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- 一种柯萨奇病毒B组3型毒株及应用
- 本发明提供一种柯萨奇病毒B组3型毒株及其应用,涉及生物医药技术领域。该毒株命名为KM50‑W07,于2024年11月6日保藏于中国典型培养物保藏中心,保藏编号为CCTCC NO:V202474,保藏地址为中国.武汉.武汉...
- 马绍辉冯昌增陈俊薇刘建生张名楚昭阳叶尤松杨昭庆孙浩
- 核酸片段、柯萨奇病毒复制子及其假病毒、应用
- 本发明涉及生物技术领域,尤其涉及核酸片段、柯萨奇病毒复制子及其假病毒、应用。该核酸片段通过合适的链接片段和切割片段,结合5’UTR的碱基突变,实现了BSD、hGluc、EMCV IRES等基因的有效融合复制,未影响该复制...
- 马骁李红霞蒋廷波蒋彬张悦韩莲花张蕾
- 3种柯萨奇病毒A10型拯救策略的比较
- 2025年
- 目的比较3种柯萨奇病毒(Coxsackievirus,CV)-A10拯救策略,以期为选择合适的病毒拯救策略开展肠道病毒相关毒株的研究奠定基础。方法将CV-A10毒株基因组克隆至pBR322载体,基因组5′端引入T7启动子序列,3′端引入polyA尾及NotⅠ酶切位点,构建pBR322-CV-A10质粒。在polyA尾后进一步引入丁型肝炎病毒核酶切割序列(hepatitis delta virus ribozyme,HdvRZ),构建pBR322-CV-A10-HdvRZ质粒。3种病毒拯救策略分别为:以病毒基因组全长RNA转染Vero细胞;以线性化的病毒基因组cDNA与T7 RNA聚合酶表达质粒pCAGGS-T7共转染Vero细胞;以pBR322-CV-A10-HdvRZ质粒与pCAGGS-T7质粒共转染Vero细胞。3种策略获得的拯救病毒在Vero细胞上扩增至第3代后,RT-PCR分别扩增1500 bp左右的基因片段,并测序;Western blot法检测病毒结构蛋白VP1的表达;将拯救病毒接种于Vero细胞,分析病毒的生长动力学特性。结果3种策略均可获得拯救病毒,各拯救病毒在Vero细胞上的生长特性一致,基因组序列与亲本毒株一致。3种策略均可实现细胞中病毒结构蛋白VP1的表达。3种策略拯救得到的CV-A10在Vero细胞上具有一致的增殖特性。结论3种策略均可成功拯救得到CV-A10。以病毒基因组全长RNA转染Vero细胞准备步骤复杂,转染后出毒时间短,适用于特定毒株的快速拯救;以双质粒共转染Vero细胞操作最简便,但转染后出毒所需时间较长,适用于基础研究中一系列重组病毒的拯救。上述策略为CV-A10的拯救提供了灵活且高效的途径。
- 裴捷许棵刘睿伦汪梦俊郭靖孟胜利申硕
- 关键词:转染病毒拯救
- 艾纳香提取物体外抑制柯萨奇病毒的活性研究
- 2025年
- 目的 对艾纳香提取物体外抗柯萨奇病毒(CVB5)效果进行研究。方法 采用倍数稀释的柯萨奇病毒液并将其与RD细胞共同孵育以确定其TCID_(50)值;将不同浓度的艾纳香提取物添加到含有RD细胞的96孔板内,以此评估其对细胞活力的影响程度;在含有RD细胞及艾纳香提取物的96孔板内进一步观察艾纳香提取物对抗柯萨奇病毒的能力。结果 柯萨奇病毒液的TCID_(50)值为10^(-7.67)。艾纳香提取物对柯萨奇病毒的抑制率随浓度的上升而增大,其针对柯萨奇病毒的IC_(50)值则达到了7.26 mg/L。提取物在50 mg/L的浓度时可导致RD细胞活力降低(P <0.05),但在6.25~50 mg/L的浓度范围里却能使含有病毒的RD细胞活力上升(P <0.05),并且选择指数(SI)超过了6.89。结论 艾纳香提取物具备体外对抗柯萨奇病毒的活性。
- 李凰温荣城柴立李霞贾金艳陈真
- 关键词:艾纳香抗病毒药柯萨奇病毒
- 一种感染柯萨奇病毒A16型的小鼠模型及其构建方法
- 本发明公开一种感染柯萨奇病毒A16型的小鼠模型及其构建方法,具体步骤为把Rosa26位点的左同源臂LHA连接到质粒pCAG‑GFP‑N1上,成功构建出质粒pCAG‑GFP‑N1‑Rosa26 LHA。然后使用高保真酶PC...
- 黄璋琼吴海婷范胜涛叶尤松黄真张艺薇王子鸥江勤芳李云
- 云南省柯萨奇病毒A组10型的全基因组分析
- 2025年
