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一种MuSK抗体检测方法及相应产品: 本申请涉及一种MuSK抗体检测方法及相应产品。本申请采用的多聚核苷酸是编码重组人Flag‑MuSK‑ECD蛋白的多聚核苷酸；所述重组人Flag‑MuSK‑ECD蛋白的序列如SEQ ID NO.2所示；所述多聚核苷酸的序列...; 余政张梅英

基于猫传染性腹膜炎病毒N蛋白单克隆抗体的竞争ELISA抗体检测方法的建立: 2025年; 为建立抗猫传染性腹膜炎病毒(feline infectious peritonitis virus,FIPV)抗体竞争ELISA检测方法,应用原核表达FIPV截短N蛋白[rFIPV N(aa17-172)]免疫BALB/c小鼠,经细胞融合和间接ELISA方法筛选能稳定分泌针对重组N蛋白(17-172 aa)的杂交瘤细胞株,制备腹水并进行纯化和鉴定。以重组N蛋白为抗原,纯化后的单克隆抗体为一抗建立抗体竞争ELISA方法。试验结果显示,纯化后重组N蛋白浓度为0.5 mg/mL,纯度大于85%,将其作为包被抗原,通过间接ELISA筛选出3株单克隆杂交瘤细胞株,命名为5C5、1F8和4A10。纯化的3株单克隆抗体效价均高于1∶102400。间接免疫荧光试验结果显示,3株单克隆抗体均能与FIPV发生特异性反应。抗体竞争ELISA方法最佳包被抗原浓度为1.25μg/mL,最佳抗体工作浓度为1∶128000。通过检测本实验室保存的94份FIPV阴性血清,确定本研究建立的抗体竞争ELISA方法阳性阻断率≥20.1%,阴性阻断率≤15.9%。对62份猫血清和本实验室前期建立的FIPV抗S蛋白的抗体竞争ELISA方法进行符合率比较,两种方法符合率为85.5%。本研究建立的抗N蛋白抗体竞争ELISA方法可用于FIPV抗体的检测,为FIP诊断提供了技术支撑。; 黄金龙杜吉革刘妍赵辉朱真陈小云王团结罗玉峰赵建军印春生; 关键词：N蛋白单克隆抗体竞争ELISA

一种血清2型鸭疫里默氏杆菌的ELISA抗体检测方法及其应用: 本发明涉及一种血清2型鸭疫里默氏杆菌的ELISA抗体检测方法及其应用，该方法是基于细菌脂多糖包被板，通过最佳反应条件优化、临界值确定、特异性试验、敏感性试验、重复性试验和临床试验，建立了血清2型鸭疫里默氏杆菌的间接ELI...; 于圣青陈美潼朱善元吴植郭容董洪燕

非洲猪瘟病毒pK205R蛋白间接ELISA抗体检测方法的建立: 2025年; 旨在建立可以检测非洲猪瘟病毒(ASFV)非结构蛋白pK205R抗体的血清学检测方法。基于杆状病毒表达系统构建重组杆粒BacmidpK205R,以纯化的pK205R蛋白为包被抗原,优化各项反应条件,建立间接ELISA抗体检测方法,验证方法的特异性、灵敏性、重复性,并对临床血清样品进行检测。结果显示:pK205R蛋白可以与ASFV阳性血清发生发应,ELISA方法的抗原包被浓度为50 ng/孔,4℃过夜包被,封闭液为2%牛血清白蛋白(BSA),37℃封闭1 h,待检血清以5%脱脂乳进行1∶200稀释,37℃孵育0.5 h;二抗工作浓度为1∶5000,37℃孵育0.5 h,37℃下显色10 min;该方法的阳性临界值为0.186(≥0.186为阳性,<0.186为阴性),且具有良好的特异性、灵敏性、可重复性,与商品化试剂盒符合率为79.92%。本研究成功建立pK205R非洲猪瘟间接ELISA抗体检测方法,为进一步优化和研制非洲猪瘟抗体的快速检测试剂盒提供了参考。; 王燕邹艳丽何佳依刘珊苗雨润任炜杰王振忠白昀陈欢钱莺娟贾红吴晓东冯志新郑龙三; 关键词：非洲猪瘟病毒间接ELISA 杆状病毒表达

