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一种登革3型病毒E蛋白在293F细胞中的高分泌表达方法: 本发明涉及一种登革3型病毒E蛋白在293F细胞中的高分泌表达方法，所述表达方法包括的质粒优化步骤中，优化后的质粒序列为SEQ ID NO.2。所述优化后的质粒序列添加在pSectag2A载体的Kpn1和Not1两个酶切位...; 孙强明索家乐闫玲梅潘玥吴正存

登革3型病毒E蛋白亚单位疫苗的制备及评价以及E蛋白二聚体表达初试: 【目的】:登革热是目前世界上最流行的虫媒疾病之一,在我国不同省份每年都有不同程度的爆发,为我国社会及经济带来巨大负担。尽管目前针对登革病毒已有了大量的研究,但还没有针对登革热的特效抗病毒药物,接种疫苗以预防登革病毒感染仍...; 索家乐; 关键词：登革病毒包膜蛋白亚单位疫苗二聚体

云南省登革3型病毒全基因组序列特征研究被引量：7: 2018年; 为阐明云南省2013年和2016年登革3型病毒（DENV-3）流行株的全基因组分子进化特征及流行病学特点。采用C6/36细胞培养法从登革热患者血清中分离病毒,用RT-PCR法扩增新分离DENV-3的全基因组序列,采用ClastalX1.83和MEGA6等生物信息学软件进行核苷酸和氨基酸同源性及系统进化分析。结果从云南省本地登革热患者血清中分离到10株DENV-3,其中西双版纳州2013年5株（简称版纳分离株）,德宏州瑞丽市2016年5株（简称瑞丽分离株）。经RT-PCR和序列测定,获得这10株DENV-3的全基因组序列（10 707nt）,其开放读码框（95~10 265）编码3 389个氨基酸。基于全基因组或各种结构蛋白和非结构蛋白基因的系统进化分析表明,版纳分离株均为基因II型（genotype-II）,瑞丽分离株均为基因I型（genotype-I）,并各自高度聚集为同一进化群并与东南亚流行株具有较近亲缘关系。版纳分离株间和瑞丽分离株间的全基因组核苷酸（氨基酸）同源性分别为99.75%~99.91%（99.40%~99.91%）和99.21%~99.68%（98.78%~99.57%）,并与DENV-3原型株（H87）的核苷酸（氨基酸）同源性分别为94.21%~94.34%（97.88%~98.14%）和93.81%~93.98%（97.12%~97.67%）。与H87株比较,本次云南分离株结构蛋白和非结构蛋白分别存在26和63个氨基酸位点的改变。本研究证实,云南省西双版纳州2013年流行的DENV-3为基因II型,瑞丽市2016年流行的DENV-3为基因I型,它们的传播来源分别为老挝和缅甸北部边境地区。本次云南DENV-3分离株与H87株间存在明显差异,但决定病毒抗原性和毒力的关键位点未见明显变化。; 胡挺松张海林刘永华范建华邓波尹小雄李鸿斌李萍朱进杨召兰张富强范泉水; 关键词：全基因组系统进化分析同源性分析

2001-2016年广州市登革3型病毒E基因序列及系统进化树分析被引量：2: 2018年; 目的了解2001-2016年广州市登革3型病毒的流行情况,掌握毒株的进化情况和趋势。方法将登革热确诊病例的血清用荧光PCR检测,阳性血清用C6/36细胞进行病毒分离,测定分离毒株的E基因序列,与NCBI的毒株序列相比较,利用Mega 4.0软件构建系统进化树。结果 2001-2016年共分离到登革3型病毒24株,从基因型上分类属于基因亚型Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ和Ⅴ型,基因亚型Ⅲ在流行年份和分离毒株数上稍占优势。流行病学调查和序列分析均显示与东南亚国家流行的登革热相关度较高。结论广州市登革3型病毒以输入为主,随着输入压力增大、基因亚型增多和转换,可能会使广州市登革热流行传播更为复杂,流行风险进一步增高。; 刘远蒋力云景钦隆苏文哲蔡文锋狄飚杨智聪; 关键词：登革3型病毒 E基因系统进化树

中国广西登革3型病毒分离株基因组序列特征分析被引量：2: 2014年; 目的对我国广西登革3型病毒分离株桂登-1株(GD-1株)和桂登-11株(GD-11株)进行全基因组序列测定和分析,为了解其地理来源提供依据。方法根据GenBank提交的登革3型病毒基因序列设计9对引物,RT-PCR方法分段扩增GD-1和GD-11株基因序列,测序后进行拼接,得到其全基因组序列。结果两株病毒全长均为10 707nt,与国际参考株H87株核苷酸同源性为96.0%,氨基酸同源性为98.8%。GD-1株和GD-11株间仅有4个氨基酸差异,二者与H87株分别存在39和41个氨基酸差异。对3'UTR二级结构进行预测,二者与H87株存在较大差异。根据E蛋白基因序列对两株病毒进行进化分析,GD-1和GD-11均属于亚型Ⅱ,与分离自泰国的两毒株进化关系较近。结论 GD-1和GD-11均属于登革3型病毒亚型Ⅱ,二者可能是源自泰国的病原。; 陈柠俞永新徐宏山刘欣玉贾丽丽董关木李玉华; 关键词：登革3型病毒进化树

