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犬冠状病毒时间分辨免疫荧光分析方法的建立及初步应用被引量:2
2023年
探索建立犬冠状病毒(CCV)的时间分辨免疫荧光分析(TRFIA)方法并制备试剂盒,并对试剂盒的性能进行初步的评价。本研究将抗CCV的单克隆抗体(MAb)8D6作为包被抗体,用Eu^(3+)标记的7E10 mAb作为检测抗体,制备双抗体夹心法TRFIA试剂盒,并对试剂盒的准确度、特异性、重复性、稳定性、临床样本检测等性能进行评估。本研究制备的CCV时间分辨免疫荧光试剂盒灵敏度为0.68 ng/mL;各浓度CCV标准品在不同水平的稀释度回收率在94.6%~105.6%;同步检测CPV、CD、CPIV、CAV-1标准品均为阴性,特异性好;批内CV为1.91%~5.03%,批间CV为1.82%~6.03%,重复性好;试剂盒在4℃保存6个月,37℃保存7 d后,试剂盒各项性能均无明显变化;临床样本检测结果与RT-PCR方法结果一致。本研究制备的CCV TRFIA试剂盒具有灵敏度、准确度高,重复性、稳定性良好的优点,能够对CCV的临床样本进行大量的筛查,为CCV患病犬的早期确诊提供了一种全新的技术手段。
陈翠翠梁焕坤高浩维赖宏锐钟树海黎杰星李来庆
关键词:犬冠状病毒双抗体夹心时间分辨免疫荧光分析
基于时间分辨免疫荧光分析仪检测抗体配对的抗体筛选方法
本发明涉及一种基于时间分辨免疫荧光分析仪检测抗体配对的抗体筛选方法,具体包括以下步骤:S1:制备荧光标记物,使用制备的荧光标记物标记抗体;S2:将抗体包被至固相载体中,并进行封闭;S3:将待检抗原加入所述步骤S2的固相载...
许行尚杰弗瑞·陈朱道云熊凯
犬细小病毒时间分辨免疫荧光分析方法的建立及初步应用被引量:1
2021年
为建立犬细小病毒(CPV)的时间分辨免疫荧光分析(TRFIA)方法并制备试剂盒,本实验采用抗CPV单克隆抗体(MAb)7D5作为包被抗体,Eu3+标记的MAb 2F7作为检测抗体,对各反应条件优化后制备双抗体夹心TRFIA试剂盒。并评价了其灵敏度、准确度、特异性、重复性和稳定性。利用该试剂盒与RT-PCR方法同时检测了疑似患病犬的临床粪便、呕吐物、血液样品(各60份)和CPV阴性犬这3种临床样品各10份,比较并计算二者的符合率。优化结果显示,最佳的TRFIA反应条件为:MAb 7D5的包被浓度为15μg/mL;Eu^(3+)标记试剂与标记MAb 2F7(2.5 mg/mL)最佳体积分别为70μL和30μL;反应体系为25μL CPV标准品或待测样品+200μL分析缓冲液+200μL Eu^(3+)-检测抗体+200μL增强液。灵敏度试验显示TRFIA方法对CPV灭活病毒检测灵敏度为0.83 ng/mL。准确度试验结果显示,不同浓度CPV标准品稀释(1:2、1:4、1:8)后的稀释回收率在89.25%~100.8%;特异性试验结果显示,该方法除对不同亚型CPV的检测结果均为阳性外,对犬瘟热病毒、犬副流感病毒、犬腺病毒I型、犬冠状病毒、猫细小病毒、水貂肠炎病毒等检测均为阴性,无明显交叉反应;对高、中、低3种不同浓度CPV的重复性试验结果显示,批内变异系数为2.34%~4.76%,批间变异系数为2.38%~5.10%;稳定性试验结果显示,该试剂盒至少可在4℃稳定保存6个月,37℃保存7 d;临床样品的检测结果显示,利用该方法从大部分疑似患病犬的粪便、血液以及呕吐物中均检测到了CPV,而CPV阴性犬这3类样品的检测结果均为阴性。本研究建立的TRFIA法和RT-PCR法检测结果一致,符合率达到100%。上述结果表明,本研究制备的CPV TRFIA试剂盒灵敏度准确度高、特异性强、重复性、稳定性好,且可检测的临床样品种类多,为临床样品的检测提供有效技术手段。