口蹄疫病毒VP1蛋白的原核表达及间接ELISA抗体检测方法的建立: 2025年; 为建立口蹄疫病毒(FMDV)快速、高效的血清学检测方法,根据GenBank收录的FMDV-O型国内流行株VP1基因(GenBank登录号:JN998085.1),构建重组质粒pCold TF-VP1,通过原核表达系统获得VP1蛋白。通过SDS-PAGE和Western blot鉴定蛋白表达和反应原性后,将纯化后的蛋白作为抗原,建立FMDV抗体间接ELISA方法。结果显示,重组质粒成功转入大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞中,并以可溶性蛋白形式表达。建立的FMDV抗体间接ELISA方法其抗原包被最佳浓度0.5μg/mL,使用1%BSA溶液封闭效果最佳,血清最佳稀释度1∶600,酶标二抗最佳工作浓度1∶8000,且具有良好的特异性、灵敏性和重复性,与商品化试剂盒比较,符合率为90.2%。本试验在大肠杆菌中成功表达并纯化了FMDV的VP1蛋白,并建立了FMDV抗体间接ELISA方法,为口蹄疫的监测、诊断及试剂盒的开发提供了参考。; 张芳源杜文琪杨大为李桂梅单虎; 关键词：口蹄疫病毒 VP1蛋白原核表达间接ELISA

猪轮状病毒VP6蛋白截短表达及间接ELISA抗体检测方法的建立: 2025年; 【目的】通过构建猪轮状病毒(Porcine rotavirus,PoRV)VP6截短蛋白(第177—382位氨基酸)的原核表达系统,建立检测PoRV抗体的间接ELISA方法,为PoRV血清学监测提供检测手段。【方法】设计1对针对截短VP 6基因的特异性引物,以pMD19-T-VP6重组质粒为模板扩增VP 6截短基因。利用pET-32a(+)原核表达载体构建pET32a-PoRV-VP6重组质粒。以大肠杆菌Rosetta(DE3)感受态细胞为宿主菌,对重组质粒进行诱导表达,并优化表达条件。利用His标签镍柱对pET32a-PoRV-VP6重组蛋白进行纯化,以此作为包被抗原,通过单一变量法优化抗原包被浓度、血清稀释度、二抗稀释度及一抗、二抗孵育时间等工作条件。确定间接ELISA方法的阴阳性临界值,检验其特异性、敏感性、重复性及符合性,并对2021—2024年采自贵州地区不同猪场的384份临床猪血清进行检测。【结果】试验成功构建pET32a-PoRV-VP6重组表达载体,实现VP6蛋白的原核截短表达,蛋白分子质量大小约40 ku,具有良好的反应原性。对间接ELISA方法条件进行优化,确定VP6包被抗原最佳浓度为2μg/mL、阳性血清稀释度为1∶100、血清样品和二抗孵育时间均为60 min、TMB反应时间为10 min、阴阳性临界值(D 450 nm)为0.410。建立的间接ELISA方法与猪流行性腹泻病毒(PEDV)、猪冠状病毒(PDCoV)、猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)等病毒标准阳性血清不发生反应,特异性强;批内和批间重复试验变异系数均<10%,重复性好;与PoRV A型ELISA抗体检测试剂盒的总体符合率为96.80%。间接ELISA方法检测临床384份猪血清样品结果显示,样品总阳性率为28.91%。【结论】本研究成功实现了PoRV VP6蛋白的截短表达,并建立了PoRV间接ELISA抗体检测方法,适用于临床PoRV抗体检测和疫苗免疫效果评价。; 潘向英曾智勇梁海英汤德元王彬叶泥田红利边孟婷柳佳佳黄书; 关键词：截短表达间接ELISA

猪急性腹泻综合征冠状病毒N蛋白间接ELISA抗体检测方法的建立及初步应用: 2025年; 为建立一种猪急性腹泻综合征冠状病毒(SADS-CoV)血清抗体的快速检测方法,本研究首先经PCR扩增SADS-CoV N基因,纯化鉴定后克隆至表达载体pET-32a(+),构建重组质粒pET-32a-N。重组N蛋白诱导表达并通过SDS-PAGE和Western blot鉴定后,采用纯化的重组N蛋白作为包被抗原,以兔抗猪HRP-IgG作为二抗,利用方阵滴定法优化各反应条件,建立了一种以SADS-CoV N蛋白为靶标的检测SADS-CoV血清抗体的间接ELISA方法,并对此方法的敏感性、特异性、重复性及临床应用价值进行鉴定。SDS-PAGE及Western blot结果显示,重组表达的N蛋白约为70 ku,且具有良好的反应原性。采用该方法检测SADS-CoV阳性血清抗体效价可达1∶3 200,并且与猪流行性腹泻病毒(PEDV)、猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)、猪丁型冠状病毒(PDCoV)、猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒(PRRSV)、猪轮状病毒(PoRV)和猪圆环病毒(PCV)阳性血清均无交叉反应,具有良好的敏感性和特异性。批内和批间重复性试验的变异系数均小于10%,具有较好的重复性。利用该方法和间接免疫荧光方法(IFA)分别对50份猪临床血清样品进行检测,结果显示二者的总符合率为98%。综上,本研究建立了一种基于SADS-CoV N蛋白的间接ELISA抗体检测方法,可用于临床SADS-CoV血清抗体检测以及流行病学的监测,对防控SADS-CoV的流行具有重要意义。; 曾苗苗杨小曼张鑫刘大凯时洪艳张记宇张燎原陈建飞冯廷帅李修文石达冯力; 关键词：N蛋白间接ELISA

