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小鼠SGK1基因真核表达载体的构建及鉴定: 2025年; 目的:构建含有小鼠血清和糖皮质激素诱导激酶(SGK)1基因的真核表达载体pcDNA3.1-MYC-SGK1-mcherry,并观察载体在转染HEK293细胞后的表达情况。方法:PCR法扩增SGK1目的基因片段,并与经过HindⅢ和SbfⅠ双酶切的pcDNA3.1-MYC-C-mcherry载体连接。酶切和测序验证成功后,采用脂质体转染法将pcDNA3.1-MYC-SGK1-mcherry转染至HEK293细胞中,Western blotting法测定HEK293细胞中真核表达载体的表达情况。结果:酶切载体条带位于5200 bp,目的基因条带位于3100 bp,与预期结果相符。Snap Gene软件比对,pcDNA3.1-MYC-SGK1-mcherry的测序结果与预期序列一致,表明真核表达载体pcDNA3.1-MYC-SGK1-mcherry构建成功。Western blotting法观察到转染后的HEK293细胞在相对分子质量49000附近显现出明显的条带,真核表达载体pcDNA3.1-MYC-SGK1-mcherry成功表达。结论:成功构建真核表达载体pcDNA3.1-MYC-SGK1-mcherry,为后续研究SGK1基因对小鼠受精卵细胞早期发育的作用机制奠定了基础。; 张丽娜巴隆孟峻; 关键词：真核表达载体 HEK293细胞

脑心肌炎病毒VP22A基因真核表达载体的构建: 2025年; 为构建脑心肌炎病毒VP2 2A基因真核表达载体。参考EMCV毒株基因组序列,设计VP2 2A基因特异性引物,PCR扩增VP22A基因目的片段,双酶切目的基因和pc DNA3.1-Flag质粒产生相同的黏性末端,使用T4 DNA连接酶连接相同的黏性末端,连接产物转化至DH5α感受态细胞,菌液PCR鉴定阳性单克隆菌落,对阳性单克隆提取重组质粒并双酶切进行验证,对阳性重组质粒进行测序。重组质粒双酶切和测序结果表明,pc DNA3.1-Flag-VP2和pc DNA3.1-Flag-2A真核表达载体构建成功。; 邵帅邵帅刘明启李琼毅; 关键词：脑心肌炎病毒 VP2基因真核表达载体

MAVS全长及其截短体真核表达载体的构建和鉴定: 2025年; 建立线粒体抗病毒蛋白(mitochondrial antiviral-signaling protein,MAVS)全长及截短体的真核表达载体,并检测其在HEK293细胞中的表达,为后续探索MAVS在病毒逃逸机制研究中的作用提供重要的实验材料。首先,根据NCBI数据库中人源MAVS的全长序列,设计截短体引物,通过PCR从cDNA模板中扩增出MAVS全长及不同截短体的基因片段,并将其克隆到pcDNA3.1-3xflag载体中。随后,将构建好的载体转染到HEK-293细胞中,利用RT-PCR技术检测扩增产物大小,与目的大小进行对比,用Western blot技术检测MAVS蛋白在293细胞中的表达情况。结果表明,成功构建了全长MAVS(MAVS-FL)及其截短体MAVS-△C、MAVS-△CP、MAVS-PBD、MAVS-△Tm的真核表达载体,Western blot结果表明,构建的载体蛋白在HEK-293中能够有效表达。本研究成功构建了MAVS全长及其截短体的真核表达载体,并在HEK-293细胞中表达了这些蛋白,为后续研究MAVS蛋白的功能和抗病毒机制提供了实验材料。; 玉妹毕冬琳郑天倚李琼毅; 关键词：真核表达载体蛋白表达

鸡TXNRD1基因真核表达载体的构建、组织表达和功能研究: 2025年; 为了探究硫氧还蛋白还原酶1(thioredoxin reductase1,TXNRD1)基因对鸡肝细胞脂类代谢相关基因表达的影响,试验以鸡的肝脏和脂肪组织cDNA为模板,PCR扩增鸡TXNRD1基因编码序列(CDS),测序鉴定后用生物信息学分析编码蛋白及其特性,构建鸡TXNRD1基因的真核表达载体,将其转染鸡肝癌细胞系(LMH)后对表达产物用Western-blot鉴定,采用实时荧光定量PCR检测LMH细胞中过表达TXNRD1基因对脂类代谢相关基因表达的影响,以及鸡不同组织TXNRD1基因的表达情况。结果表明:获得了鸡TXNRD1基因1497 bp的CDS片段,共编码499个氨基酸;该蛋白分子量为54818.7 u,理论等电点pI为6.03,不稳定系数为34.60(<40),为稳定蛋白,平均亲水性为-0.168(<0),为亲水蛋白质;构建真核重组表达载体gga-TXNRD1/pCMV-3Tag-9在LMH细胞中成功融合,并表达鸡TXNRD1-MYC;在LMH中过表达TXNRD1基因后LPL基因表达量显著下降(P<0.05),FASN基因表达量显著上升(P<0.05);TXNRD1基因在小肠、肾脏中表达量较高,在肝脏、腿肌、腺胃、胸肌表达量较低。说明TXNRD1基因对鸡肝脏脂类的合成具有促进作用。; 徐庶勋魏志恒姜新城刘世昊吴文平王倚兰邵芳顾志良; 关键词：真核表达载体

