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移植前供受者混合 淋巴细胞 反应 后转录组测序预测重度急性移植物抗宿主病 本文分为以下几个部分进行探讨: 第一部分 移植前供受者混合 淋巴细胞 反应 后转录组测序预测重度急性移植物抗宿主病 研究背景: 异基因造血干细胞 移植(allo-HSCT)是目前治疗多种恶性血液病和非恶性血液病的重要方法,... 刘佳关键词:急性移植物抗宿主病 混合淋巴细胞反应 转录组测序 PDL_1Ig基因修饰的恒河猴肝细胞 在混合 淋巴细胞 反应 中的效应研究 被引量:1 2015年 目的探讨恒河猴来源的PDL1Ig在体外混合 淋巴细胞 反应 中的作用。方法在Gen Bank中检索到恒河猴目的基因PDL1和Ig G1Fc的序列,采用重叠延伸PCR法合成该目的基因,与p GEM-T连接转化感受态E.coli TOP10,经鉴定得到PDL1Ig基因,p Shuttle-CMV线性化后连接目的基因转化感受态E.coli TOP10,克隆p Shuttle-CMV/PDL1Ig重组穿梭质粒。将p Ad Easy-1和线性p Shuttle-CMV/PDL1Ig共电转至BJ5183细胞 中同源重组,构建重组腺病毒载体p Ad Easy-1/PDL1Ig骨架,以脂质体2000将p Ad Easy-1/PDL1Ig转染至293细胞 中包装成有活性的重组腺病毒。感染恒河猴肝细胞 ,RT-PCR和Western blotting检测目的基因的表达。混合 淋巴细胞 反应 (MLR)测定其生物学活性。结果成功构建了PDL1Ig重组腺病毒载体,能感染恒河猴肝细胞 ,RT-PCR和Western blotting检测有目的基因表达,在混合 淋巴细胞 反应 中其能抑制T细胞 增殖。结论成功构建了p Ad Easy-1/PDL1Ig重组腺病毒载体,其可在恒河猴肝细胞 中高效表达,该重组蛋白可在体外通过PD-1/PDL1通路抑制T淋巴细胞 增殖。 李鹏 张玉毅 李恒平 丁正华 王毅 赵云 邓仲鸣关键词:腺病毒载体 混合淋巴细胞反应 MG132诱导HL-60细胞 表达共刺激分子CD86及其对混合 淋巴细胞 反应 的影响(英文) 2014年 本研究探讨蛋白酶体抑制剂MG132诱导HL-60细胞 表达共刺激分子CD80、CD86及其对混合 淋巴细胞 反应 的作用。流式细胞 仪检测MG132诱导HL-60细胞 表达共刺激分子CD80、CD86及细胞 活力;逆转录聚合酶链反应 (RT-PCR)分析CD80和CD86 mRNA表达情况;MG132诱导HL-60细胞 表达共刺激分子CD86后,用75 Gy Co-60照射HL-60细胞 ,杀死HL-60细胞 ,保留抗原性作为刺激细胞 ,用健康人外周血单个核细胞 作为反应 细胞 ,用不同浓度HL-60细胞 刺激健康人单个核细胞 ,HL-60细胞 对健康人单个核细胞 的增殖作用。结果表明:MG132上调HL-60细胞 表达CD86,MG132诱导HL-60细胞 的凋亡率呈浓度依耐性和时间依耐性。结论:高浓度的MG132对HL-60细胞 有直接杀灭作用,低浓度MG132诱导HL-60细胞 表达共刺激分子CD86,对健康人单个核细胞 有增殖作用。MG132诱导HL-60细胞 表达共刺激分子CD86,能促进健康人单个核细胞 的增殖。 余美霞 刘迅 周咏明 程艳香 程静 邱宇珍 邢晓磊 姚春红 白如君关键词:蛋白酶体抑制剂 共刺激分子 CD86 天花粉蛋白抑制同种异体混合 淋巴细胞 反应 与诱导IL-9+IL-10/IL-24+Th9细胞 间关系的初步探讨 被引量:1 2012年 建立同种异体混合 淋巴细胞 反应 (MLR)体系,采用同位素3 H-TdR掺入、FACS、Real-time PCR、ELISA、Westernblot等方法研究低剂量Tk抑制细胞 增殖反应 的效果及作用机制。FACS及同位素掺入检测结果显示,低剂量Tk通过非RIP的方式显著抑制MLR的增殖;Real-time PCR及ELISA结果表明,天花粉抑制的增殖体系中较对照组IFN-γ表达水平降低,IL-4、IL-9、IL-10、IL-24表达水平增强;Western blot显示,Tk使得JNK磷酸化增强。