猪肺炎支原体重组蛋白p46真核表达及间接ELISA抗体检测方法的建立: 2025年; 为了建立一种猪肺炎支原体抗体间接ELISA检测方法,构建pCAGGS-P46真核表达载体,转染至HEK293F细胞中进行真核表达,纯化后采用SDS-PAGE鉴定蛋白纯度及分子质量大小,经Western blot检测重组p46蛋白特异性和反应原性。以重组蛋白p46为包被抗原,优化反应条件,确定阴性、阳性临界值,建立猪肺炎支原体抗体间接ELISA检测方法,并对方法的敏感性、稳定性、特异性进行评价。结果显示,p46重组蛋白分子质量大小为48.0 ku,纯度在90%以上,特异性和反应性良好。建立的间接ELISA检测方法最优检测条件为:抗原包被浓度为5μg/mL,采用本实验室封闭液37℃封闭120 min,待检血清1∶50稀释,37℃孵育30 min,二抗稀释度为1∶10000,37℃孵育30 min,TMB室温显色20 min。结果判定标准为:OD 450>0.2887为阳性,OD 450<0.2487为阴性,0.2487≤OD 450≤0.2887为可疑。建立的基于猪肺炎支原体p46蛋白的猪肺炎支原体抗体间接ELISA检测方法具有良好的敏感性、特异性及稳定性,与IDEXX的间接ELISA检测试剂盒检测的阴性、阳性血清符合率分别为100%、93.3%,研究结果为猪肺炎支原体抗体检测和免疫评价提供了技术支持。; 许世萱孙亚宁邢云瑞杨苏珍郭军庆乔松林陈鑫鑫张改平; 关键词：猪肺炎支原体间接酶联免疫吸附试验

AAV9中和抗体检测方法和试剂盒: 本发明涉及重组腺相关病毒中和抗体的检测领域。具体而言，本发明涉及一种检测重组腺相关病毒AAV9的中和抗体的测定方法和相关试剂盒。; 吴小兵余双庆马文豪

猪圆环病毒3型阻断ELISA抗体检测方法的建立与应用: 2025年; 为建立猪圆环病毒3型(porcine circovirus type 3,PCV3)阻断ELISA抗体检测方法,应用大肠杆菌表达系统表达PCV3衣壳(capsid,Cap)蛋白,制备了2株Cap蛋白单克隆抗体(1D8和3B5),测定了单克隆抗体的解离常数(dissociation constant,KD);选择亲和力高的1D8用辣根过氧化酶(horseradish peroxidase,HRP)标记,然后基于Cap蛋白和HRP标记的单克隆抗体1D8建立了PCV3阻断ELISA抗体检测方法。结果显示:当血清阻断率(present inhibition,PI)≥29.3%时,判定PCV3抗体阳性;当血清PI<23.4%时,判定PCV3抗体阴性;当23.4%≤PI<29.3%时,判为可疑。建立的方法与猪圆环病毒2型、猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪瘟病毒等病原抗血清无交叉反应;检测敏感性为1:160,批内和批间重复试验的变异系数分别为0.87%~6.64%和1.03%~9.33%,与Western-blot检测的符合率为95.5%。用建立的阻断ELISA方法检测2021—2024年间从河北省部分猪场采集的205份血清,发现PCV3抗体阳性率为28.8%(59/205),其中仔猪、育肥猪、母猪的抗体阳性率分别为30.0%、32.8%和19.5%。结果表明,本研究建立的PCV3阻断ELISA抗体检测方法可用于PCV3感染的血清学诊断与流行病学调查,具有极大的开发应用潜力。; 侯佳璐任静王亚文袁晨马天天杨柳李清艳李清艳; 关键词：CAP蛋白单克隆抗体阻断ELISA

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