从江香猪DDX6基因克隆、组织表达分析及真核表达蛋白鉴定: 2025年; 本研究克隆了从江香猪DDX6(DEAD-Box Polypeptide 6,DDX6)基因CDS区序列,对其进行生物信息学分析和组织表达分析,并构建真核表达载体,鉴定其表达与细胞定位,为研究DDX6在抗病毒免疫应答中的作用奠定基础。结果表明:成功克隆了从江香猪DDX6基因CDS区,从江香猪DDX6基因CDS区序列全长1452 bp,编码483个氨基酸。DDX6蛋白为可溶性蛋白,不存在跨膜结构,拥有多个糖基化修饰位点。DDX6在从江香猪的心脏、肝脏和脾脏等组织中均有表达。DDX6在淋巴结的表达量显著高于其余组织,在骨骼肌的表达量则相对最低。DDX6在猪肺泡巨噬细胞传代细胞系(PAM-CD163)中主要定位于细胞质,重组蛋白Myc-DDX6具有良好的反应原性。以上试验结果为进一步探究DDX6基因的生物学功能奠定基础。; 赵静邓乔木胡璇王怡然杨洪兴温贵兰李波; 关键词：从江香猪生物信息学真核表达载体

马山黑山羊MAPK8基因克隆、生物信息学分析及真核表达载体构建: 2025年; [目的]克隆马山黑山羊丝裂原活化蛋白激酶8(mitogen-activated protein kinase 8,MAPK8)基因序列,并对该基因进行生物信息学分析,构建其真核表达载体,为山羊乳腺发育及MAPK8基因在转分化过程中的研究提供试验材料。[方法]参考山羊MAPK8基因序列(GenBank登录号:XM_018042429.1)设计引物,利用PCR扩增马山黑山羊MAPK8基因CDS序列并克隆;分别使用DNAStar和Mega 11.0软件进行序列比对及系统进化树构建,并利用ProtParam、ProtScale等软件进行生物信息学分析;构建真核表达载体并进行慢病毒包装后收集病毒液上清,感染马山黑山羊成纤维细胞,并通过实时荧光定量PCR检测感染病毒组和对照组MAPK8基因表达水平。[结果]马山黑山羊MAPK8基因CDS区全长1 155 bp,编码384个氨基酸,蛋白分子质量为43.98 ku,分子式为C_(1968)H_(3114)N_(528)O_(569)S_(22),等电点(pI)为7.13。相似性比对结果显示,马山黑山羊与不同物种间MAPK8基因氨基酸序列相似性均高于85%,表明MAPK8氨基酸序列较为保守。系统进化树显示,马山黑山羊MAPK8基因氨基酸序列与牛的亲缘关系最近,与斑马鱼的亲缘关系最远。马山黑山羊MAPK8蛋白为亲水性,不属于跨膜蛋白,主要分布在细胞质(52.2%)、线粒体(26.1%)、细胞核(17.4%)和细胞膜(4.3%)中,含有丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶催化结构域(第26―321位氨基酸处)。MAPK8蛋白二级结构包括无规则卷曲、α-螺旋、β-转角和延伸链。互作蛋白预测显示,MAPK8蛋白可能与MAPK9、JUN、TP53、FOS、JUNB、MAP2K4、MAP2K7、MAPK8IP1和NFATC3蛋白存在互作。试验成功构建MAPK8基因慢病毒真核表达载体pCDH-CMV-MAPK8-mchery-Puro,转染马山黑山羊成纤维细胞后产生红色荧光信号,试验组细胞内MAPK8基因表达量极显著高于对照组(P<0.01)。[结论]本研究成功克隆了马山黑山羊MAPK8基因CDS序列,并构建了pCDH-CMV-MAPK8-mchery-Puro真核表达载体,为山羊MAPK8基因功能及应用�; 雷志刚潘宏张丹丹刘权辉孙哲邓珊黄奔; 关键词：生物信息学真核表达