陈翠翠梁焕坤赖宏锐钟树海黎杰星李来庆
关键词:犬细小病毒双抗体夹心时间分辨免疫荧光分析
检测β-CTX和N-MID水平的双标记时间分辨免疫荧光分析方法的建立和评价被引量:3
2021年
目的:研制一种检测β胶联降解产物(β-CTX)和骨钙素N端中分子片段(N-MID)水平的双标记时间分辨免疫荧光分析方法(TRFIA)并评价其检测性能。方法:将抗β-CTX和N-MID的4E5和2B7单克隆抗体(MAb)作为包被抗体包被在96孔培养板,采用铕离子(Eu^(3+))和钐离子(Sm^(3+))分别标记2G6和5A3 MAb作为检测抗体,建立双抗体夹心TRFIA分析法并制备成试剂盒。通过试剂盒的灵敏度、准确度(稀释回收率)、特异性、精密度、稳定性和临床样本比对等实验评价其检测性能。结果:制备的双标记TRFIA试剂盒对β-CTX的检测灵敏度为0.025μg·L^(-1),线性范围为0.025~5.000μg·L^(-1),对N-MID的检测灵敏度为0.5μg·L^(-1),线性范围为0.5~200.0μg·L^(-1)。β-CTX平均稀释回收率为102.13%,N-MID平均稀释回收率为103.02%,与其他常见骨检测指标无明显交叉反应,特异性较强。β-CTX批内变异系数(CV)为5.81%~7.82%,批间CV为5.97%~8.02%;N-MID批内CV为6.05%~8.32%,批间CV为6.14%~8.56%;TRFIA试剂盒可在4℃稳定保存6个月,37℃稳定保存7 d。结论:建立的双标记TRFIA方法具有高灵敏度、高特异度、高准确率和方便快捷等优点,适用于大批量临床样品的检测。
毛骞陈翠翠梁焕坤刘鹏娥钟树海李来庆
关键词:双抗体夹心
微囊藻毒素LR时间分辨免疫荧光分析试剂盒
本实用新型公开了微囊藻毒素LR时间分辨免疫荧光分析试剂盒,包括试剂盒,试剂盒下端侧壁开凿有观察窗口,试剂盒位于观察窗口内安装有透明观察板,试剂盒位于观察窗口的上方固定有若干标记板,试剂盒内壁顶端的上下两侧均固定连接有若干...
朱伟陈思凡杨智聪刘华章张岩张嘉玮李文学钟礼信杨光宇潘焕新罗晓燕潘心红
犬瘟热病毒时间分辨免疫荧光分析方法的建立及初步应用被引量:7
2020年
为建立犬瘟热病毒(CDV)的时间分辨免疫荧光分析(TRFIA)方法,本研究将抗CDV的3H7单克隆抗体(MAb)作为包被抗体,Eu3+标记2G4 MAb作为检测抗体,建立了检测CDV抗原的双抗体夹心TRFIA分析法,并初步制备成试剂盒。通过灵敏度、准确度(稀释回收率)、特异性、精密度、稳定性、临床样本检测等实验评价其检测性能。结果显示,该双抗体夹心TRFIA分析法对CDV的检测灵敏度为0.58 ng/mL,线性范围在2.5 ng/mL^640 ng/mL,与荧光值有较强的剂量-反应关系;平均稀释回收率为100.48%,与其它常见病毒无明显交叉反应,特异性较强;批内CV值为5.60%~7.58%,批间CV值为5.67%~7.64%;TRFIA试剂盒可在4℃稳定保存半年,37℃稳定保存7 d。与RT-PCR法同时检测65份疑似CDV样本和15份健康样本,2种检测方法的符合率为100%。本研究建立的CDV TRFIA方法具有灵敏度高、特异性强、准确率好、方便快捷等优点,为大批量CDV临床样品的检测提供了可行技术手段。
陈翠翠赖宏锐梁焕坤钟树海黎杰星李来庆
关键词:犬瘟热病毒双抗体夹心时间分辨免疫荧光分析
时间分辨免疫荧光分析仪(FLI600)
1.本外观设计产品的名称:时间分辨免疫荧光分析仪(FLI600)。;2.本外观设计产品的用途:本外观设计产品用于免疫荧光检测,利用荧光采集及数据处理机构测定芯片反映信息。;3.本外观设计产品的设计要点:在于形状。;4.最...
