搜索到32267篇“ 植物表达载体构建“的相关文章
- 杧果脱镁叶绿素酶基因MiPPH的克隆及植物表达载体构建
- 2023年
- 叶绿素降解是果实色泽形成过程中一个主要的影响因素。脱镁叶绿素酶(pheophytinase, PPH)是叶绿素降解代谢的关键酶。本研究提取杧果果皮总RNA,采用RACE方法,克隆得到一个脱镁叶绿素酶基因,并对其进行了初步的生物信息学分析。序列分析表明MiPPH基因cDNA序列全长1 267 bp,开放阅读框为1 113 bp,可编码370个氨基酸,分子量为41.73 kD,等电点为5.22。使用NCBI上的Conserved domains分析MiPPH蛋白结构域,结果显示MiPPH含有PLN02578、Abhydrolase_1共2个结构域,其中PLN02578为保守域,其他物种PPH也都含有这个水解酶(Hydrolase)保守域,说明PPH蛋白有高度的保守性。通过BLAST上其他植物的氨基酸序列进行相似性比对,利用DNAMAN生成的系统进化树发现杧果MiPPH蛋白序列和与同为漆树科的开心果的PPH蛋白序列相似度较高,亲缘关系较近。利用定量PCR技术对不同品种中的MiPPH基因表达量进行分析,发现绿色‘桂七’品种表达量最高,而黄色‘金煌’品种表达量最低,黄色‘金煌’品种和红色‘贵妃’品种表达量相差不大。本试验成功构建pCAMBIA2300-GFP-MiPPH植物表达载体,通过农杆菌介导的烟草瞬时表达,亚细胞定位MiPPH主要定位于细胞核。本试验为后续进行PPH基因的功能验证提供试验基础。
- 俞凯莉赵志常高爱平罗睿雄黄建峰张梦云李茂富
- 关键词：植物表达载体
- 菠萝AcMYB44基因的克隆及植物表达载体构建被引量：1
- 2022年
- 为研究R2R3-MYB转录因子家族成员AcMYB44基因在菠萝非生物胁迫过程作用机制,利用PCR技术从菠萝品种‘手撕菠萝’叶片中克隆AcMYB44并利用生物信息学对其结构及功能进行分析。结果表明,克隆获得的AcMYB44基因cDNA序列全长1048 bp,开放阅读框(ORF)为771 bp,编码256个氨基酸。AcMYB44编码一个无信号肽、无跨膜结构且定位于细胞核的不稳定亲水蛋白,存在两个SANT保守结构域,属于R2R3-MYB家族。系统进化分析表明,AcMYB44与AtMYB44、AtMYB70、AtMYB73、AtMYB77、GmMYB73、MsMYB44、CeMYB44、DcMYB44亲缘关系较近且聚类为S22亚族。模式植物中研究表明S22亚族成员与抗逆相关。利用同源重组的方法构建了绿色荧光蛋白融合表达载体pGREEN-AcMYB44-ORF-GFP。以上结果为深入研究AcMYB44基因在菠萝中的功能奠定基础。
- 徐健韦巧云赵静樊松乐黄丽君罗晟昇蒋娟娟
- 关键词：生物信息学
- 干旱诱导基因GmNF-YA7克隆及植物表达载体构建被引量：4
- 2022年
- 为了鉴定大豆核因子YA(Nuclear Factor YA,NF-YA)与非生物胁迫的关系,本研究检测大豆干旱胁迫下GmNF-YA7和GmNF-YA8的表达量情况,克隆GmNF-YA7基因并构建植物表达载体,同时获得其转基因工程菌株。qRT-PCR结果显示,GmNF-YA7和GmNF-YA8均可以被干旱胁迫诱导表达,且GmNF-YA7对干旱胁迫的应答更明显。从大豆中克隆出GmNF-YA7基因,其位于大豆8号染色体上,编码含有336个氨基酸的蛋白质,预测分子量为37.06 kDa,pI6.11。GmNF-YA7蛋白氨基酸序列中含有1个CBF保守结构域。亚细胞定位预测结果显示,GmNF-YA7定位于细胞核中。蛋白系统进化分析表明GmNF-YA7蛋白与拟南芥AtNF-YA1蛋白的亲缘关系较近。利用限制性内切酶Nde I和Sal I将GmNF-YA7与植物表达载体pRI101连接并转化农杆菌EHA105,获得转基因工程菌株。
