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猪非典型瘟病毒、经典猪瘟病毒日本乙型脑炎病毒的三重荧光定量PCR检测方法的建立与应用
2025年
猪非典型瘟病毒(APPV)、经典猪瘟病毒(CSFV)、日本乙型脑炎病毒(JEV)均属于黄病毒科重要成员,从临床症状难以区分且三者的混合感染。为建立一种能快速鉴别检测APPV、CSFV、JEV的三重荧光定量PCR(qPCR)检测方法,本研究根据APPV 5'UTR基因、CSFV E2基因和JEV E基因分别设计引物与探针,将公司合成的重组质粒标准品pLKO.1-APPV-5'UTR、pLKO.1-CSFV-E2和pLKO.1-JEV-E按体积比1:1:1混合后均为(1×10^(8)拷贝/μL)作为模板,经反应条件优化,初步建立同时检测这3种病毒的三重q PCR方法。以本研究构建的APPV慢病毒、CSFV慢病毒、JEV慢病毒,以及猪流感病毒、猪Delta冠状病毒、猪流行性腹泻病毒、伪狂犬病病毒、猪圆环病毒2型、猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪轮状病毒、猪传染性胃肠炎病毒、诺如病毒的基因组为模板,采用建立的该方法检测,评估其特异性,结果显示,该方法仅能检测到APPV、CSFV、JEV的慢病毒,而其他病原检测结果均为阴性。选取1×10^(1)拷贝/μL~1×10^(8)拷贝/μL的混合质粒标准品和1×10^(1)TU/m L~1×10^(6)TU/m L的三种混合慢病毒液分别作为模板,采用本研究建立的方法检测,评估该方法的敏感性,结果显示,该方法对重组质粒pLKO.1-APPV-5'UTR、pLKO.1-CSFV-E2和pLKO.1-JEV-E的检测限均为1×10^(2)拷贝/μL,对3种慢病毒的检测限均为1×10^(2)TU/mL。以1×10~7拷贝/μL、1×10^(5)拷贝/μL、1×10~3拷贝/μL的质粒标准品混合物作为模板,分别进行组内和组间的重复性试验,结果显示,组内和组间重复性试验的变异系数(CV)均低于4.5%。利用本研究建立的三重qPCR和已发表的3种病原的SYBR Green qPCR检测方法对111份临床样品(75份猪肛拭子样品和36份猪组织病料样品)分别检测,结果显示,该三重qPCR方法与已发表的APPV、CSFV、JEV SYBR Green qPCR方法的总符合率分别为99.10%、100%、100%。本研究首次建立的检测APPV、CSFV、JEV的三重TaqMan qPCR�
许浩文陈军光马琼琼潘杏明郭美君朱伟群周莹珊董婉玉王晓杜
关键词:日本乙型脑炎病毒
日本乙型脑炎病毒新型检测方法研究进展
2024年
日本乙型脑炎病毒(Japanese encephalitis virus,JEV)是人兽共患病日本乙型脑炎的病原,对世界养猪业造成了巨大的经济损失。因此,建立快速可靠的JEV检测方法,有利于及时检测JEV和采取措施防控日本乙型脑炎。本文总结了近年来检测JEV的新型方法,包括分子生物学检测、免疫学检测、生物传感器检测等技术,以期为有效诊断及防治JEV感染提供技术指导。
何松汤德元曾智勇王彬黄涛毛茵茗周飘廖正波陈旭袁盛林胡雯雯周敏
关键词:日本乙型脑炎病毒
日本乙型脑炎病毒的线粒体靶向小分子化合物的筛选及鉴定
2024年
[目的]线粒体作为重要的能量代谢细胞器,不仅可以调控宿主先天免疫通路影响病毒复制,而且其生物学功能的改变与病毒生命周期密不可分。本文旨在确定抑制日本乙型脑炎病毒(JEV)的线粒体靶向化合物。[方法]通过体外CCK-8、间接免疫荧光、蛋白免疫印迹、RT-qPCR以及细胞因子检测等试验,对382种线粒体靶向化合物抗JEV的效果进行评价,筛选到的敏感药物在小鼠体内进行抗病毒效果验证。[结果]通过药物初筛,从382种药物中筛选出9种疑似抗JEV药物,进一步的体外分子试验筛选确定了其中3种药物对JEV复制有明显的抑制作用,分别为丙酮酸钠(sodium 2-oxopropanoate)、布喹那(brequinar)及松果菊苷(echinacoside)。动物试验结果表明,3种药物有效抑制了JEV在小鼠体内的增殖,给药组小鼠体重增加明显高于对照组,血液中的病毒含量更低,死亡率更低,细胞因子水平出现显著变化,其中以布喹那给药组最为明显。[结论]成功筛选出3种抗JEV的线粒体靶向化合物,为探究线粒体在病毒复制中发挥的作用提供了借鉴,也为抗JEV的临床药物研发提供了新思路。
李晓晗陈婧周斌
关键词:线粒体日本乙型脑炎病毒抗病毒药物筛选保护率
