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蜂毒PLA2原核表达及溶血 作用 研究 2024年 作用 ,诱发溶血 。本研究旨在通过原核系统表达并纯化出蜂毒磷脂酶A2(BvPLA2)蛋白,并通过溶血 试验对比蜂毒(bee venom,BV)、蜂毒肽(melittin)以及BvP⁃LA2的溶血 效果。[方法]将已构建好的pET28a-BvPLA2融合表达载体转化到大肠杆菌BL21菌株中并通过IPTG低温诱导蛋白表达,对表达产物进行鉴定并纯化获得重组BvPLA2蛋白。采集小鼠眼球全血与生理盐水等体积混合配制成2%的红细胞混悬液,加入不同浓度的BvPLA2蛋白液、蜂毒液及蜂毒肽,通过酶标仪测定溶血 率。[结果]经IPTG诱导后的表达产物在约15 kDa的分子量处呈现清晰的条带,与理论推算值一致。超声破碎后在上清及沉淀中均表达出特异性条带,且上清中的表达量与沉淀表达量基本一致。不同浓度的BvPLA2蛋白液均具有溶血 效果,溶血 率均超过5%,且低浓度BvPLA2溶血 率较高。经对比得出,BvPLA2溶血 率显著低于蜂毒和蜂毒肽(P<0.05)。[结论]通过原核表达系统成功诱导并纯化出可溶性目标蛋白BvPLA2,且BvPLA2具有一定的溶血 效果,但溶血 效果显著低于蜂毒和蜂毒肽。关键词：蜂毒 磷脂酶A2 原核表达 溶血性 有机酸消毒液和聚维酮碘溶液的体外溶血 作用 分析 被引量：1 2020年 溶血 作用 ,评价其潜在溶血 风险,为动物临床用药安全性提供参考。采用紫外分光光度计法,以大白兔红细胞为实验对象,分别评价聚维酮碘溶液和有机酸消毒液体外溶血 作用 。聚维酮碘溶液质量浓度为5%(有效碘浓度为5.0 g/L)时,溶血 率为1.364%,L50/DI值为151.71%,表明该产品在原液使用时无溶血 作用 且无刺激性。有机酸消毒液质量浓度为2%(总酸量浓度为20.0g/L)时,溶血 率为4.896%,L50/DI值为185.95%,表明该产品在3倍稀释使用时无溶血 作用 且无刺激性。有机酸消毒液和聚维酮碘溶液按照使用说明浓度使用时,其溶血 率分别为1.364%和4.896%,表明两种兽用消毒剂按照使用说明正常使用时无溶血 作用 或溶血 作用 非常弱,临床使用时潜在溶血 风险较小。关键词：有机酸 聚维酮碘 溶血作用 紫外分光光度 黑水虻幼虫抗菌肽粗提物敏感肿瘤细胞株筛选及溶血 作用 研究 被引量：5 2020年 溶血 作用 。方法采用断头取血法收集幼虫血淋巴细胞制作黑水虻幼虫抗菌肽粗提物。体外培养结肠癌细胞株(HCT-8)、肺腺癌细胞株(A549)、宫颈癌细胞株(HeLa)和卵巢癌细胞株(SKOV3) 4株癌细胞,绘制生长曲线。采用CCK-8法检测不同浓度的黑水虻幼虫抗菌肽粗提物对4株癌细胞的增殖抑制率,初步筛选出对黑水虻幼虫抗菌肽粗提物的敏感癌细胞株,并利用CCK-8法研究黑水虻幼虫抗菌肽粗提物对正常人胚肾细胞株(HEK293)的毒性及黑水虻幼虫抗菌肽粗提物对红细胞的溶血 作用 。结果细胞均在体外培养24 h后进入对数生长期,选取培养24 h的细胞进行传代及后续实验。不同浓度的黑水虻抗菌肽粗提物对HCT-8、A549、SKOV3、HeLa 4种细胞均有一定的抑制作用 (P <0.05),且随着浓度的增加,抑制率逐渐升高,其中400 mg/L浓度下的黑水虻抗菌肽粗提物对细胞的抑制率最大。在400 mg/L浓度下,黑水虻抗菌肽粗提物对HCT-8、A549、SKOV3、HeLa以及HEK293 5种细胞的抑制率不同(P <0.05),其中对HCT-8的抑制率最高,对HEK293的抑制率最差;黑水虻抗菌肽粗提物浓度为400 mg/L时对HCT-8细胞的抑制率高于5-氟尿嘧啶(P <0.05);抗菌肽粗提物的浓度分别为31.25、62.5、125、250、500 mg/L时的溶血 率分别为(0.16±0.11)%、(0.20±0.12)%、(0.95±0.04)%、(1.09±0.16)%、(1.60±0.18)%,溶血 率均低于5%。结论黑水虻幼虫抗菌肽粗提物对HCT-8细胞较为敏感,且对正常细胞无毒、对红细胞不溶血 ,预示在结肠癌药物的研发中具有良好的前景。