- 殷书欣计俊杰肖情李铭杨何佳琦张军翟莹
- 关键词：大豆植物表达载体
- 杨树ERF转录因子基因PtRAP2L14植物表达载体构建及遗传转化
- 2022年
- ERF(Ehylene response factor)转录因子作为植物重要的转录调节基因,影响着植物整个生命周期的生长发育和植物抗逆。本研究从84K(Populus abla×P.glandulosa)中克隆出PtRAP2L14基因,生物信息学分析PtRAP2L14编码蛋白的跨膜结构和亚细胞定位,发现PtRAP2L14蛋白质在10~37 aa处有一个从外到内的跨膜螺旋,其中心位点为27 aa处,亚细胞定位预测发现该蛋白定位在细胞质中。本研究成功构建PtRAP2L14基因植物表达载体,并成功完成在84K杨中的遗传转化,获得阳性转基因株系9个,为深入研究PtRAP2L14基因在杨树生长发育及逆境胁迫中发挥的作用提供材料和理论基础。
- 孙赫王星斗王升级
- 关键词：杨树表达载体构建
- 番茄SlIWS1基因植物表达载体构建与瞬时表达被引量：1
- 2021年
- 番茄是广泛种植的果蔬类作物,病害发生是导致番茄产量和品质降低的重要原因,AtIWS1(Arabidopsis thaliana interact with SPT 6)基因可以提高拟南芥抗病性。文章通过病原菌接种克隆番茄SlIWS1基因,并构建植物表达载体,利用农杆菌介导方法在烟草叶片中进行瞬时表达和Western Blot检测。实验结果表明,番茄SlIWS1基因在病原丁香假单胞菌接种时表达水平升高,参与番茄抗病防御应答。利用SlIWS1基因所构建的植物表达载体,在烟草中获得预期大小SlIWS1蛋白表达产物,可用于后续番茄SlIWS1蛋白质相互作用和基因功能分析。
- 王莹莹徐焕焕陈丹阳王洋王瑞鹏牛向丽
- 关键词：番茄丁香假单胞菌植物表达载体
- 粉葛查尔酮合成酶基因PtCHS的克隆与植物表达载体构建被引量：2
- 2021年
- 查尔酮是植物体形成的一类次级代谢产物,在植物花色形成、育性及抵抗胁迫中发挥重要作用。前期研究发现粉葛与野葛中总黄酮的含量和葛根素的含量差异较大,而查尔酮合成酶是黄酮类化合物合成中的首个关键酶。为了研究野葛与粉葛中的查尔酮合成酶(CHS)基因是否存在差异性,利用同源克隆的方法,根据已报道的野葛CHS基因序列设计引物,从粉葛中克隆CHS基因,对其进行蛋白相对分子质量、二级结构及亚细胞定位预测等生物信息学分析并构建植物表达载体。结果显示,成功克隆到粉葛CHS基因,将其命名为PtCHS,该基因cDNA序列长1187 bp,包含一个长1179 bp完整的ORF框,推导编码389个氨基酸,预测蛋白相对分子质量为42.8 kD,理论等电点为5.96,无跨膜结构域,为稳定的亲水性蛋白,二级结构主要由α-螺旋、延伸链、β-转角和无规则卷曲组成,同时亚细胞定位预测结果显示蛋白位于细胞质;氨基酸序列多重比对发现,粉葛的查尔酮合成酶基因(PtCHS)所编码的氨基酸与已报道的野葛CHS基因编码的氨基酸同源性为100%,与大豆、赤豆、菜豆及木豆的氨基酸同源性均在95%以上;蛋白互作预测分析得出,CHS与CHI、C4H及REDUCTASE发生互作的可能性较大;用PtCHS与植物表达载体pBI121构建重组子pBI121-PtCHS,为葛根查尔酮合成酶基因的功能验证提供重要的参考依据。
- 羽健宾李钰婷张静肖冬詹洁何龙飞王爱勤
- 关键词：查尔酮合成酶
- 短花针茅StbCO和StbFT基因全长克隆与植物表达载体构建
- 内蒙古荒漠草原是草原与沙漠的交错带,是较为脆弱的草原生态系统,受到荒漠化和气候变化的影响严重。处于其中的短花针茅草原是荒漠草原的典型代表,具有十分重要的生态和饲用价值,其花期极易受到气候变化和人为活动的影响。而CO-FT...
