逃避宿主的免疫系统,从而导致宿主持续和反复性感染。双组份系统是普遍存在于各类细菌中主要的信号传导系统,参与调控细菌抗生素耐药性和生物被膜的形成。为了解由生物被膜造成的禽致病性大肠杆菌感染机制,文章详述了生物被膜的形成过程,并综述了双组份系统调控生物被膜形成的分子机制,以期探寻阻断双组份系统信号转导的新方法以破坏生物被膜的形成作为控制禽致病性大肠杆菌感染的治疗策略,从而为防治由生物被膜引起的抗生素耐药性以及持续或反复性感染提供研究方向。; 于鲁敏王香菲王依洁徐仰慧刘若晗王晓哲; 关键词：禽致病性大肠杆菌生物被膜

蛋鸡禽致病性大肠杆菌分离鉴定及噬菌体制剂体外杀菌研究被引量：1: 2024年; 为研究噬菌体制剂对蛋鸡禽致病性大肠杆菌病的治疗效果,从某蛋鸡养殖场采集疑似禽致病性大肠杆菌感染的病料,进行病原的分离鉴定、生物学特性分析和药物敏感试验等操作,选择其中代表性菌株开展噬菌体制剂体外杀菌试验。结果可见有深紫黑色且带金属光泽细菌生长;镜检可见呈红色两端钝圆的短杆菌;生化鉴定,符合大肠杆菌的生化特性;PCR检测和序列分析结果表明为大肠杆菌。累计从152份样品中分离到大肠杆菌49株,药敏试验结果显示49株分离菌对环丙沙星、阿莫西林、头孢他啶、强力霉素、复方新诺明、林可霉素等耐药率分别高达89.8%、89.8%、93.6%、98.0%、85.7%、100%,临床耐药情况严重。选用5株代表性菌株开展噬菌体制剂体外杀菌试验,与氟苯尼考相比,噬菌体制剂体外杀菌效果更优。复合噬菌体制剂可用于蛋鸡禽致病性大肠杆菌病的治疗。; 刘亮; 关键词：蛋鸡禽致病性大肠杆菌

糖基转移酶WekM参与禽致病性大肠杆菌脂多糖合成和环境适应: 2024年; 【目的】研究O_(1)血清型禽致病性大肠杆菌(avian pathogenic Escherichia coli,APEC)的O抗原糖基转移酶WekM在脂多糖合成和环境适应中的作用。【方法】采用Red同源重组方法,构建APEC O_(1)菌株的wekM基因缺失株,并构建wekM回补株。随后分析wekM基因对APEC O_(1)菌株生长和运动能力的影响,通过银染和Western blotting鉴定细菌脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)图谱以及与兔抗O_(1)血清的反应能力,通过实时荧光定量PCR测定细菌鞭毛相关基因转录水平,使用溴化乙锭测定细菌细胞膜通透性。最后,通过药敏试验检测细菌对环丙沙星等抗生素敏感性。【结果】PCR验证及DNA测序结果表明ΔwekM缺失株和回补株构建成功。银染鉴定ΔwekM缺失株较野生株LPS图谱不完整,部分O-抗原条带缺失;同时,Western blotting检测未见到ΔwekM与O因子血清的反应条带,这说明O-抗原糖基转移酶wekM基因缺失后影响LPS合成。生长运动能力分析显示,ΔwekM缺失株的运动能力较野生株显著减弱,生长速率与野生株一致。实时荧光定量PCR检测发现,ΔwekM缺失株的flgC等鞭毛相关基因转录水平降低,表明wekM基因影响细菌鞭毛的合成。此外,ΔwekM的细胞膜通透性较野生株显著增加(P<0.01),药敏结果也显示,ΔwekM缺失株较野生株对多黏菌素等7种抗生素敏感性增加,这说明wekM缺失后细菌细胞膜理化性质改变,适应环境的能力降低。【结论】本研究揭示了禽致病性大肠杆菌糖基转移酶wekM基因缺失导致细菌LPS完整性受损,运动能力降低,鞭毛合成受阻,鞭毛形成基因转录水平下降,细胞膜通透性增强,对抗生素敏感性增加。这些结果为解析wekM基因的功能奠定了研究基础,有助于深入了解禽致病性大肠杆菌O_(1)的环境适应机制。; 曹启予高宇杰张晓荟陈歆丹罗平翟瑞东韩先干宋厚辉程昌勇于纪棉韩月; 关键词：脂多糖 O-抗原糖基转移酶环境适应

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