关键词：抗菌肽 抑制率 溶血率 两种含氮类大豆苷元衍生物对人体红细胞的抗溶血 作用 （英文） 2019年 作用 。实验结果表明,大豆苷元衍生物在生理pH条件下的抗氧化活性优于维生素C,特别是在清除羟自由基和抑制人血红细胞溶血 方面,大豆苷元衍生物抗氧化能力表现更为突出。大豆苷元衍生物的羟自由基清除活性IC50值是维生素C的104倍。关键词：抗氧化 厚朴总酚对金黄色葡萄球菌的抑菌作用 及抗溶血 作用 被引量：9 2018年 溶血 试验、蛋白质免疫印迹试验、荧光定量PCR试验和LDH释放试验从不同层次和角度验证了厚朴总酚对金黄色葡萄球菌致病力的影响。结果显示,厚朴总酚对金黄色葡萄球菌具有一定的抗菌活性,其对金黄色葡萄球菌最小抑菌浓度范围为8~16μg·mL-1。另外,本研究结果表明亚抑菌浓度的厚朴总酚可抑制α-溶血 素的表达从而降低金黄色葡萄球菌的致病力,并可明显缓解金黄色葡萄球菌α-溶血 素介导的细胞的损伤作用 。关键词：乳房炎 金黄色葡萄球菌 双黄连注射液和双黄连冻干粉针剂对家兔离体红细胞溶血 作用 的影响 2017年 溶血 作用 的影响。方法健康家兔心脏取血20 ml,制备2%红细胞混悬液,分别与双黄连注射液、双黄连冻干粉针剂、0.9%氯化钠注射液共同温育,进行体外溶血 试验,并通过分光光度计检测其吸光度,观察3 h内红细胞的溶血 率。结果浓度为0.06、0.12、0.18、0.24、0.3 g/ml的双黄连注射液的溶血 率分别为8.39%、21.34%、40.98%、50.36%、67.68%,与0.9%氯化钠注射液组相比,差异有统计学意义(P<0.05)。浓度为0.06、0.12、0.18、0.24、0.3 g/ml双黄连冻干粉针剂的溶血 率为2.15%、5.23%、7.31%、9.59%、13.35%,在浓度为0.3 g/ml时与0.9%氯化钠注射液组相比,差异有统计学意义(P<0.05)。在浓度为0.12、0.18、0.24、0.3 g/ml时,双黄连注射液与双黄连冻干粉针剂组的溶血 率相比,差异有统计学意义(P<0.05)。结论双黄连粉针剂与双黄连注射液相比,对家兔离体红细胞溶血 作用 小。关键词：双黄连注射液 溶血试验 金银花与山银花的体外溶血 作用 分析 被引量：9 2017年 溶血 作用 ,评价其潜在溶血 风险。方法:以皂苷单体化合物、金银花有效部位及金银花、山银花药材等为实验材料,采用紫外分光光度法测定各类样品在不同浓度时对兔血红细胞的溶血 率,绘制溶血 率-质量浓度曲线。结果:忍冬苦苷A,忍冬苦苷B,灰毡毛忍冬皂苷甲,川续断皂苷乙和川续断皂苷Ⅵ在质量浓度≤1.0 g·L^(-1)时均未发生溶血 。灰毡毛忍冬皂苷乙的溶血 率随着质量浓度的升高而增大,当质量浓度≤0.6 g·L^(-1)时未发生溶血 ;当质量浓度为0.8 g·L^(-1)时,溶血 率上升至11.7%;当质量浓度为1.0 g·L^(-1)时,溶血 率达到50.4%。金银花各有效部位溶血 作用 的相对强弱为金银花总皂苷部位>总酚部位>总环烯醚萜部位。其中,金银花总环烯醚萜部位在质量浓度为0.1~1.2 g·L^(-1)时未发生溶血 ;金银花总酚部位质量浓度<1.0 g·L^(-1)时,未发生溶血 。金银花总皂苷部位在质量浓度为0.6 g·L^(-1)时开始溶血 ,之后随着质量浓度的升高,其溶血 率急剧增大,当质量浓度为1.2 g·L^(-1)时,溶血 率55.3%。金银花野生品、栽培品与山银花的溶血 率-质量浓度曲线较为相似,其溶血 率急剧增大的质量浓度为2.0~4.0 g·L^(-1)。结论:金银花与山银花的溶血 作用 无显著性差异;各种皂苷单体化合物没有溶血 作用 或溶血 作用 较弱;金银花总皂苷部位的质量浓度为0.6 g·L^(-1)(相当于生药质量浓度20 g·L^(-1))时具有较弱的溶血 作用 。尽管如此,中药注射液一般不会达到如此高的药物浓度。因此,含有皂苷类成分的金银花与山银花可应用于中药注射剂,其潜在的溶血 风险较小。关键词：金银花 山银花 溶血作用 总酚 七叶一枝花和滇重楼提取物的制备、表征及其体外溶血 作用 分析 被引量：8 2017年 溶血 作用 强弱,探讨不同结构类型重楼皂苷的溶血 作用 特点。