以上结果说明Tk显著抑制人同种异体混合 淋巴细胞 增殖反应 ,其负向免疫调节作用可能由多种细胞 因子、信号通路及T细胞 亚群的介导参与。 李青 路丽明 周光炎关键词:天花粉蛋白 负向调节 离体CD4^+CD25^+调节性T细胞 的扩增和混合 淋巴细胞 反应 研究 2011年 为研究健康人外周血CD4+CD25+调节性T细胞 (CD4+CD25+regulatory T cells,CD4+CD25+Tregs)在协同刺激信号作用下的扩增反应 及与CD4+CD25-T细胞 混合 淋巴细胞 反应 ,采用免疫磁珠法分离CD4+CD25+Tregs和CD4+CD25-T细胞 ,在抗CD3-mAbs和抗CD28-mAbs的刺激下行CD4+CD25+Tregs培养和CD4+CD25+Tregs+CD4+CD25-T细胞 混合 淋巴细胞 培养72 h。然后加入CCK-8溶液孵育1 h,用酶标仪检测OD450值。结果为:CD4+CD25+Tregs组OD450值极显著性地低于CD4+CD25-T细胞 组(P<0.01)。CD4+CD25+Tregs与CD4+CD25-T细胞 混合 组OD450值也极显著性地低于CD4+CD25-T细胞 组(P<0.01)。CD4+CD25+Tregs表现出无反应 性特征,还可抑制CD4+CD25-T细胞 扩增,因此,CD4+CD25+Tregs不只是很惰性的免疫细胞 ,而是对保持免疫耐受发挥了积极的调节作用。 翟海龙关键词:CD4+CD25+调节性T细胞 扩增 混合淋巴细胞反应 同种异基因成骨细胞 对混合 淋巴细胞 反应 体系中T细胞 的免疫抑制 被引量:2 2011年 背景:由同种异基因骨髓间充质干细胞 诱导的成骨细胞 移植免疫反应 各家报道不一致,差别明显。目的:体外观察由骨髓间充质干细胞 诱导而成的成骨细胞 对T细胞 的免疫调节作用及特点。方法:用Ficoll-Hypaque梯度密度离心法分离出兔骨髓单个核细胞 ,体外扩增,获取第3代细胞 ,经典化学方法诱导为成骨细胞 ,将其按照不同的比例加入到T细胞 形成双向混合 淋巴细胞 培养体系中,在第3,5,7天,用MTT比色法检测各组混合 淋巴细胞 培养体系中的T细胞 增殖情况,24h后用流式细胞 仪分析各组T细胞 亚群凋亡情况。结果与结论:诱导后成骨细胞 混合 淋巴细胞 培养体系中,成骨细胞 对T细胞 的增殖有抑制作用,在一定范围内,抑制作用具有量效关系。诱导后成骨细胞 剂量大,时间延长,抑制程度增强;3次平均抑制率相比:1:20组低于1:80组(P<0.01);1:40组低于1:80组(P<0.05);诱导后成骨细胞 能引起T细胞 亚群凋亡,其中CD4+(凋亡率8.57%)亚群不如CD8+(凋亡率15.31%)细胞 亚群凋亡显著(P<0.01)。结果显示诱导的成骨细胞 在体外能够通过细胞 凋亡途径抑制T细胞 的增殖,特别是CD8+。但这种抑制不是特别强,表明诱导的成骨细胞 虽有一定的免疫性,但其免疫性较低。 盘荣贵 范锲 邓耀良 赵劲民关键词:混合淋巴细胞 成骨细胞 骨髓间充质干细胞 混合 淋巴细胞 反应 体系中胎盘间充质干细胞 的免疫抑制效应被引量:4 2010年 背景:胎盘由滋养细胞 及大量起源于胚外中胚层的间充质和血管共同组成,提示胎盘中存在间充质干细胞 成分。目的:探索胎盘间充质干细胞 对混合 淋巴细胞 反应 体系中淋巴细胞 增殖和细胞 因子分泌的影响,评价其免疫学特性。方法:分离培养胎盘间充质干细胞 ,采用人以及兔双向混合 淋巴细胞 反应 体系,根据胎盘间充质干细胞 :外周血单个核细胞 的不同比例(1:5,1:10,1:20,1:50,1:100,1:500)加入丝裂霉素处理胎盘间充质干细胞 。3H掺入法测定淋巴细胞 增殖率并用ELISA法测定混合 培养上清液中白细胞 介素2和γ-干扰素的含量。结果与结论:胎盘间充质干细胞 抑制人或兔混合 淋巴细胞 反应 体系中淋巴细胞 的增殖,抑制率与加入的胎盘间充质干细胞 数量成正比,同时胎盘间充质干细胞 减少混合 淋巴细胞 反应 中细胞 因子白细胞 介素2、γ-干扰素的分泌。提示胎盘间充质干细胞 具有免疫调节作用,可以抑制同种异体或异种混合 淋巴细胞 反应 体系中淋巴细胞 的增殖。 