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- 抑制性消减杂交技术(SSH)在动物免疫相关基因方面的研究进展
- 抑制性消减杂交技术(SSH)以抑制PCR方法为基础结合消减杂交,是新兴的一种用于高效分离差异基因的手段,因其具有敏感度高、假阳性率低、操作简便等优点,广泛应用于动物免疫领域。本文综述了SSH技术原理、应用概况,SSH技术...
- 谷笑笑张娇王振华潘康成
- 关键词：免疫相关基因
- 抑制性消减杂交技术(SSH)在动物免疫相关基因方面的研究进展被引量：1
- 2018年
- 对于一个生物个体来讲,尽管所有细胞的基因组成是相同的,但在不同的细胞、同一细胞不同的分化阶段或受到外界的不同刺激时,相关基因的表达及蛋白质的功能都会有所差异（[1]）。基因的差异表达是调控生物生命活动的核心机制,个体的生长发育和衰老死亡,以及对各种环境因子的应答,本质上都离不开差异基因的表达。为了阐明各种生命过程的分子机制,必须对差异表达基因进行分离、克隆并进一步研究,抑制性消减杂交（Suppression subtractive hybridization,SSH）应运而生,
- 谷笑笑张娇王振华潘康成
- 关键词：动物免疫免疫相关抑制性消减杂交技术SSH相关基因
- 抑制性消减杂交技术在昆虫滞育中的利用和展望
- 2014年
- 滞育是多数天敌昆虫固有的遗传属性,掌握天敌昆虫滞育诱导、维持和解除技术,能及时将扩繁的天敌昆虫以滞育状态进行储存,在释放前再打破滞育使其进入活跃状态以防控害虫。开展天敌昆虫滞育研究,还有助于掌握其发育特点与发生动态,提高害虫防治效率,加深对天敌昆虫发育机制的认识,探寻昆虫对环境适应机制及进化途径。因此,滞育调控及机理研究成为近年来昆虫学研究的一个重要领域。抑制性消减杂交技术(Suppression Subtractive Hybridization,SSH)是近年来发明的用于挖掘差异性调控或特异表达c DNA探针和构建文库的一种方法。本文在总结抑制性消减杂交技术的测试原理及其优越性的基础上,归纳了该技术在昆虫滞育研究中的应用,概述了通过构建抑制性消减文库,在鞘翅目、直翅目、鳞翅目、双翅目等昆虫中探明的滞育差异表达基因,进一步探讨了差异表达基因与滞育的关系。随着昆虫全基因组测序和转录组测序的信息增加,抑制性消减杂交技术将更广泛的应用于昆虫学各个领域的差异基因的筛选与挖掘,促进昆虫分子生物学科学体系的发展。
- 蒋莎张礼生黄建陈红印黄凤霞齐晓阳任小云
- 关键词：差异表达基因昆虫滞育
- 抑制性消减杂交技术在昆虫滞育中的利用和展望
- 滞育是多数天敌昆虫固有的遗传属性,掌握天敌昆虫滞育诱导、维持和解除技术,能及时将扩繁的天敌昆虫以滞育状态进行储存,在释放前再打破滞育使其进入活跃状态以防控害虫.开展天敌昆虫滞育研究,还有助于掌握其发育特点与发生动态,提高...
- 蒋莎张礼生黄建陈红印黄凤霞齐晓阳任小云
- 关键词：抑制性消减杂交技术昆虫滞育发育机制环境适应性
- 抑制性消减杂交技术及其在植物抗病性研究中的应用
- 2014年
- 在植物的不同生长、发育、繁殖阶段和不同类型细胞中,基因的表达各不相同。近几年发展起来的研究基因差异表达的方法很多,抑制消减杂交(Suppression Subtractive Hybridization)是其中一项基于转录水平,结合消减杂交与PCR技术的分离差异表达基因的方法,其原理可概括为消减同源序列,富集差异序列。该技术报道于1996年,在一个循环过程中分离差异表达基因尤其是低丰度表达的基因,虽然存在一些缺点,但以其较高的灵敏性、容易操作、假阳性率低、重复性好等优点,在分离及其克隆差异表达基因研究方面得到了广泛的应用。近几年,此技术在植物抗病基因的诱导表达方面已得到了应用,目前大多数研究主要集中在文库构建及筛选等方面。文章对抑制性消减杂交(SSH)技术的原理、优缺点及其在植物抗病性研究机制中应用进展进行了综述。
- 菊花白晨李晓东包南帝娜郭永青
- 关键词：抑制消减杂交植物基因差异表达
- 应用抑制性消减杂交技术从枳中筛选根特异表达基因被引量：3
- 2014年
- 为筛选分离植物根组织特异表达基因,以枳根RNA为试验组,叶RNA为驱动组,构建了枳根消减文库。从该消减文库中共获得有效序列1 177个,其片段长度主要分布在200~500 bp;序列拼接后得到455个非重复序列,其中245个与已知基因匹配,具有结合功能、催化活性和转运活性等生物学功能,可参与植物的代谢、细胞生长、个体发育、应激反应等生物学过程。实时定量PCR检测结果显示这些基因中的主要乳液蛋白、早期结瘤素样蛋白和贝壳杉烯酸氧化酶等基因在根中高表达。