日本乙型脑炎病毒蛋白与宿主蛋白相互作用的研究进展被引量:1
2023年
日本脑炎病毒(JEV)是世界上最常见的蚊媒病毒脑炎病毒,严重危害养殖业以及人类健康,并且没有特异性疗法。迄今为止,日本脑炎(JE)只能通过疫苗预防,但是疫苗的预防也有一定的局限性。JEV主要编码3种结构蛋白和7种非结构蛋白,在病毒感染宿主过程中,病毒的结构蛋白和非结构蛋白与宿主蛋白相互作用。JEV的侵入、复制和致病性等与这些蛋白密切相关,因此可以从蛋白设计相应治疗JEV引起脑炎的方案。本文将JEV相关蛋白与宿主蛋白相互作用的机制进行综述,以期为今后JE的预防和治疗提供参考。
袁盛林汤德元陈阊峥罗柳陈旭廖正波
关键词:结构蛋白非结构蛋白宿主蛋白
日本乙型脑炎病毒感染宿主后引起相关信号通路变化的研究进展被引量:3
2023年
日本乙型脑炎(JE)是一种神经性人畜共患传染病,主要症状表现为中枢性神经炎症,尚未完全了解其致病机制,且目前尚无有效的治疗药物。近年来人们对于日本乙型脑炎病毒(JEV)感染后引起的相关信号通路变化进行深入研究,许多信号通路传导机制不断被发现,但仍缺乏系统性的探究,本文就JEV感染后引起的相关信号通路变化研究做综述总结,为JEV研究提供新的思路。
陈阊峥汤德元杨志刚晏仁潭韩超逸罗柳廖正波袁盛林陈旭
关键词:日本乙型脑炎病毒信号通路细胞凋亡免疫逃逸
日本乙型脑炎病毒3’UTR编码miRNA研究方法的建立及机制探究
日本乙型脑炎病毒(Japaneseencephalitisvirus,JEV)属于黄病毒科黄病毒属,为有囊膜的单股正链RNA病毒。JEV入侵中枢神经系统后引起严重的炎症反应,患者死亡率高达25%,愈后患者神经后遗症高达7...
陈后财
关键词:日本乙型脑炎病毒致病机制
日本乙型脑炎病毒侵染猪睾丸细胞诱发炎症反应的信号通路研究
日本乙型脑炎病毒(Japanese encephalitis virus,JEV)为黄病毒科黄病毒属成员,单股正链RNA病毒,基因组全长11kb,共编码3种结构蛋白(C、E、Pr M)与7种非结构蛋白(NS1、NS2A、...
高岩
关键词:日本乙型脑炎病毒TOLL样受体信号通路
基于基因编辑技术检测日本乙型脑炎病毒核酸的检测试剂盒及应用
本发明公开了基于基因编辑技术检测日本乙型脑炎病毒核酸的检测试剂盒及应用,本发明筛选得到一条活性较高的crRNA和一对具有高灵敏性和高特异性的扩增引物,利用CRISPR‑Cas12a检测系统结合一种双标记荧光探针(ROX)...
谢胜松赵书红李新云徐兵荣陶大刚潘文雅杨慧阮进学刘向东刘小磊
HMGB1在日本乙型脑炎病毒入侵中枢神经系统及血脑屏障破坏中的机制研究
日本乙型脑炎病毒(Japaneseencephalitisvirus,JEV)是一种蚊媒传播的人畜共患病原体,能导致日本乙型脑炎(Japaneseencephalitis,JE)。感染JEV能导致神经炎症和血脑屏障(Bl...
邹松松
关键词:中枢神经系统血脑屏障破坏高迁移率族蛋白B1
日本乙型脑炎病毒感染中枢神经系统研究进展被引量:6
2021年
日本乙型脑炎病毒(Japanese encephalitis virus,JEV)属于黄病毒科,黄病毒属,为单股正链RNA病毒。JEV可引起人畜共患的急性中枢神经系统传染病,威胁着人类健康和养殖业的发展。JEV最主要的致病机制是感染中枢神经系统,引起病毒脑炎和神经元死亡。现就近年来关于JEV感染中枢神经系统过程中,病毒跨越血脑屏障的途径、病毒感染引起的血脑屏障损伤、病毒引起的细胞凋亡的研究进行综合论述,为JEV致病机制以及防制研究提供参考。
韩超逸汤德元曾智勇黄涛王彬郭倩妤廖少山张森杨志刚晏仁潭
关键词:日本乙型脑炎病毒中枢神经系统血脑屏障细胞凋亡

相关作者

汤德元
作品数:520被引量:1,506H指数:19
供职机构:贵州大学动物科学学院
研究主题:规模化猪场 猪圆环病毒2型 PRV 诊治 猪繁殖与呼吸综合征
曾智勇
作品数:406被引量:1,033H指数:15
供职机构:贵州大学动物科学学院
研究主题:猪圆环病毒2型 规模化猪场 猪圆环病毒 PRV PCV2
黄涛
作品数:168被引量:388H指数:9
供职机构:贵州大学动物科学学院
研究主题:诊治 猪瘟病毒 PRV 猪瘟 原核
文心田
作品数:477被引量:972H指数:14
供职机构:四川农业大学
研究主题:基因芯片 试剂盒 胸膜肺炎放线杆菌 猪传染性胃肠炎病毒 检测试剂盒
王彬
作品数:240被引量:614H指数:10
供职机构:贵州大学动物科学学院
研究主题:猪圆环病毒2型 PRV 猪伪狂犬病病毒 伪狂犬病病毒 猪瘟病毒