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一种基于RNA干扰原理的新型核酸
一种基于RNA干扰原理的交替核酸双链,其序列的碱基由腺嘌呤A、鸟嘌呤G、胸腺嘧啶T、尿嘧啶U、和胞嘧啶C组成,各碱基通过磷酸核糖和磷酸脱氧核糖交替连接而成。该双链可以形成完全配对或大部分配对,各链的长度为18‑30碱基。...
段为钢侯肖霖
文献传递
LLC-PK1细胞中LDHB蛋白的体外表达及RNA干扰
2019年
为了观察与猪流行性腹泻病毒(PEDV)NSP12互作蛋白乳酸脱氢酶B(LDHB)的体外表达情况和RNA干扰效果,构建了真核表达载体pcDNA4.0-LDHB-3*Flag,并在Vero细胞中过表达LDHB,发现在37 kDa处有大相符的明显条带。设计的2条干扰RNA能降低LLC-PK1细胞中LDHB的mRNA和蛋白质水平,经one-way ANOVA检验证明干扰实验组2-ΔΔct的平均值显著低于对照组(P<0.05)。该结果为研究LDHB在PEDV感染LLC-PK1和Vero细胞过程中的作用提供了基础数据。
罗依然周书亭杨亮刘源平蒋升瑶叶力波利·达吾力王子泓罗渝宵邹霭萱崔立杨志彪
关键词:真核表达小RNA干扰
RNA干扰MMP-2基因表达对结直肠癌细胞生物学特性的影响被引量:3
2019年
目的:探讨RNA干扰基质金属蛋白酶2(MMP-2)基因表达对结直肠癌细胞生物学特性的影响。方法:收集结直肠癌病人的结直肠癌组织及正常的癌旁组织,Western blotting检测MMP-2表达水平。取结直肠癌细胞SW620作为对照组,将MMP-2 siRNA、siRNA control转染至结直肠癌细胞中,Western blotting检测转染48 h后MMP-2 siRNA组、siRNA control组和对照组细胞中MMP-2水平,MTT法检测各组细胞存活情况,流式细胞术检测各组细胞凋亡变化,Western blotting检测各组细胞中B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)、β-连环蛋白(β-catenin)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、下游靶基因C-myc、细胞周期蛋白D1(cyclin D1)水平。结直肠癌细胞与Wnt/β-catenin信号通路抑制剂FH535作用后,测定抑制剂组和未处理组(不加抑制剂)细胞增殖、凋亡变化,同时检测细胞中Bcl-2、β-catenin、Bax、C-myc、cyclin D1蛋白变化。结果:结直肠癌组织中MMP-2蛋白表达水平明显高于癌旁组织(P<0.01)。MMP-2 siRNA组MMP-2水平均低于对照组和siRNA control组(P<0.05),细胞存活率低于对照组(P<0.05),细胞凋亡率均高于对照组和siRNA control组(P<0.05)。Bcl-2、β-catenin、C-myc、cyclin D1水平均低于对照组和siRNA control组(P<0.05),Bax水平均高于对照组和siRNA control组(P<0.05)。Wnt/β-catenin信号通路抑制剂作用后,抑制剂组细胞存活率低于未处理组(P<0.05),细胞凋亡率高于未处理组(P<0.05),Bcl-2、β-catenin、C-myc、cyclin D1水平均明显低于未处理组(P<0.01),Bax水平明显高于未处理组(P<0.01),与转染MMP-2 siRNA的结直肠癌细胞一致。结论:MMP-2在结直肠癌组织中表达上调,抑制MMP-2的结直肠癌细胞增殖受到抑制,凋亡增多,其作用机制与Wnt/β-catenin信号通路有关。
刘秀兰陈世杰
关键词:结直肠肿瘤基质金属蛋白酶2小RNA干扰WNT/Β-CATENIN信号通路
RNA干扰技术靶向沉默CDK6对喉癌细胞生物学特性的影响被引量:3
2019年
目的研究RNA干扰技术靶向沉默周期蛋白依赖性激酶6(CDK6)对喉癌细胞生物学特性的影响.方法在喉癌细胞中依次转染CDK6 siRNA1和CDK6 siRNA2,用荧光定量PCR和Western印迹测定转染效率,筛选干扰效果较好的CDK6 siRNA2作为下调CDK6的RNA.以CCK-8法测定细胞的增殖情况,以流式细胞术测定细胞周期分布情况及细胞凋亡情况,以Western印迹法测定细胞中细胞周期蛋白依赖性激酶4(CDK4)、细胞周期蛋白D1(CCND1)、剪切型Caspase-3(Cleaved Caspase-3)、细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂1A(p21)蛋白水平.结果CDK6 siRNA1和CDK6 siRNA2都可以下调喉癌细胞中CDK6的转录和表达,并且CDK6 siRNA2转染后下调水平更多.下调CDK6后的喉癌细胞的增殖能力下降,细胞G1期比例增多,同时细胞凋亡率也增加,细胞中周期促进因子CDK4、CCND1蛋白水平降低,周期抑制因子p21蛋白水平升高,细胞中Cleaved Caspase-3水平升高,与没有转染的细胞比较有显著性差异(P<0.05).结论沉默CDK6能够在体外抑制喉癌细胞生长,阻滞喉癌细胞周期,诱导喉癌细胞凋亡.
