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- 日本血吸虫中国大陆株过氧化物氧化还原酶1的表达及生物学功能研究
- 2013年
- 目的制备重组日本血吸虫过氧化物氧化还原酶1(rSj Prx1)蛋白,研究其生物学功能。方法采用RT-PCR方法,从日本血吸虫成虫cDNA中扩增编码Sj Prx1蛋白的基因片段,并亚克隆入表达载体pET28a(+),构建重组表达质粒Sj Prx1-pET28a,转化E.coli BL21,用异丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷(IPTG)诱导表达rSj Prx1蛋白,通过镍柱亲和层析纯化rSj Prx1蛋白。采用生物化学方法分析rSj Prx1对底物H2O2进行还原的酶活性。用纯化的rSj Prx1蛋白免疫小鼠,酶联免疫法检测小鼠血清抗体水平,观察其免疫原性。通过Western blot观察rSj Prx1蛋白对血吸虫感染血清的免疫反应性。以纯化rSj Prx-1蛋白刺激巨噬细胞RAW264.7,通过流式分析观察RAW264.7细胞表面标志物CD16/32、CD206表达水平的变化,通过RT-PCR检测RAW264.7细胞内诱导型一氧化氮合酶与精氨酸酶表达水平的变化,采用细胞因子检测试剂盒分析巨噬细胞培养上清液中IL-12及IL-10水平的变化,以评价rSj Prx1蛋白的免疫调节功能。结果通过RT-PCR获得编码Sj Prx1蛋白的基因片段,并成功构建了重组表达质粒Sj Prx1-pET28a。含重组质粒Sj Prx1-pET28a的转化子细菌经IPTG诱导表达可溶性Sj Prx1蛋白。纯化的rSj Prx1蛋白具有氧化还原活性,可还原底物H2O2。rSj Prx1蛋白免疫小鼠可产生高效价的血清抗体,该蛋白能被日本血吸虫感染者血清、病兔及病鼠血清识别,而免疫血清同样可能识别来源于血吸虫成虫及虫卵的天然Sj Prx1蛋白。制备的rSj Prx1可诱导巨噬细胞高水平表达与M2型转化相关的IL-10、精氨酸及CD206。结论制备的rSj Prx1蛋白具有天然的酶学特性、抗原性和Th2型免疫调节功能,为进一步发展新的血吸虫病治疗药物和免疫调节方法奠定了基础。
- 金一柯雪丹余传信宋丽君王玠殷旭仁沈双陶永辉张英许永良杨静
- 关键词：基因克隆酶学活性免疫原性免疫调节
- 日本血吸虫中国大陆株酪氨酸激酶TK4保守区基因及其克隆表达方法和应用
- 本发明涉及日本血吸虫(中国大陆株)酪氨酸激酶TK4保守区(SjcTK4)基因的序列及其克隆表达方法和应用。本发明公开的SjcTK4基因具有序列1所示的核苷酸序列及编码相应的氨基酸序列。本发明还公开了SjcTK4基因在大肠...
- 曹建平臧炜徐馀信沈玉娟卢潍媛刘述先汤林华
- 文献传递
- 日本血吸虫中国大陆株酪氨酸激酶TK4保守区基因及其克隆表达方法和应用
- 本发明涉及日本血吸虫(中国大陆株)酪氨酸激酶TK4保守区(SjcTK4)基因的序列及其克隆表达方法和应用。本发明公开的SjcTK4基因具有序列1所示的核苷酸序列及编码相应的氨基酸序列。本发明还公开了SjcTK4基因在大肠...
- 曹建平臧炜徐馀信沈玉娟卢潍媛刘述先汤林华
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- 日本血吸虫中国大陆株硫氧还蛋白基因及其克隆表达方法和应用
- 本发明涉及日本血吸虫(中国大陆株)硫氧还蛋白(SjcTrx)基因的序列及其克隆表达方法和应用。本发明公开的SjcTrx基因具有序列1所示的核苷酸序列及编码相应的氨基酸序列。本发明还公开了SjcTrx基因在大肠杆菌中的表达...