- 目的分析从2022年手足口病患儿粪便样品中分离到的柯萨奇病毒A组10型(coxsackievirus A10,CVA10)分离株的全基因组特征。方法经人横纹肌肉瘤细胞(human rhabdomyosarcoma,RD)分离得到该分离株,将其命名为155/YN/CHN/2022。提取病毒RNA,采用反转录聚合酶链反应(reverse transcription polymerase chain reaction,RT-PCR)扩增其VP1序列,鉴定血清型。然后分段全基组扩增并拼接155/YN/CHN/2022的全基因组序列,利用MEGA7.0、DNAStar7.1和Simplot3.5.1等软件对序列进行分析。结果CVA10分离株155/YN/CHN/2022经扩增及拼接后得到的全基因组序列长为7403 nt,其中5'UTR区为746 nt,3'UTR区为76 nt,编码区长6552 nt,该分离株与CVA10原型株的核苷酸序列和氨基酸序列一致性分别为78.43%和95.30%,而与其他国内外CVA10分离株的核苷酸序列和氨基酸序列一致性分别为91.18%~95.06%和97.63%~98.54%。系统发育分析发现,155/YN/CHN/2022位于C基因型。P1、P2、P3系统发育结果显示,在P2、P3非编码区,该分离株与其他血清型毒株可能发生过重组。Simplot重组分析也显示,CVA10分离株155/YN/CHN/2022可能在非编码区出现重组事件。结论CVA10分离株155/YN/CHN/2022属于C基因型,和近年来中国大陆流行株属于同一基因型。
- 楚昭阳李佳玲陈俊薇冯昌增张名李丽马绍辉
- 关键词:手足口病全基因组进化分析
- 柯萨奇病毒A组6型VP1的主要特性及表位预测分析
- 2025年
- 运用生物信息学方法预测分析襄阳地区分离的柯萨奇病毒A组6型(Coxsackievirus A6, CV-A6)病毒蛋白(Viral protein, VP)中VP1的主要特性及表位。应用ProtParam, SOPMA,Phyre 2,DNAstar v8.1.3,Mega11,ABCpred, ElliPro, NetMHCpan-4.1,NetMHCIIpan-4.0等软件和在线网站预测分析CV-A6 VP1包括理化性质、结构特征、序列特点,亲缘关系在内的主要特性及B,T细胞抗原表位。结果发现该分离株VP1为碱性、不稳定的亲水性蛋白,其二级结构以无规则卷曲为主,核苷酸(氨基酸)同源性不一,有12个氨基酸突变位点,属于D3a亚型。该蛋白还存在多个潜在及优势B,T细胞抗原表位。CV-A6襄阳分离株与国内广西、广东地区CV-A6共进化共循环,具有一定的免疫潜能,可为分子流行病学监测以及多价疫苗的研制提供科学依据与参考。
- 刘益文张晓雯高邦婷项钦戈张晨阳左成杨欢汪大巍张高博
- 关键词:VP1生物信息学表位
- 穿心莲内酯体外抗肠道病毒71型和柯萨奇病毒A16型的作用
- 2025年
- 目的观察穿心莲内酯体外抗肠道病毒71型(enteroviruses 71,EV71)和柯萨奇病毒A16型(coxsackievirus A16,CA16)的作用效果。方法采用细胞病变(cytopathic effect,CPE)法和噻唑蓝(thiazolyl blue tetrazolium bromide,MTT)法测定穿心莲内酯对人恶性胚胎横纹肌瘤细胞(human rhabdomyosarcoma cells,RD)的最大无毒剂量和穿心莲内酯对感染细胞后的EV71和CA16体外抑制作用;通过荧光定量PCR法检测穿心莲内酯溶液对EV71和CA16中VP1基因,RD细胞中3种促炎因子IL-1β、IL-6和TNF-α在基因水平的变化。