- 范宇凤
- 关键词：短花针茅基因克隆
- 文献传递
- 草果AtNCED基因克隆、表达和植物表达载体构建被引量：3
- 2020年
- 9-顺式环氧类胡萝卜素双加氧酶(9-cis-epoxycarotenoid dioxygenase, NCED)是ABA生物合成的限速酶。诸多研究表明NCED基因表达量的变化与ABA含量显著相关,在种子休眠过程中发挥重要作用。为探究草果AtNCED基因的序列特征和功能,本研究以草果(Amomum tsaoko Crevost et Lemarie)种子转录组为基础,采用RT-PCR技术克隆了一个AtNCED基因。该基因全长2 372 bp,包含一个1 830 bp的开放阅读框(open reading frame, ORF),编码610个氨基酸。生物信息学分析显示,AtNCED基因编码的蛋白在N-末端包含典型的叶绿体转运肽序列,在催化结构域含有4个高度保守的组氨酸残基。AtNCED蛋白与芭蕉科马来西亚蕉同源性较高,与其他单子叶植物处在同一进化分支。实时荧光定量PCR分析结果表明,AtNCED基因表达量随着层积时间的增加逐渐下降,该基因可能正向调控种子休眠,在草果种子休眠诱导与维持中发挥重要作用。进一步地,利用同源重组方法,成功构建了pBI121-AtNCED过表达载体,并转化至农杆菌EHA105。该研究结果为弄清ABA激素信号在种子休眠中的调控作用提供了帮助。
- 潘春柳姚绍嫦黄燕芬唐美琼朱艳霞董青松余丽莹
- 关键词：草果克隆表达载体构建
- 马铃薯AP2/ERF转录因子的克隆及植物表达载体构建被引量：5
- 2020年
- AP2/ERF基因家族转录因子普遍存在于植物中,参与植物体内的各种生物学过程,包括植物的生长发育、生物和非生物胁迫响应等。前期转录组测序的结果发现马铃薯‘加湘1号’一个AP2/ERF家族基因(PGSC0003DMG400012154)在接种晚疫病菌(Phytophthora infestans)24 h后被显著激活。从接种P.infestans 24 h的‘加湘1号’的总RNA中通过RT-PCR获得了该基因CDS序列为885 bp,BLAST分析显示该基因编码一个295个氨基酸残基的蛋白,并且含有1个AP2/ERF结构域,是AP2/ERF转录因子家族中的ERF亚家族的一员。本研究将该基因与XcmⅠ酶切的表达载体pCXSN连接,转化大肠杆菌,通过测序挑选插入正确克隆酶切验证,并成功转化农杆菌。本研究结果为进一步研究该基因的功能提供了帮助。
- 王慧刘洪杨奕琦许思思熊兴耀周倩
- 关键词：马铃薯晚疫病基因克隆表达载体构建
- 叶斑艺兰花F3′5′H基因的植物表达载体构建及其应用
- 本发明公开了一种含有叶斑艺兰花类黄酮3',5'‑羟化酶基因(F3'5'H)且能提高植物花青素含量的专用植物表达载体pCAMBIA1301‑35S‑F3'5'H。本发明是利用RACE的方法从叶斑艺兰花中克隆出F3'5'H基...
- 王玉英李枝林凌青李国昌苏俊马伟荣黄新龙刘丹李茹
- 文献传递
