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移植前供受者混合淋巴细胞反应后转录组测序预测重度急性移植物抗宿主病: 本文分为以下几个部分进行探讨：　　第一部分移植前供受者混合淋巴细胞反应后转录组测序预测重度急性移植物抗宿主病　　研究背景:　　异基因造血干细胞移植(allo-HSCT)是目前治疗多种恶性血液病和非恶性血液病的重要方法，...; 刘佳; 关键词：急性移植物抗宿主病混合淋巴细胞反应转录组测序

PDL_1Ig基因修饰的恒河猴肝细胞在混合淋巴细胞反应中的效应研究被引量：1: 2015年; 目的探讨恒河猴来源的PDL1Ig在体外混合淋巴细胞反应中的作用。方法在Gen Bank中检索到恒河猴目的基因PDL1和Ig G1Fc的序列,采用重叠延伸PCR法合成该目的基因,与p GEM-T连接转化感受态E.coli TOP10,经鉴定得到PDL1Ig基因,p Shuttle-CMV线性化后连接目的基因转化感受态E.coli TOP10,克隆p Shuttle-CMV/PDL1Ig重组穿梭质粒。将p Ad Easy-1和线性p Shuttle-CMV/PDL1Ig共电转至BJ5183细胞中同源重组,构建重组腺病毒载体p Ad Easy-1/PDL1Ig骨架,以脂质体2000将p Ad Easy-1/PDL1Ig转染至293细胞中包装成有活性的重组腺病毒。感染恒河猴肝细胞,RT-PCR和Western blotting检测目的基因的表达。混合淋巴细胞反应(MLR)测定其生物学活性。结果成功构建了PDL1Ig重组腺病毒载体,能感染恒河猴肝细胞,RT-PCR和Western blotting检测有目的基因表达,在混合淋巴细胞反应中其能抑制T细胞增殖。结论成功构建了p Ad Easy-1/PDL1Ig重组腺病毒载体,其可在恒河猴肝细胞中高效表达,该重组蛋白可在体外通过PD-1/PDL1通路抑制T淋巴细胞增殖。; 李鹏张玉毅李恒平丁正华王毅赵云邓仲鸣; 关键词：腺病毒载体混合淋巴细胞反应

MG132诱导HL-60细胞表达共刺激分子CD86及其对混合淋巴细胞反应的影响(英文): 2014年; 本研究探讨蛋白酶体抑制剂MG132诱导HL-60细胞表达共刺激分子CD80、CD86及其对混合淋巴细胞反应的作用。流式细胞仪检测MG132诱导HL-60细胞表达共刺激分子CD80、CD86及细胞活力;逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)分析CD80和CD86 mRNA表达情况;MG132诱导HL-60细胞表达共刺激分子CD86后,用75 Gy Co-60照射HL-60细胞,杀死HL-60细胞,保留抗原性作为刺激细胞,用健康人外周血单个核细胞作为反应细胞,用不同浓度HL-60细胞刺激健康人单个核细胞,HL-60细胞对健康人单个核细胞的增殖作用。结果表明:MG132上调HL-60细胞表达CD86,MG132诱导HL-60细胞的凋亡率呈浓度依耐性和时间依耐性。结论:高浓度的MG132对HL-60细胞有直接杀灭作用,低浓度MG132诱导HL-60细胞表达共刺激分子CD86,对健康人单个核细胞有增殖作用。MG132诱导HL-60细胞表达共刺激分子CD86,能促进健康人单个核细胞的增殖。; 余美霞刘迅周咏明程艳香程静邱宇珍邢晓磊姚春红白如君; 关键词：蛋白酶体抑制剂共刺激分子 CD86

天花粉蛋白抑制同种异体混合淋巴细胞反应与诱导IL-9＋IL-10／IL-24＋Th9细胞间关系的初步探讨被引量：1: 2012年; 建立同种异体混合淋巴细胞反应(MLR)体系,采用同位素3 H-TdR掺入、FACS、Real-time PCR、ELISA、Westernblot等方法研究低剂量Tk抑制细胞增殖反应的效果及作用机制。FACS及同位素掺入检测结果显示,低剂量Tk通过非RIP的方式显著抑制MLR的增殖;Real-time PCR及ELISA结果表明,天花粉抑制的增殖体系中较对照组IFN-γ表达水平降低,IL-4、IL-9、IL-10、IL-24表达水平增强;Western blot显示,Tk使得JNK磷酸化增强。以上结果说明Tk显著抑制人同种异体混合淋巴细胞增殖反应,其负向免疫调节作用可能由多种细胞因子、信号通路及T细胞亚群的介导参与。; 李青路丽明周光炎; 关键词：天花粉蛋白负向调节