牛源IFI6基因的克隆及其蛋白生物信息学分析与真核表达载体构建: 2025年; 为构建牛源IFI6基因真核表达载体,试验采用RT-PCR方法扩增牛肾细胞(MDBK)的IFI6基因,对其蛋白的理化性质、蛋白亲/疏水性、信号肽、跨膜结构域、二/三级结构进行预测分析,并构建牛源IFI6基因真核表达载体pEGFP-N1-IFI6。结果:牛源IFI6基因开放读码框序列长度为405 bp,编码134个氨基酸,蛋白分子质量为32425.61 u,等电点为5.20,不稳定系数为57.75(>40),属于不稳定疏水性蛋白质,存在信号肽和跨膜结构域;Eco RⅠ、Bam HⅠ双酶切的pEGFP-N1-IFI6重组质粒扩增出4700、405 bp条带,分别与pEGFP-N1、IFI6基因相符。结论:pEGFP-N1-IFI6真核表达载体构建成功,可为家畜的抗病毒研究奠定基础。; 肖芳嵇辛勤; 关键词：生物信息学分析表达载体构建

鸡CTCF基因真核表达载体的构建及其对脂类代谢作用的研究: 2025年; CCCTC结合因子(CCCTC-binding factor,CTCF)是一种多功能且高度保守的转录调节因子,参与转录调控、染色质结构维护、细胞分化等多种生物学过程.本研究通过RT-qPCR检测CTCF基因在鸡不同组织中的表达量,发现CTCF在脑和心脏中高表达.构建的CTCF真核过表达载体转染鸡肝癌细胞系LMH(Leghorn Male Hepatoma,LMH)后,成功表达CTCF-Myc融合蛋白.油红O染色和比色法检测显示,过表达CTCF后,LMH细胞脂滴沉积和总甘油三酯(TG)显著增加(P<0.01),磷脂酸磷酸酶1(LIPIN1)基因表达下调(P<0.01),固醇调节元件结合蛋白1(SREBP1)、脂肪酸合酶(FASN)和乙酰辅酶A羧化酶α(ACACA)基因表达显著上调(P<0.05或P<0.01).结果表明,CTCF基因可能通过调控脂质代谢相关基因表达促进脂质沉积.; 夏磊魏志恒裴军刘世昊周博徐璐郁建锋顾志良

基于真核表达塞内卡病毒A VP2蛋白的间接ELISA检测方法: 2025年; 为建立检测塞内卡病毒A(SVA)抗体的间接酶联免疫吸附试验(ELISA),本试验利用昆虫杆状病毒表达系统表达SVA的主要结构蛋白和保护性抗原VP2,通过间接免疫荧光试验(IFA)验证VP2的免疫反应性,并使用氨基三乙酸镍(NiNTA)树脂亲和纯化重组VP2蛋白。以纯化的VP2蛋白为包被抗原,利用棋盘滴定法确定最优的抗原包被浓度和待检血清稀释度,通过优化反应条件和确定临界值,建立了检测SVA抗体的间接ELISA检测方法,并评估了其特异性、敏感性、重复性及与IFA的检测符合率。结果显示,重组VP2蛋白在杆状病毒感染的Sf9细胞内呈现可溶性表达,能够被SVA VP2特异性单克隆抗体2F5识别;经Ni-NTA纯化后,获得了分子量约31 kDa的重组VP2蛋白;间接ELISA的最佳抗原包被浓度为2μg/mL,最佳血清稀释度为1∶100,最佳酶标二抗稀释度为1∶10000;阴阳性临界值为0.287;与口蹄疫病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪流行性腹泻病毒、猪丁型冠状病毒、伪狂犬病毒和猪圆环病毒2型抗血清无交叉反应;批内与批间变异系数均低于10%。利用建立的间接ELISA检测了实验室保存的52份猪血清样本,与IFA的检测符合率为96.15%(50/52)。综上,本试验间接ELISA的成功建立为SVA抗体检测和流行病学调查提供了有力工具。; 裴宗飞于凯蓝安欣娜陈俊雯张永宁; 关键词：VP2蛋白昆虫杆状病毒表达系统间接ELISA

具有免疫抑制作用非洲猪瘟病毒蛋白真核表达载体的构建方法及应用: 本发明公开了具有免疫抑制作用非洲猪瘟病毒蛋白真核表达载体的构建方法及应用，涉及病毒编码蛋白表达及功能研究生物技术领域。本发明以非洲猪瘟病毒基因组作为模板,采用特异性引物进行PCR扩增，回收PCR片段后与pcDNA3.1载...; 钱琨贺文文秦爱建丁天邵红霞许默儒

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