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牛流行热病毒云南流行毒株G基因遗传多样性分析: 2024年; 为调查云南大理州一处奶牛养殖小区BEFV的感染情况及其流行毒株G基因的遗传多样性。对该大理州奶牛养殖小区的10份疑似病例,参考GenBank中牛流行热病毒的G基因序列,设计并合成2对特异性扩增G基因,测序并完成序列分析。同时,采60份血清样本进行抗体检测。结果显示,对10份疑似BEF病牛全血样的检测结果,6份呈BEFV核酸阳性。去除重复序列,获得4株牛流行热病毒云南流行株G基因扩增、测序,序列全长均为1872 bp,编码623 aa。4株毒株之间组内核苷酸序列相似性为99.7%~99.9%,遗传进化分析与亚洲毒株聚为一类,并独自为一个细小分支。与泰国2017年分离TH-NP0065毒株和中国的毒株关系最近。与我国疫苗株JB76H的氨基酸同源性比较,发现7个氨基酸突变位点,为K^(53)→N^(53)、K^(62)→R^(62)、P^(183)→S^(183)、G^(263)→E^(263)、K^(461)→E^(461)、K^(457)→R^(457)、I^(475)→M^(475)。除中和抗原位点G1外,G2、G3、G4均出现变异位点。抗体检测试剂盒检测结果,抗体浓度≥52.5 ng/L临界值的样品有19份,阳性率为31.67%。综上所述,该奶牛养殖小区存在BEFV的感染,且流行株G基因存在多位点变异。; 彭海芬王国君段新慧刘丽仙杨莎莎张以芳李文贵; 关键词：牛流行热病毒 G基因

基于牛流行热病毒G蛋白的免疫胶体金检测方法的建立被引量：1: 2024年; 【目的】建立牛流行热病毒(Bovine ephemeral fever virus,BEFV)的免疫胶体金检测方法,为牛流行热(BEF)诊断提供研究基础。【方法】构建原核表达载体pET32a-BEFV-G,将其转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞进行表达,对诱导成功后的表达产物进行纯化和SDS-PAGE、Western blotting鉴定。以纯化后的蛋白作为特异性抗原包被检测线,以链球菌G蛋白作为金标抗原,与金纳米颗粒结合后标记在金标垫上,用羊抗鼠IgG作为质控线,通过优化不同的反应条件,建立检测BEFV的免疫胶体金检测方法,并对试纸条进行敏感性、特异性和重复性检测。【结果】SDS-PAGE结果显示,在IPTG终浓度为0.75 mmol/L时,37℃诱导8 h的条件下重组BEFV G蛋白表达量最大,且以包涵体形式表达,分子质量约为46 ku。Western blotting结果显示,浓缩纯化后的重组BEFV G蛋白具有较好的反应原性,可作为包被抗原用于免疫胶体金试纸条的建立。在质控线包被的抗体羊抗鼠IgG浓度为2 mg/mL,BEFV G蛋白包被浓度为0.6 mg/mL,喷金量为2.5μL/cm的条件下,3~5 min就可完成检测。制备的试纸条有较高的敏感性和特异性,血清稀释倍数为40倍的时候显色接近消线,且试纸条仅与BEFV阳性血清发生显色反应,与牛冠状病毒(BCoV)、牛轮状病毒(BRV)、牛传染性鼻气管炎病毒(IBRV)等其他病毒阳性血清均无交叉反应,阳性血清样本重复性试验证明试纸条的重复性较高,成功建立了免疫胶体金检测方法。【结论】本研究以原核表达的G蛋白为抗原成功制备了检测BEFV的新型免疫胶体金试纸条,该检测试纸条特异性强、稳定性好,适合用于临床快速检测BEF。; 王雪妍靳双媛杜家伟温宏武李永琴许立华; 关键词：G蛋白原核表达蛋白纯化免疫胶体金

疑似牛流行热病毒及细菌混合感染病例诊治: 2023年; 为了解牛流行热病毒及细菌混合感染情况以及治疗方案,该文采集疑似发病奶牛鼻腔棉拭子进行细菌分离鉴定、药物敏感试验、牛流行热病毒RT-PCR检测和基因测序。结果表明,发病奶牛混合感染牛流行热病毒、绿脓杆菌和大肠杆菌,这在临床中极少见。通过药敏试验,选择灵敏的抗生素治疗,发现发病牛治疗中使用庆大霉素、安普霉素等效果较好。可见,感染牛流行热病毒的牛只可能同时感染其他细菌,通过选择合适的抗生素进行治疗可取得较好的效果。; 蔺晓月李玉杰陈峰张月王贵升; 关键词：奶牛牛流行热

牛流行热病毒的诊断及其G1蛋白的原核表达: 牛流行热(Bovine ephemeral fever,BEF)是一种由牛流行热病毒(Bovine ephemeral fever virus,BEFV)引发，通过节肢动物传播的急性、热性传染病，临床症状以呼吸道症状为主...; 石亚楠; 关键词：牛流行热病毒原核表达

牛流行热病毒鉴别诊断抗原的筛选及间接ELISA方法的建立: 牛流行热（bovine ephemeral fever，BEF）是由牛流行热病毒（bovine ephemeral fever virus，BEFV）引起的一种牛的急性热性传染病，是一种重要的虫媒病毒病。临床上主要表现为...; 何辰香; 关键词：牛流行热病毒蛋白筛选间接ELISA法