方法:采用75%乙醇对七叶一枝花和滇重楼根茎进行提取,采用大孔吸附树脂对各类物质进行富集,采用快速制备色谱技术对目标组分群进行定向制备,基于对照品对照和在线紫外吸收光谱对总取物、部位和组分进行化学信息表征,采用分光光度法测定各样品的溶血 率。结果:根据质量浓度-溶血 率曲线计算七叶一枝花和滇重楼总提物的50%溶血 浓度分别为34.97,46.52 mg·L^(-1)。在2.5~10 mg·L^(-1)时,七叶一枝花部位中仅有70%乙醇洗脱部位(PPC-D)显示了较强溶血 作用 ,滇重楼部位中70%乙醇和95%乙醇洗脱部位(PPY-D和PPY-E)均显示溶血 作用 。5.0,10 mg·L^(-1)时PPC-D的溶血 率分别为78.00%和95.68%,PPY-D(PPY-E)的溶血 率分别为31.86%和63.29%(15.82%和55.25%)。在2.5~5.0 mg·L^(-1)时,七叶一枝花的组分呋甾皂苷和薯蓣皂苷未显示溶血 作用 ,偏诺皂苷组分在质量浓度为2.5,5.0 mg·L^(-1)的溶血 率分别为5.89%和90.33%;滇重楼的呋甾皂苷组分同样未显示溶血 作用 ,偏诺皂苷(薯蓣皂苷)组分在质量浓度为2.5,5.0 mg·L^(-1)的溶血 率分别为0.51%和57.75%(4.29%和49.39%)。结论:七叶一枝花和滇重楼均具有溶血 作用 ,其中七叶一枝花强于滇重楼;七叶一枝花溶血 成分群主要为偏诺皂苷类,滇重楼溶血 成分群为偏诺皂苷和薯蓣皂苷;两者呋甾皂苷均无溶血 作用 ;总提物溶血 作用 强弱主要由其中所含偏诺皂苷和薯蓣皂苷类成分的绝对含量和相对比例来决定。关键词：七叶一枝花 滇重楼 呋甾皂苷 溶血作用 大孔树脂 猪链球菌2型对红细胞的黏附及溶血 作用 被引量：1 2017年 作用 时间的黏附率,real-time PCR检测SS2相关黏附因子溶菌酶释放蛋白(MRP)、荚膜多糖(CPS)、甘油醛-3-磷酸脱氢酶(GAPDH)、纤连蛋白和纤维蛋白结合蛋白(FBPS)及溶血 因子溶血 素(Sly)的转录水平。结果显示,SS2感染后第0.5~1小时,其主要黏附RBC,细胞呈现棘突样病变,少量细胞肿胀,出现轻微溶血 ,黏附率分别为18.7%和46.3%;感染后第1.5小时,SS2不仅可以黏附RBC,且多数细胞溶血 ,RBC开始发生破裂,黏附率可达到91.7%;感染后第2小时,细胞几乎全部破裂。MRP和CPS2J转录水平在感染后第0.5~1小时增高,并与黏附率呈正相关,感染后第2小时表达水平下降;Sly转录水平在感染后第0.5~2小时持续增加,与溶血 现象呈正相关;GAPDH和FBPS在感染过程中变化不显著(P>0.05)。结果表明,SS2感染早期可对RBC产生黏附和溶血 作用 ,先为黏附作用 ,后为溶血 作用 ,且作用 过程较快;主要参与黏附因子为MRP和CPS2J,溶血 因子为Sly;GAPDH和FBPS是否参与SS2对RBC的黏附与溶血 仍需证实;本试验结果为研究SS2传播和致病机制提供了重要的理论依据。关键词：猪链球菌2型 红细胞 溶血 多种方法综合评价有色注射液盐酸多柔比星的体外溶血 作用 被引量：2 2017年 溶血 性评价,需采用多种方法综合评价有色注射液盐酸多柔比星的体外溶血 作用 ,为临床用药安全性提供参考。方法采用常规家兔红细胞为实验对象,盐酸多柔比星溶液高、低质量浓度为4.0、2.0 mg/m L,分别采用血球计数法、酶标仪直接比色法和间接比色法综合评价注射用盐酸多柔比星的体外溶血 作用 。结果 3种不同测定方法的评价结果一致:盐酸多柔比星溶液4.0 mg/m L质量浓度下各管溶血 率均远远大于5%,即发生严重溶血 ;2.0 mg/m L质量浓度下仅加样0.1 m L管(按试管中药物浓度折算该管相当于0.4 mg/m L药物浓度下加样0.5 m L)无溶血 发生,其他各管溶血 率均远远大于5%,即发生严重溶血 。结论临床直接将2.0 mg/m L的盐酸多柔比星溶液进行静脉推注发生溶血 的可能性较大,建议将盐酸多柔比星溶液适当稀释后(终质量浓度不超过0.4mg/m L)静脉给药安全性更好。关键词：溶血 酶标仪 比色法
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