何克剑侯晓强尹龙
关键词:喉癌细胞周期
长链非编码RNA-DQ402472RNA干扰对高脂膳食心肌缺血再灌注易损的保护作用
研究背景与目的心肌梗死是由急性冠脉阻塞引起的一种高致残致死率的急性心肌缺血性坏死。尽早恢复冠脉血流是减少心梗面积改善心功能降低死亡率的最主要方法。但是再灌注本身诱发的心肌损伤,即心肌缺血再灌注损伤(Ischemia/Re...
饶燊强
关键词:高脂膳食心肌缺血再灌注非编码RNAGSK-3Β
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利用定量蛋白组学和RNA干扰技术研究水稻的稻瘟病抗性机制
水稻是我国乃至世界的主要作物,作为全球大约半数人口的主粮,有着巨大的经济意义以及研究价值。稻瘟病菌(Magnaporthe oryzae)引起的水稻稻瘟病是目前水稻上的最严重病害之一,不管是产量还是品质,在全世界范围都受...
林思远
关键词:水稻稻瘟病抗性机制蛋白组学小RNA干扰
RNA干扰沉默S100A13对甲状腺细胞侵袭、迁移的影响及机制
2018年
目的探究干扰钙结合蛋白A13(calcium binding protein A13,S100A13)基因表达对甲状腺癌TPC-1细胞侵袭、迁移的影响及可能作用机制。方法采用RNA干扰敲减甲状腺癌TPC-1细胞S100A13基因的表达,通过细胞划痕实验和Transwell迁移实验检测S100A13对TPC-1细胞迁移能力的影响,Transwell侵袭实验检测S100A13对TPC-1细胞侵袭能力的影响,免疫印迹试验(Western Blot)检测S100A13、基质金属蛋白酶2(MMP-2)、钙黏蛋白E(E-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)蛋白的表达。结果与对照组相比,采用RNA干扰的人甲状腺癌TPC-1细胞划痕宽度显著升高(25. 214±2. 687 vs 69. 223±5. 291),侵袭(0. 897±0. 082 vs 0. 521±0. 053)、迁移(1. 263±0. 252 vs 0. 759±0. 062)能力显著降低(P <0. 05),细胞中MMP-2(0. 523±0. 062 vs 0. 246±0. 033)、Vimentin (0. 863±0. 082 vs 0. 458±0. 053)蛋白表达显著降低(P <0. 05),E-cadherin(0. 445±0. 053 vs 0. 755±0. 078)蛋白表达显著增加(P <0. 05)。结论采用RNA干扰S100A13表达可抑制甲状腺癌TPC-1细胞的侵袭、迁移,可能与其下调上皮间质转化和MMP-2的表达有关。
李剑闫双通龚燕平卢艳慧孙般若成晓玲邵迎红
关键词:甲状腺癌迁移
RNA干扰EZH2基因表达对食管癌细胞增殖凋亡的影响及机制研究
2017年