- 曹建平韩海勃刘述先徐馀信汤林华沈玉娟李小红卢潍媛
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- 日本血吸虫中国大陆株SJCXWL06基因及其应用
- 本发明涉及生物基因领域，具体涉及日本血吸虫(中国大陆株)SjCXWL06基因的基因序列、真核表达质粒pcDNA3/SjCXWL06的构建及重组质粒免疫小鼠的保护性效果观察。SjCXWL06基因全长861bp，开放阅读框含...
- 曾少华汪世平吕志跃张加详周松华刘雪琴
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- 日本血吸虫中国大陆株SjPP基因及其克隆、表达和应用
- 本发明涉及日本血吸虫中国大陆株SjPP基因的基因序列及其克隆表达方法和应用。本发明公开的日本血吸虫中国大陆株SjPP基因具有序列1所示的核苷酸序列和相应的序列2的氨基酸序列。本发明应用实验室繁殖的洞庭湖种群东方田鼠阳性血...
- 林矫矫姚利晓傅志强刘金明朱传刚冯新港苑纯秀蔡幼民
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- 日本血吸虫中国大陆株琥珀酸脱氢酶铁硫蛋白的克隆与表达被引量：2
- 2006年
- 目的:克隆日本血吸虫琥珀酸脱氢酶铁硫蛋白(SjSDISP)全长编码基因,并对所获基因在大肠杆菌中进行表达。方法:根据基因库中SjSDISP对应的EST(BU804141)以及日本血吸虫成虫cDNA文库载体λgt11多克隆位点邻近核苷酸序列设计引物,以日本血吸虫成虫cDNA文库为模板,采用锚式PCR对SjSDISP基因不完整的3′端和5′端进行扩增、测序,用电子软件拼接成全长cDNA,将其克隆到表达载体pGEX-4T-1上,经琼脂糖凝胶电泳、限制性内切酶消化、PCR和测序鉴定后,选择阳性克隆进行表达及Western印迹分析。结果:获得1071bp全长cDNA,其理论推导为编码278个氨基酸残基的蛋白质。SjSDISP基因在大肠杆菌BL21中获得良好表达。该融合表达产物相对分子质量约为56kD,且能被日本血吸虫成虫抗原免疫血清特异识别。结论:编码日本血吸虫琥珀酸脱氢酶铁硫蛋白全长cDNA克隆及其在大肠杆菌中的表达获得成功。
- 余俊龙汪世平何卓戴橄姜孝新曾少华肖晓芹周松华李文凯徐绍锐吕志跃彭先楚
- 关键词：日本血吸虫基因克隆基因表达
- 日本血吸虫中国大陆株硫氧还蛋白基因及其克隆表达方法和应用
- 本发明涉及日本血吸虫(中国大陆株)硫氧还蛋白(SjcTrx)基因的序列及其克隆表达方法和应用。本发明公开的SjcTrx基因具有序列1所示的核苷酸序列及编码相应的氨基酸序列。本发明还公开了SjcTrx基因在大肠杆菌中的表达...
- 曹建平韩海勃刘述先徐馀信汤林华沈玉娟李小红卢潍媛
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- 日本血吸虫中国大陆株SjPP基因及其克隆、表达和应用
- 本发明涉及日本血吸虫中国大陆株SjPP基因的基因序列及其克隆表达方法和应用。本发明公开的日本血吸虫中国大陆株SjPP基因具有序列1所示的核苷酸序列和相应的序列2的氨基酸序列。本发明应用实验室繁殖的洞庭湖种群东方田鼠阳性血...
- 林矫矫姚利晓傅志强刘金明朱传刚冯新港苑纯秀蔡幼民
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- 日本血吸虫中国大陆株抱雌沟蛋白的基因序列
- 本发明涉及生物基因领域，具体涉及日本血吸虫抱雌沟蛋白的基因序列及在大肠杆菌中的表达。本发明根据已报道的曼氏血吸虫编码抱雌沟蛋白的基因SmGcp序列和编码日本血吸虫抱雌沟蛋白保守区的cDNA序列SjGcp1设计两对引物，分...
- 林矫矫金亚美朱建国冯新港吴详甫周元聪蔡幼民
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