离体CD4^+CD25^+调节性T细胞的扩增和混合淋巴细胞反应研究: 2011年; 为研究健康人外周血CD4+CD25+调节性T细胞(CD4+CD25+regulatory T cells,CD4+CD25+Tregs)在协同刺激信号作用下的扩增反应及与CD4+CD25-T细胞混合淋巴细胞反应,采用免疫磁珠法分离CD4+CD25+Tregs和CD4+CD25-T细胞,在抗CD3-mAbs和抗CD28-mAbs的刺激下行CD4+CD25+Tregs培养和CD4+CD25+Tregs+CD4+CD25-T细胞混合淋巴细胞培养72 h。然后加入CCK-8溶液孵育1 h,用酶标仪检测OD450值。结果为:CD4+CD25+Tregs组OD450值极显著性地低于CD4+CD25-T细胞组(P<0.01)。CD4+CD25+Tregs与CD4+CD25-T细胞混合组OD450值也极显著性地低于CD4+CD25-T细胞组(P<0.01)。CD4+CD25+Tregs表现出无反应性特征,还可抑制CD4+CD25-T细胞扩增,因此,CD4+CD25+Tregs不只是很惰性的免疫细胞,而是对保持免疫耐受发挥了积极的调节作用。; 翟海龙; 关键词：CD4+CD25+调节性T细胞扩增混合淋巴细胞反应

同种异基因成骨细胞对混合淋巴细胞反应体系中T细胞的免疫抑制被引量：2: 2011年; 背景:由同种异基因骨髓间充质干细胞诱导的成骨细胞移植免疫反应各家报道不一致,差别明显。目的:体外观察由骨髓间充质干细胞诱导而成的成骨细胞对T细胞的免疫调节作用及特点。方法:用Ficoll-Hypaque梯度密度离心法分离出兔骨髓单个核细胞,体外扩增,获取第3代细胞,经典化学方法诱导为成骨细胞,将其按照不同的比例加入到T细胞形成双向混合淋巴细胞培养体系中,在第3,5,7天,用MTT比色法检测各组混合淋巴细胞培养体系中的T细胞增殖情况,24h后用流式细胞仪分析各组T细胞亚群凋亡情况。结果与结论:诱导后成骨细胞混合淋巴细胞培养体系中,成骨细胞对T细胞的增殖有抑制作用,在一定范围内,抑制作用具有量效关系。诱导后成骨细胞剂量大,时间延长,抑制程度增强;3次平均抑制率相比:1:20组低于1:80组(P<0.01);1:40组低于1:80组(P<0.05);诱导后成骨细胞能引起T细胞亚群凋亡,其中CD4+(凋亡率8.57%)亚群不如CD8+(凋亡率15.31%)细胞亚群凋亡显著(P<0.01)。结果显示诱导的成骨细胞在体外能够通过细胞凋亡途径抑制T细胞的增殖,特别是CD8+。但这种抑制不是特别强,表明诱导的成骨细胞虽有一定的免疫性,但其免疫性较低。; 盘荣贵范锲邓耀良赵劲民; 关键词：混合淋巴细胞成骨细胞骨髓间充质干细胞