张国锋陈洪华王学洋
时间分辨免疫荧光分析
1.本外观设计产品的名称:时间分辨免疫荧光分析仪。;2.本外观设计产品的用途:本外观设计产品用于免疫荧光检测,利用荧光采集及数据处理机构测定芯片反映的信息,确保检测的可靠性、稳定性和灵敏度,并能通过内置打印机直接打印检测...
许行尚杰弗瑞·陈赵大强朱宁
尿液中性粒细胞明胶相关脂质运载蛋白时间分辨免疫荧光分析方法的建立及临床应用评价
2017年
目的建立尿液中性粒细胞明胶相关脂质运载蛋白(NGAL)时间分辨免疫荧光分析方法并应用于临床检测。方法根据美国临床和实验室标准化协会(CLSI)制定的相关EP系列评价文件,使用本实验建立的时间分辨免疫荧光分析方法,对尿液NGAL的最低检测限、精密度、准确度、稳定性、分析测量范围、Hook效应、生物参考区间进行检测评价。通过检测健康体检人员及临床急性肾损伤患者尿液样本与Abbott ARCHITECT化学发光法进行比对,使用SPSS软件进行统计学分析。结果本实验所建立的方法最低检测限为1.5 ng/ml,批内不精密度与总不精密度均<6.0%,回收率为93%~107%,当NGAL浓度高达3×10~5ng/ml时,无Hook效应(5×10~5ng/ml亦不会出现假阴性),该方法与Abbott ARCHITECT化学发光具有很强的相关性(r=0.989),且37℃加速7 d荧光信号保留率均>80%。结论本实验室研究方法检测尿液NGAL各项性能指标均满足临床要求,可应用于急性肾损伤患者的诊断。
万光辉
关键词:分析方法双抗体夹心
单纯疱疹病毒IgM抗体(1+2型)时间分辨免疫荧光分析法的建立被引量:2
2016年
目的利用时间分辨免疫荧光分析法研制单纯疱疹病毒IgM抗体(1+2型)检测试剂盒。方法基于"捕获法"原理,在96孔酶标板上包被抗人IgM单克隆抗体,铕标记特异性单纯疱疹病毒1型和2型单克隆抗体作为示踪物,建立单纯疱疹病毒IgM抗体(1+2型)检测试剂,并对自研试剂盒的各项性能进行评价,与同类试剂盒进行方法学比对试验。结果自研试剂盒的灵敏度与ELISA比较有较大的提高,分析内变异系数≤4.29%,分析间变异系数≤6.15%;血清盘检测结果与该血清盘说明书提供的Gull IFA试剂的测试结果一致;与进口酶免法试剂同时检测293份临床样本,自制试剂盒的临床敏感性达100%,临床特异性达98.88%,Kappa值为0.940(P<0.001)。结论自研试剂盒灵敏度高、特异性强、精密度好,与商业化的同类产品检测结果一致性好,能满足临床应用的需要。
杨运森周健伟董志宁刘天才吴英松
关键词:单纯疱疹病毒IGM抗体时间分辨免疫荧光分析法

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吴英松
作品数:234被引量:605H指数:11
供职机构:南方医科大学
研究主题:试剂盒 时间分辨荧光免疫分析 恶性疟原虫 单克隆抗体 乳酸脱氢酶
李明
作品数:1,089被引量:2,571H指数:18
供职机构:中山大学
研究主题:恶性疟原虫 单克隆抗体 生物反应器 慢性乙型肝炎患者 基因表达
徐伟文
作品数:98被引量:305H指数:9
供职机构:南方医科大学检验与生物技术学院
研究主题:TRFIA 时间分辨荧光免疫分析 时间分辨免疫荧光分析 试剂盒 单链抗体
肖华龙
作品数:71被引量:282H指数:11
供职机构:南京医科大学
研究主题:时间分辨荧光免疫分析 时间分辨荧光免疫分析法 荧光免疫测定 肺移植 抗体
黄飚
作品数:225被引量:697H指数:15
供职机构:江苏省原子医学研究所
研究主题:时间分辨荧光免疫分析 胃蛋白酶原 时间分辨荧光免疫分析法 试剂盒 抗体