结果MTT结果显示穿心莲内酯对RD细胞的最大无毒剂量为78μg/mL;手足口病毒感染细胞,随后分别经78.00、39.00、19.50、9.75、4.88、2.44μg/mL的穿心莲内酯溶液处理,感染EV71病毒的细胞存活率增加至(82.41±1.76)%、(79.54±2.91)%、(81.02±1.99)%、(71.81±2.26)%、(52.87±1.51)%和(50.41±0.93)%,感染CA16病毒的细胞存活率增加至(81.00±0.64)%、(79.72±1.38)%、(61.59±3.47)%、(53.37±0.53)%、(52.41±1.37)%和(43.69±0.40)%,表明穿心莲内酯能明显降低EV71和CA16引起的细胞病变效应;手足口病毒感染后,用78.00、39.00、19.50、9.75μg/mL的穿心莲内酯溶液给药,显示EV71和CA16中VP1,RD细胞中促炎因子IL-1β、IL-6和TNF-α表达量与病毒对照组相比均有明显降低,结果表明手足口病毒感染后,用穿心莲内酯溶液给药,对手足口病毒的VP1基因表达产生明显抑制作用,且能降低IL-1β、TNF-α、IL-6在mRNA水平的表达。结论穿心莲内酯具有明显的体外抗EV71和CA16病毒的效果,其可能通过抑制促炎因子IL-1β、TNF-α、IL-6的表达,从而发挥抗EV71和CA16病毒的作用。
- 纪洵敏梁宇恒何炽明肖微彭晓放谭丽容曾宏强唐颜柯昌文张磊
- 关键词:穿心莲内酯手足口病肠道病毒71型柯萨奇病毒A16型抗病毒作用
- 用于检测柯萨奇病毒A组6型病毒全基因组的引物组、试剂盒、方法及应用
- 本发明属于微生物检测技术领域,具体涉及用于检测柯萨奇病毒A组6型病毒全基因组的引物组、试剂盒、方法及应用。本发明设计出一套特异性针对CV‑A6全基因组序列扩增的引物组,针对不同的CV‑A6毒株(不同地区、不同分离时间),...
- 温红玲王泽群寇增强徐小莹梁昊
- 柯萨奇病毒B组4型TaqMan探针一步法实时荧光定量PCR检测方法的建立及验证
- 2025年
- 目的建立柯萨奇病毒B组4型(Ccoxsackievirus B4,CVB4)Taq Man探针一步法实时荧光定量PCR(real-time fluo-rescence quantitative PCR,RT-q PCR)检测方法,并进行验证,以期为CVB4的快速定量检测提供可靠方法。方法选择CVB4的VP1序列中较保守部分,设计引物和探针;经体外转录获得阳性RNA标准品,绘制标准曲线,建立CVB4的Taq Man探针一步法RT-q PCR法。验证方法的灵敏度、线性范围、重复性、特异性。应用建立的方法检测16份临床样本。结果方法的检测灵敏度为10~3copies/μL;阳性RNA标准品在10^(3)~10^(10)copies/μL范围内,与荧光单位(relative fluorescence unit,RFU)具有良好的线性关系,线性方程为:y=-3.742 x+48.651,R^(2)为0.998;重复性验证CV<2%;与柯萨奇病毒B组其他血清型CVB2、CVB3、CVB5、CVB6,肠道病毒71型(enterovirus 71,EV71),柯萨奇病毒A组(Coxsackie virus A,CVA)8、10、12型(CVA8、CVA10、CVA12),埃可病毒11型(Echovirus 11,E11)均无交叉反应。16份临床样本中12份为CVB4阳性。结论建立的Taq Man探针一步法RT-q PCR检测方法具有较好的灵敏度、特异性和重复性,可用于CVB4临床样品的检测。
- 郭伟陈俊薇刘煜菡张名冯昌增马绍辉
- 关键词:TAQMAN探针实时荧光定量PCR
相关作者
- 马绍辉

- 作品数:133被引量:158H指数:6
- 供职机构:中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所
- 研究主题:分离株 全基因组 VP1基因 柯萨奇病毒B组 柯萨奇病毒A组
- 钟照华

- 作品数:189被引量:582H指数:13
- 供职机构:哈尔滨医科大学基础医学院
- 研究主题:医学微生物学 柯萨奇病毒 B组柯萨奇病毒 脑缺血 柯萨奇病毒B组3型
- 梁争论

- 作品数:341被引量:1,437H指数:20
- 供职机构:中国食品药品检定研究院
- 研究主题:疫苗 肠道病毒71型 乙型肝炎疫苗 乙型肝炎 手足口病
- 王永祥

- 作品数:95被引量:316H指数:12
- 供职机构:河北师范大学
- 研究主题:柯萨奇病毒B3 VP1 柯萨奇病毒B组3型 PCDNA3 CVB3
- 毛群颖

- 作品数:151被引量:398H指数:10
- 供职机构:中国食品药品检定研究院
- 研究主题:疫苗 肠道病毒71型 手足口病 中和抗体 EV71