混合淋巴细胞反应体系中胎盘间充质干细胞的免疫抑制效应被引量：4: 2010年; 背景:胎盘由滋养细胞及大量起源于胚外中胚层的间充质和血管共同组成,提示胎盘中存在间充质干细胞成分。目的:探索胎盘间充质干细胞对混合淋巴细胞反应体系中淋巴细胞增殖和细胞因子分泌的影响,评价其免疫学特性。方法:分离培养胎盘间充质干细胞,采用人以及兔双向混合淋巴细胞反应体系,根据胎盘间充质干细胞:外周血单个核细胞的不同比例(1:5,1:10,1:20,1:50,1:100,1:500)加入丝裂霉素处理胎盘间充质干细胞。3H掺入法测定淋巴细胞增殖率并用ELISA法测定混合培养上清液中白细胞介素2和γ-干扰素的含量。结果与结论:胎盘间充质干细胞抑制人或兔混合淋巴细胞反应体系中淋巴细胞的增殖,抑制率与加入的胎盘间充质干细胞数量成正比,同时胎盘间充质干细胞减少混合淋巴细胞反应中细胞因子白细胞介素2、γ-干扰素的分泌。提示胎盘间充质干细胞具有免疫调节作用,可以抑制同种异体或异种混合淋巴细胞反应体系中淋巴细胞的增殖。; 薛一峰黄建荣孙鸿丽苗宗宁; 关键词：混合淋巴细胞反应胎盘间充质干细胞免疫抑制白细胞介素 Γ-干扰素

IDO基因转染小鼠树突状细胞抑制混合淋巴细胞反应: 2009年; 目的:观察吲哚胺2,3双加氧酶(IDO)基因转染的小鼠树突状细胞(DC)功能的改变。方法:分离培养小鼠DC,以IDO重组腺病毒转染培养的DC,混合淋巴细胞反应检测转染细胞的功能。结果与结论:与对照组相比转染细胞能明显地抑制混合淋巴细胞反应。; 胡慧萍苏丽萍; 关键词：树突状细胞基因转染

带PTD的小鼠Foxp3 PRD缺失突变体对小鼠脾混合淋巴细胞反应的影响: 2009年; 目的:构建和表达带蛋白转导结构域(protein transduction domain,PTD)的Foxp3(forkhead boxP3)PRD缺失突变体(PTD-ΔPRD)融合蛋白,并探讨其对脾混合淋巴细胞反应的影响。方法:应用PCR技术扩增获得小鼠ΔPRD片段核酸序列,将其分列插入到带PTD的pET28a-PTD和pET28a-PTD-eGFP原核表达载体中,并在大肠埃希菌Rosetta(DE3)中表达融合蛋白,利用镍柱获得并复性融合蛋白;Western印迹鉴定目的蛋白表达的正确性、流式细胞术和Western印迹检测融合蛋白穿膜进入小鼠T淋巴细胞瘤株EL-4细胞中的能力、双向混合淋巴细胞反应分析融合蛋白对T淋巴细胞增殖的影响。结果:融合蛋白可在大肠埃希菌Rosetta(DE3)中表达,并获得了大量纯化的融合蛋白。流式细胞术和Western印迹显示融合蛋白穿越细胞膜进入EL-4细胞核中,混合淋巴反应初步证明融合蛋白具有抑制T淋巴细胞增殖的功能。结论:成功表达小鼠PTD-ΔPRD Foxp3融合蛋白,该融合蛋白能有效进入细胞核内,抑制T淋巴细胞增殖。; 申卫红刘静彭鑫宗杨勇许逊邵启祥; 关键词：蛋白转导结构域 FOXP3

mOX40-Fc的真核表达及其对混合淋巴细胞反应的影响被引量：2: 2008年; 构建重组pcDNA3.1-mOX40-Fc真核表达载体,在CHO细胞中表达,并初步研究融合蛋白mOX40-Fc对MLR中细胞增殖的影响。克隆编码hIgG1Fc基因片段,与编码小鼠OX40胞外段的基因融合,构建mOX40-Fc融合基因及其分泌型真核表达载体pcDNA3.1-mOX40-Fc;转染CHO细胞构建融合蛋白的稳定真核表达细胞株,用RT-PCR及夹心ELISA检测其表达,纯化后经SDS-PAGE及Western blot法对其进行鉴定,混合淋巴细胞反应(MLR)测定其生物学活性。结果:核苷酸序列测定显示构建的mOX40胞外段和hIgG1Fc段基因序列与GenBank序列一致、阅读框完整;RT-PCR、ELISA和Western blot检测表明转染细胞有分泌型重组蛋白的表达;功能实验提示mOX40-Fc能抑制MLR中的细胞增殖。成功构建mOX40-Fc真核表达载体并获得高效表达,该重组蛋白可在体外通过抑制OX40/OX40L共刺激通路抑制淋巴细胞增殖。; 刘艳菲冯永堂鞠吉雨林志娟孙萍王丽娜; 关键词：融合蛋白真核表达混合淋巴细胞反应

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