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彗星实验方法的优化及影响因素的分析: 2024年; 目的为了更有效地检测细胞DNA损伤,对彗星实验的影响因素进行优化并建立阳性对照。方法以传统碱性彗星实验为基础,对制胶方法、凝胶浓度、琼脂糖溶剂、裂解时间、细胞密度和电泳电压加以优化。以过氧化氢(H_(2)O_(2))作为DNA损伤诱导剂诱导HL-60细胞作为该实验的阳性对照。结果优化后的实验结果显示,制胶方法由三步法进步为两步法,以PBS为琼脂糖溶剂,0.8%正常熔点琼脂糖制备底层胶,0.7%低熔点琼脂糖与细胞悬液混合作为第二层胶,制胶效果好,操作更简单省时,较好地解决了脱胶问题。裂解1 h,1 V/cm电压电泳,获得了具有代表性的彗星图像,结果易于判读,能有效避免假阳性结果。并对不同浓度H_(2)O_(2)诱导的HL-60细胞DNA损伤情况进行比较,成功建立了彗星实验的阳性对照。结论与传统方法相比,优化后的彗星实验方法成本更低,更简单、快速、准确,重复性也更好,能够快速检测细胞中的DNA损伤。; 范南英张鹏; 关键词：彗星实验 HL-60

一种彗星实验方法: 本发明公开了一种彗星实验方法，属于单细胞检测技术领域。其通过本发明设计的用于彗星实验方法的载片，其实验区（11）的上表面设有磨砂层Ⅱ，实验区（11）内设有若干个阵列排布的光滑实验窗口（12）；所述盖片Ⅰ（2）一对一覆盖在...; 李远张宏宾曹飞高亮

一种用于彗星实验的载片: 本实用新型公开了一种用于彗星实验的载片，属于医药器械技术领域。其实验区（11）的上表面设有磨砂层Ⅱ，实验区（11）内设有若干个阵列排布的光滑实验窗口（12）；所述盖片Ⅰ（2）一对一覆盖在光滑实验窗口（12）的上方；所述盖...; 李远张宏宾曹飞高亮

一种小型彗星实验装置: 本实用新型涉及一种小型彗星专用实验装置，属于分子生物实验技术领域；所要解决的技术问题为：提供一种小型彗星实验装置；解决该技术问题采用的技术方案为：包括实验水槽，所述实验水槽的两侧对称设置有操作台，所述操作台内嵌有一对电极...; 边高鹏; 文献传递

基于彗星实验的大黄素型单蒽酮体内外毒性研究被引量：4: 2020年; 目的:采用人肝细胞HepaRG构建的2D、3D细胞培养模型和大鼠体内重复给药体系开展彗星实验,探讨不同模型对大黄素型单蒽酮毒性评价结果的影响。方法:2D和3D HepaRG细胞培养模型给予不同浓度的单蒽酮处理24、48、144 h后,采用彗星实验检测DNA损伤程度。25只雄性SD大鼠,按体质量随机分为0.5%羧甲基纤维素钠(CMC-Na)对照组、阳性对照甲磺酸乙酯(EMS)200 mg·kg^-1组及单蒽酮6.5、65、650 mg·kg^-1组,每组5只。对照组和单蒽酮各剂量组大鼠连续14 d灌胃给药,给药体积为15 mL·kg^-1,阳性对照组大鼠连续3d灌胃给予EMS。末次给药3 h后麻醉取血及肝组织用于彗星实验。结果:单蒽酮质量浓度为10μg·mL^-1及以下时对2D培养的HepaRG细胞无明显损伤作用。而当单蒽酮质量浓度为10μg·mL^-1时,在3D模型中培养的肝细胞尾DNA含量及Olive尾矩(OTM)与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05,P<0.01),且存在一定剂量相关性。体内彗星实验结果表明,单蒽酮650 mg·kg^1组大鼠肝细胞尾DNA含量及OTM均显著高于对照组(P<0.01),且各剂量组间存在一定剂量效应趋势;而各组大鼠的外周血有核细胞的尾DNA含量及OTM与对照组比较差异无统计学意义。结论:单蒽酮经3D培养模型代谢后存在肝细胞毒性,对大鼠肝细胞DNA损伤程度强于外周血细胞,推断其毒性与单蒽酮在肝脏中的代谢产物有关。; 文海若颜玉静王曼虹赵婷婷杨莹马双成汪祺; 关键词：肝毒性彗星实验

一种彗星实验中的换液方法: 本发明涉及分子生物学技术领域，尤其是一种彗星实验中的换液方法，包括以下步骤：S1、第一层胶的制备，将做好标记的载玻片放在50℃的干浴锅上1‑3分钟后，取煮沸后冷却的试剂M 200ul滴在同样预热的载玻片的磨砂面，迅速盖上...; 陈学建王婷婷杨安易婷婷张高英; 文献传递