薛一峰 黄建荣 孙鸿丽 苗宗宁关键词:混合淋巴细胞反应 胎盘间充质干细胞 免疫抑制 白细胞介素 Γ-干扰素 IDO基因转染小鼠树突状细胞 抑制混合 淋巴细胞 反应 2009年 目的:观察吲哚胺2,3双加氧酶(IDO)基因转染的小鼠树突状细胞 (DC)功能的改变。方法:分离培养小鼠DC,以IDO重组腺病毒转染培养的DC,混合 淋巴细胞 反应 检测转染细胞 的功能。结果与结论:与对照组相比转染细胞 能明显地抑制混合 淋巴细胞 反应 。 胡慧萍 苏丽萍关键词:树突状细胞 基因转染 带PTD的小鼠Foxp3 PRD缺失突变体对小鼠脾混合 淋巴细胞 反应 的影响 2009年 目的:构建和表达带蛋白转导结构域(protein transduction domain,PTD)的Foxp3(forkhead boxP3)PRD缺失突变体(PTD-ΔPRD)融合蛋白,并探讨其对脾混合 淋巴细胞 反应 的影响。方法:应用PCR技术扩增获得小鼠ΔPRD片段核酸序列,将其分列插入到带PTD的pET28a-PTD和pET28a-PTD-eGFP原核表达载体中,并在大肠埃希菌Rosetta(DE3)中表达融合蛋白,利用镍柱获得并复性融合蛋白;Western印迹鉴定目的蛋白表达的正确性、流式细胞 术和Western印迹检测融合蛋白穿膜进入小鼠T淋巴细胞 瘤株EL-4细胞 中的能力、双向混合 淋巴细胞 反应 分析融合蛋白对T淋巴细胞 增殖的影响。结果:融合蛋白可在大肠埃希菌Rosetta(DE3)中表达,并获得了大量纯化的融合蛋白。流式细胞 术和Western印迹显示融合蛋白穿越细胞 膜进入EL-4细胞 核中,混合 淋巴 反应 初步证明融合蛋白具有抑制T淋巴细胞 增殖的功能。结论:成功表达小鼠PTD-ΔPRD Foxp3融合蛋白,该融合蛋白能有效进入细胞 核内,抑制T淋巴细胞 增殖。 申卫红 刘静 彭鑫 宗杨勇 许逊 邵启祥关键词:蛋白转导结构域 FOXP3 mOX40-Fc的真核表达及其对混合 淋巴细胞 反应 的影响 被引量:2 2008年 构建重组pcDNA3.1-mOX40-Fc真核表达载体,在CHO细胞 中表达,并初步研究融合蛋白mOX40-Fc对MLR中细胞 增殖的影响。克隆编码hIgG1Fc基因片段,与编码小鼠OX40胞外段的基因融合,构建mOX40-Fc融合基因及其分泌型真核表达载体pcDNA3.1-mOX40-Fc;转染CHO细胞 构建融合蛋白的稳定真核表达细胞 株,用RT-PCR及夹心ELISA检测其表达,纯化后经SDS-PAGE及Western blot法对其进行鉴定,混合 淋巴细胞 反应 (MLR)测定其生物学活性。结果:核苷酸序列测定显示构建的mOX40胞外段和hIgG1Fc段基因序列与GenBank序列一致、阅读框完整;RT-PCR、ELISA和Western blot检测表明转染细胞 有分泌型重组蛋白的表达;功能实验提示mOX40-Fc能抑制MLR中的细胞 增殖。成功构建mOX40-Fc真核表达载体并获得高效表达,该重组蛋白可在体外通过抑制OX40/OX40L共刺激通路抑制淋巴细胞 增殖。 刘艳菲 冯永堂 鞠吉雨 林志娟 孙萍 王丽娜关键词:融合蛋白 真核表达 混合淋巴细胞反应
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张学光 作品数:1,064 被引量:2,585 H指数:19 供职机构:苏州大学附属第一医院 研究主题:单克隆抗体 树突状细胞 共刺激分子 CD40 T细胞 林茂芳 作品数:381 被引量:908 H指数:14 供职机构:浙江大学医学院附属第一医院 研究主题:白血病 急性白血病 骨髓增生异常综合征 异基因造血干细胞移植 端粒酶 易善红 作品数:73 被引量:257 H指数:9 供职机构:第三军医大学新桥医院 研究主题:HLA衍生肽 膀胱癌 多药耐药性 血红素氧化酶-1 肾脏 徐强 作品数:173 被引量:940 H指数:19 供职机构:南京大学 研究主题:小鼠 迟发型变态反应 四逆散 中药 炎症性肠病 樊一笋 作品数:29 被引量:58 H指数:4 供职机构:上海交通大学医学院 研究主题:混合淋巴细胞反应 单克隆抗体 CD154 细胞因子 CD40配体