登革3型病毒感染人脑微血管内皮细胞的机制研究: 一、研究背景和目的登革病毒是黄病毒科黄病毒属的单股正链RNA病毒,由11kb的核酸编码衣壳蛋白C,前膜蛋白prM和包膜蛋白E等3种结构蛋白以及7种非结构蛋白（NS1,NS2A,NS2B,NS3,NS4A,NS4B...; 周旋; 关键词：登革3型病毒脑微血管内皮细胞血脑屏障细胞因子白细胞粘附

登革3型病毒义乌流行株免疫原性研究(英文)被引量：1: 2012年; 目的对2009年浙江省义乌市暴发流行的登革3型病毒进行系统进化分析并初步研究其E蛋白的免疫原性。方法 RT-PCR扩增义乌分离株全基因组,利用MEGA 4分别构建E及NS1区域核苷酸及氨基酸系统发生树,进行系统进化分析。构建重组质粒JESS-ywD3prM/E397JEV-pcDNA5,IFA及Western Blot检测E蛋白在293T细胞中的表达及分泌情况。将纯化后的分泌性E蛋白免疫BALB/c小鼠,通过ELISA、中和试验等方法对体液免疫进行测定。结果登革3型病毒义乌分离株与广州GZ1D3株及印度GWL-25株核苷酸及氨基酸序列同源性均达到99%以上;其分泌性E蛋白可以刺激小鼠产生登革特异性IgG抗体及针对同型病毒的中和抗体。结论义乌分离株属于登革3型病毒亚型Ⅲ,其分泌性E蛋白具有一定的免疫原性。; 顾雯金聪张硕张全福李建东杭小同王芹李川梁米芳李德新; 关键词：登革3型病毒生物学特性

登革3型病毒义乌流行株免疫原性研究被引量：1: 2011年; 目的对2009年浙江省义乌市暴发流行的登革3型病毒进行系统进化分析并初步研究其E蛋白的免疫原性。方法 RT-PCR扩增义乌分离株全基因组,利用MEGA 4分别构建E及NS1区域核苷酸及氨基酸系统发生树,进行系统进化分析。构建重组质粒JESS-ywD3prM/E397JEV-pcDNA5,IFA及Western Blot检测E蛋白在293T细胞中的表达及分泌情况。将纯化后的分泌性E蛋白免疫BALB/c小鼠,通过ELISA、中和试验等方法对体液免疫进行测定。结果登革3型病毒义乌分离株与广州GZ1D3株及印度GWL-25株核苷酸及氨基酸序列同源性均达到99%以上;其分泌性E蛋白可以刺激小鼠产生登革特异性IgG抗体及针对同型病毒的中和抗体。结论义乌分离株属于登革3型病毒亚型Ⅲ,其分泌性E蛋白具有一定的免疫原性。; 顾雯金聪张硕张全福李建东杭小同王芹李川梁米芳李德新; 关键词：登革3型病毒生物学特性

我国登革3型病毒2009年义乌流行株生物学特性研究: 登革病毒(Dengue viruses, DENV)是一类严重危害人类健康的虫媒病毒,包括四个血清型(DENV1～4),该病毒主要通过伊蚊叮咬传播。据统计,全世界有超过25亿人处于登革病毒的威胁之中,登革病毒感染已经成为...; 顾雯; 关键词：登革病毒病毒样颗粒生物学特性

广州市2009年新出现登革3型病毒的分子流行病学分析被引量：7: 2010年; 目的对广州市2009年新出现的3型登革病毒（DEN）株的E基因进行RT-PCR扩增和序列测定,探讨其来源及基因型.方法收集广州市2009年登革热患者急性期血清,用C6/36细胞培养分离DEN,RT-PCR扩增病毒全长E基因,测序并绘制系统进化树,结合流行病学资料进行分子流行病学分析.结果 2009年采集的19份患者血清标本中,分离到7株3型DEN株,RT-PCR扩增后测序获得E基因序列,7株DEN3病毒E基因均由1479个碱基组成,编码493个氨基酸,基因序列未见插入或缺失,分析发现7株病毒来自两个不同的亚型：09/GZ/1081、09/GZ/1483和09/GZ/10806属于东南亚/南太平洋型,09/GZ/10616、09/GZ/11144、09/GZ/11194和09/GZ/13105属于印度次大陆型,各亚型群内毒株序列同源性较高.结论广州市2009年DEN3为输入性,分属两个基因型.; 狄飚白志军王玉林罗雷陈妤蒋力云杨智聪王鸣; 关键词：登革病毒 E基因系统进化树

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