SD大鼠灌胃盐酸丙卡巴肼与乌拉坦的多脏器碱性彗星实验研究被引量：3: 2019年; 目的:通过碱性彗星实验评价盐酸丙卡巴肼(PCZ)和乌拉坦(EC)对大鼠不同脏器的DNA损伤效应,验证多脏器碱性彗星实验的可行性。方法:取30只SD大鼠按体质量随机分成6组,每组5只,分别为阴性对照组(超纯水)、PCZ 75 mg/kg组、PCZ150 mg/kg组、EC 400 mg/kg组、EC 800 mg/kg组以及阳性对照组(N-乙基-N-亚硝基脲,40 mg/kg)。大鼠连续灌胃给药4 d,实验期间观察其临床症状并记录体质量,末次给药后3 h内处死大鼠,称肝、肾、肺质量,收集肝、肾、肺及外周血淋巴细胞,制备成单细胞悬液进行碱性彗星实验。样本分别经裂解、解旋、电泳、染色等步骤后,使用Komet 6.0软件进行图像分析尾DNA含量百分率(尾DNA%)、尾距。结果:与阴性对照组比较,PCZ 75、150 mg/kg组和阳性对照组大鼠给药4 d后体质量和肝、肾质量均明显降低(P<0.05或P<0.01),EC 800 mg/kg组大鼠给药4 d后仅体质量明显降低(P<0.05或P<0.01),其余差异均无统计学意义(P>0.05)。与阴性对照组比较,PCZ 75、150 mg/kg组和阳性对照组大鼠肝、肾、肺和外周血淋巴细胞的尾DNA%和尾距均明显增加(P<0.05或P<0.01),其中PCZ对肝、肺的影响程度更明显;EC 800 mg/kg组大鼠肝、肾和外周血淋巴细胞的尾DNA%和尾距均明显增加(P<0.05或P<0.01),EC 400 mg/kg组大鼠仅肾组织的尾DNA%和尾距明显增加(P<0.05)。结论:PCZ诱导的细胞DNA损伤较强,肝和肺是其遗传毒性作用的易感器官;EC诱导的细胞DNA损伤相对较弱,肾是其遗传毒性作用最敏感的器官。; 文海若陈高峰任璐毛志慧宋捷汪祺; 关键词：SD大鼠

彗星实验技术及其应用被引量：6: 2018年; 彗星实验是瑞典科学家Ostling和Johanson于1984年发明的检测毒物DNA损伤效应的方法。它经历了从最初的微电泳技术、中性彗星实验、碱性彗星实验、酶切彗星实验和双向垂直彗尾彗星实验等不断完善的发展过程。在毒理学、遗传学和环境生态科学等领域有着重要的应用,是经济合作与发展组织(OECD)和欧洲食品安全局等国际组织推荐的测定遗传毒性的方法之一。彗星实验的关键点包括单细胞悬液的制备、细胞裂解液的成分与比例,低熔点琼脂糖凝胶的浓度,电泳条件等。在典型应用领域,如蚯蚓、鱼、两栖动物、鼠和人的彗星实验很难找到标准实验方案。成功的彗星实验还需关注,实验设计时必须包括阳性对照,结果表述时必须有图为证,实验方案可能因物种或细胞而异。; 李岗吴声敢蔡磊明; 关键词：彗星实验单细胞凝胶电泳 DNA损伤遗传毒性

彗星实验方法学的改进用于DNA损伤检测被引量：7: 2018年; 目的对国际公认的经典彗星实验(单细胞凝胶电泳实验)进行方法学改进,使之更方便于临床检测。方法选用5例范可尼贫血的阳性标本作为阳性对照,30例初生婴儿的脐带血作为阴性对照,同时应用经典彗星实验以及改进版彗星实验进行比对,验证两种方法的可行性。选用15例临床标本与中国医学科学院放射医学研究所同步进行实验,然后实验结果进行对比对,验证改进版彗星实验的准确度以及符合度。结果与经典彗星实验相比,改进版彗星实验检测结果的准确度达到100%,符合度达到100%。结论与经典的彗星实验相比,改进版彗星实验操作更加简单、省时;结果客观、准确、稳定,且重现性和准确性好,图像清晰,容易判读;成本更加低廉,操作安全,更加环保,推荐使用该方法作为DNA损伤的检测方法。; 崔丽娟张娟程宇刘娟李玲梁超陈忠傅廷娇; 关键词：DNA损伤

彗星实验在不明原因复发性流产中对精子DNA完整性的研究被引量：2: 2018年; 目的:采用单细胞凝胶电泳技术(又称彗星实验)对精子DNA完整性与不明原因复发性流产的相关性进行探讨,进一步明确精子DNA损伤的类型与不明原因复发性流产的关系。方法:收集2014年6月—12月在四川大学华西第二医院妇产科就诊的不明原因复发性流产女性的配偶作为流产组;同时收集有正常生育史的男性作为生育组。采用精液常规分析、中性彗星实验、碱性彗星实验等技术,检测精液常规参数和精子DNA完整性。同时分别人为诱导精子DNA单、双链损伤作为对照。结果:流产组和生育组各纳入50例男性,年龄差异无统计学意义,精液常规参数对比,流产组的精子浓度低于生育组[(91.0±56.8)×10~6/ml,(121.0±50.4)×10~6/ml](P<0.05),前向运动[(52.5±13.5)%,(54.3±10.8)%]、总活力[(58.9±12.7)%,(61.3±10.5)%]、正常形态精子百分率[(3.4±2.6)%,(3.3±2.2)%]两组差异均无统计学意义(P>0.05)。两组的精子DNA完整性对比,流产组比生育组拥有更高的精子DNA碎片指数[(29.5±4.3)%,(18.2±3.5)%]和精子单链DNA损伤率[(19.0±3.8)%,(8.9±3.0)%](P<0.05)。两组的精子双链DNA损伤率[(10.5±3.4)%,(9.2±2.4)%]未见差异(P>0.05)。结论:精子DNA损伤率过高,特别是DNA单链损伤过多可能是导致不明原因复发性流产的相关原因之一。精子常规参数可能对提示不明原因复发性流产的病因价值较小。; 覃太洲徐克惠刘莉许文明李福平; 关键词：复发性流产精子 DNA完整性彗星实验

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