奶牛牛流行热病毒和阴沟肠杆菌混合感染的诊断与分析: 2023年; 牛流行热又叫三日热或暂时热,是由牛流行热病毒引起牛的急性热性传染病,该病特点是发病快、突然高热,同时伴有流泪、流涎、流鼻汁、呼吸困难和跛行等[1]。阴沟肠杆菌广泛存在于人和动物的粪便、水、泥土、植物等自然界中,是一种条件致病菌,可引起人的皮肤软组织、泌尿道和呼吸道感染以及败血症等[2]。2022年7月,区内某奶牛场发生一起急性死亡病例,经流行病学调查、症状观察、细菌分离和病毒PCR检测等实验室诊断,确定为牛流行热病毒和阴沟肠杆菌混合感染。; 黄红妹陶立吴翠兰兰美益凌丹黄丘明李常挺; 关键词：牛流行热病毒热性传染病条件致病菌呼吸道感染细菌分离

一种双荧光素酶标记的牛流行热病毒蛋白复合物及应用: 本发明属于分子生物学技术领域，具体涉及一种双荧光素酶标记的牛流行热病毒蛋白复合物及其在牛流行热病毒感染抗体与疫苗抗体检测中的应用。本发明所述蛋白复合物包含萤火虫荧光素酶标记的牛流行热病毒P蛋白和海肾荧光素酶标记的GNS‑...; 高闪电何辰香田占成独军政关贵全殷宏

广东省牛流行热病毒分离株JM 2020的全基因组测序及进化分析: 2023年; [目的]分析广东省牛流行热病毒(Bovine ephemeral fever virus,BEFV)分离株JM 2020与其他地区毒株的进化关系,阐明遗传进化与全基因组的特征,为中国乃至世界对牛流行热疾病的流行情况以及预防该疾病提供有用信息。[方法]根据从GenBank下载的BEFV毒株的全基因组序列信息,设计引物PCR扩增糖蛋白(Glycoprotein,G)基因;另设计10对引物用于扩增全基因组,送测序得到10个片段的基因序列,运用DNAStar软件中的EditSeq手动编辑和拼接获得全基因组序列。运用MEGA 6.0分别构建G基因和全基因组进化树进行进化分析。[结果]JM 2020毒株的G基因和全基因组与泰国毒株的核苷酸序列相似性均最高,分别为94.9%~99.3%和99.0%,进化分析表明JM 2020与2013—2017年泰国毒株处于同一小分支,而与JB76H、JT02L等国内毒株有一定进化距离。全基因组测序结果表明,JM 2020全基因组长度为14 902个核苷酸(nt),包括50 nt的前导序列,1 296 nt的核蛋白(Nucleoprotein,N)基因,837 nt的磷蛋白(Phosphoprotein,P)基因,672nt的基质蛋白(Matrixprotein,M)基因,1 872 nt的G基因,1 812 nt的非结构糖蛋白II (Non-structural glycoprotein II,GNS)基因,618 nt的α1、α2基因,444 nt的β基因,345 nt的γ基因,444 nt的RNA依赖性聚合酶(Large multi-functional enzyme,L)基因和73 nt的尾随序列,且分别被21、47、68、67、23、64、59、79和35nt的区域隔开。JM 2020、qy2017及泰国毒株均出现P′基因(P基因多顺反子产物)截断的特征。[结论]JM2020毒株与2017年分离毒株qy2017序列相似性高且均与泰国毒株进化关系较近,与JB76H等我国其他地区毒株有一定进化距离。该研究丰富了中国BEFV流行株的基因组信息,为牛流行热疫病综合防控及开发新疫苗奠定了基础。; 贾荣荣汪祥斌贾坤; 关键词：牛流行热病毒 G基因进化分析全基因组序列分析

基于G_(NS)蛋白的牛流行热病毒感染与免疫鉴别诊断ELISA方法的建立: 2023年; 旨在建立牛流行热病毒(BEFV)感染与疫苗免疫的抗体ELISA诊断方法。在证实BEFV G_(NS)截短体与BEFV感染血清特异性反应的基础上,利用原核表达系统表达纯化G_(NS)全长蛋白并以其作为包被抗原,优化反应条件,建立基于BEFV G_(NS)的鉴别病毒感染与疫苗免疫的BEFV间接ELISA方法。结果显示:在大肠杆菌中成功表达G_(NS)蛋白,主要以包涵体的形式存在,纯化获得73 ku的重组蛋白。Western blot结果显示,纯化后的重组蛋白与BEFV感染牛血清反应原性良好,且与BEF疫苗免疫牛血清未见反应。G_(NS)抗原最佳包被浓度为0.50μg·mL^(-1),血清最佳稀释度为1∶20,酶标二抗最佳稀释度为1∶4000,阴阳性临界值为S/P值0.2069。该方法与BVDV、FMDV以及IBRV阳性血清无交叉反应,特异性良好;批内和批间变异系数均小于10%,重复性良好,可用于BEFV感染与疫苗免疫牛的鉴别诊断。; 何辰香高闪电田占成独军政王锦明关贵全殷宏; 关键词：牛流行热牛流行热病毒

一种牛流行热病毒蛋白复合物及在牛流行热病毒自然感染抗体检测中的应用: 本发明属于分子生物学技术领域，具体涉及一种牛流行热病毒蛋白复合物及其在制备牛流行热病毒自然感染抗体检测试剂盒中的应用。首先，本发明意外发现，牛流行热病毒GNS‑N端蛋白、GNS‑C端蛋白、α2蛋白、α3蛋白、β蛋白作为抗...; 高闪电何辰香田占成独军政刘军龙王锦明关贵全刘光远罗建勋殷宏

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