- 姚利晓何永睿许兰珍雷天刚彭爱红邹修平陈善春
- 关键词：抑制性消减杂交技术定量PCR
- 抑制性消减杂交技术在细菌活的非可培养状态研究中的应用
- 2014年
- 在基因分离与克隆中,构建各种cDNA文库是近些年发现新基因及研究基因功能常用的基础工具之一。其中,抑制性消减杂交技术(SSH)是一种高效分离差异表达基因的方法,在分离筛选细菌活的非可培养状态(VBNC)与正常菌株差异基因中,应用这种研究方法是研究细菌VBNC状态菌株毒力、致病性和耐药性及菌株遗传分化关系的重要途径。文章旨在介绍SSH构建消减cDNA文库在原核生物中的应用及对其在细菌VBNC状态新基因筛选中的应用前景,并提出了展望。
- 李文博谭平平李影袁翔王甲慧
- 关键词：CDNA文库基因筛选
- 抑制性消减杂交技术在甲壳动物中的应用研究进展
- 2013年
- 抑制性消减杂交技术是一种高效检测差异表达基因的方法。综述了抑制性消减杂交在甲壳动物抗病毒机理、抗菌机理、免疫基因、发育分化基因和抗逆机理研究中的应用。
- 郜卫华谭北平麦康森迟淑艳刘泓宇董晓慧杨奇慧
- 关键词：抑制性消减杂交甲壳动物克隆
- 抑制性消减杂交技术在细菌活的非可培养状态研究中的应用被引量：2
- 2013年
- 在基因分离与克隆中,构建各种cDNA文库是近些年在发现新基因及研究基因功能常用的基础工具之一。其中,抑制性消减杂交技术是一种高效分离差异表达基因的方法,在分离筛选细菌活的非可培养状态与正常菌株差异基因中,应用这种研究方法是研究细菌VBNC状态株毒力、致病性和耐药性及菌株遗传分化关系的重要途径。本文旨在介绍SSH构建消减cDNA文库在原核生物中的应用及对其在细菌VBNC状态新基因筛选中的应用前景进行综合论述,并对其进一步研究提出了展望。
- 李文博谭平平李影袁翔王甲慧
- 关键词：CDNA文库抑制性消减杂交技术
- 应用抑制性消减杂交技术筛选的肾癌相关基因SIPL1对肾癌细胞生物学功能和耐药的影响
- 2013年
- 目的应用抑制性消减杂交技术（SSH）筛选人肾癌差异表达基因，并探讨其对。肾癌生物学功能和耐药的影响。方法从人肾透明细胞癌细胞株RLC-310和正常细胞株HK-2中提取mRNA，应用SSH技术获得肾癌细胞差异表达基因文库，筛选差异表达最明显的基因。以逆转录聚合酶链反应（RT．PCR）和Westernblot法验证差异表达基因的表达。构建干扰载体沉默人肾癌RLC-310和GRC-1细胞中差异表达基因SIPL1的表达，分别采用细胞计数法、四甲基偶氮唑蓝（MTT）法和裸鼠移植瘤实验检测RLC-310和GRC-1细胞的增殖能力，流式细胞仪检测细胞周期，MTT法检测对阿霉素的耐药性。结果构建了人肾癌细胞差异表达基因文库，筛选了12种差异表达基因，其中SIPL1基因的表达差异最为明显。RT—PCR和Western blot法验证SIPL1基因在人肾癌细胞系及肾透明细胞癌组织中高表达。SIPL1shRNA重组质粒稳定转染至RLC-310和GRC-1细胞后，可明显下调SIPL1蛋白的表达。与转染阴性对照组细胞比较，转染SIPL1shRNA组细胞的增殖能力均明显下降（P〈0．05），肿瘤形成能力明显减弱[转染SIPL1shRNA组和阴性对照组RLC-310细胞的裸鼠移植瘤重量分别为（0．22±0．07）g和（0．85±0．06）g，转染SIPL1shRNA组和阴性对照组GRC-1细胞的裸鼠移植瘤重量分别为（0．32±0．07）g和（1．21±0．11）g，均P〈0．05]，G0／G1期细胞的比例增加[转染SIPL1shRNA组和阴性对照组RLC-310细胞中Go／G，期细胞的比例分别为（71．13±4．58）％和（53．27±3．34）％，转染SIPL1shRNA组和阴性对照组GRC-1细胞中Go／G，期细胞的比例分别为（73．83±3．97）％和（59．33±3．03）％，均P〈0．05]，对阿霉素的敏感性提高（P〈0．05）。沉默SIPL1基因表达可以使AKT通路失活，同时细胞周期抑制蛋白p27^Kip1和p21^Cip1的表达增加。结论应用SSH技术成功筛选出肾癌差异表达基�
- 李春燕姚安梅常小宁郭亚焕徐瑞
- 关键词：肾肿瘤抑制性消减杂交