目的探讨RNA干扰果蝇ZESTE基因增强子同源物2(EZH2)基因的表达对食管癌细胞增殖和凋亡的影响及其机制。方法EZH2 siRNA转染人食管癌细胞KYSE150后,MTT法检测细胞增殖情况;流式细胞术检测细胞凋亡情况;Western blot检测细胞中EZH2、Caspase-3、STAT3和p-STAT3等蛋白表达情况及Act-H3(乙酰化)、H3K27 me2(二甲基化)和H3K27 me3(三甲基化)等甲基化水平。结果转染EZH2 siRNA后,食管癌细胞中EZH2蛋白表达水平下降(P 〈 0.01),细胞存活率降低(P 〈 0.01),细胞凋亡率增高(P 〈 0.01)。信号通路检测,沉默EZH2后食管癌细胞中Caspase-3表达上调(P 〈 0.01),p-STAT3表达下调(P 〈 0.01),STAT3表达则无明显变化(P 〉 0.01)。甲基化检测,沉默EZH2后食管癌细胞中Act-H3表达增高(P 〈 0.01),H3K27 me2和H3K27 me3表达降低(P 〈 0.01)。结论RNA干扰沉默EZH2基因能够抑制食管癌细胞增殖,促进细胞凋亡,其作用机制与抑制STAT3信号通路及H3K27组蛋白甲基化有关。
叶明凡张积广黄阳昀陈前顺李武锦
关键词:EZH2组蛋白STAT3信号通路
RNA干扰联合电针治疗对脊髓损伤后结缔组织生长因子的沉默作用被引量:5
2016年
目的探讨结缔组织生长因子(CTGF)siRNA联合电针治疗对脊髓损伤(SCI)后CTGF阳性表达的沉默作用。方法将SD大鼠随机分为对照(control)组、脊髓损伤(SCI)组、电针(EA)组、CTGF干扰(CTGF)组、CTGF干扰联合电针(EA+CTGF)组。制备SCI模型,将含有CTGF siRNA/invivofectamine的复合物植入CTGF、EA+CTGF组大鼠的脊髓(T10)损伤断端,SCI、EA组用invivofectamine转染试剂代替。EA、EA+CTGF组在模型制备后每天给予电针治疗。各组在3 d、7 d、14 d取损伤脊髓,应用Western blotting、RT-PCR测定CTGF、转化生长因子β-1(TGF-β1)及GFAP蛋白和mRNA表达变化,应用免疫荧光做形态学观察。结果与SCI组相比,CTGF组、EA+CTGF组的CTGF、TGF-β1、GFAP蛋白表达下调,联合治疗效果更明显(P<0.05);EA+CTGF组CTGF、TGF-β1、GFAP mRNA表达明显低于SCI组、EA组和CTGF组(P<0.01)。免疫荧光发现,SCI组CTGF阳性细胞反应性增生;CTGF组CTGF表达减弱,阳性细胞数减少;EA+CTGF组CTGF阳性细胞数明显减少。结论 CTGF siRNA联合电针治疗使损伤脊髓CTGF表达下调,胶质反应减轻,抑制瘢痕形成。
赵伟柴勇房清敏杨成
关键词:脊髓损伤结缔组织生长因子小RNA干扰电针免疫荧光
一种基于RNA干扰原理的新型核酸
一种基于RNA干扰原理的交替核酸双链,其序列的碱基由腺嘌呤A、鸟嘌呤G、胸腺嘧啶T、尿嘧啶U、和胞嘧啶C组成,各碱基通过磷酸核糖和磷酸脱氧核糖交替连接而成。该双链可以形成完全配对或大部分配对,各链的长度为18-30碱基。...
段为钢侯肖霖

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吕辉珍
作品数:5被引量:20H指数:2
供职机构:南方医科大学
研究主题:骨髓间充质干细胞 雷奈酸锶 SMAD通路 骨形态发生蛋白-2 小RNA干扰
张宝刚
作品数:63被引量:192H指数:7
供职机构:潍坊医学院
研究主题:乳腺癌 胶质瘤 乳腺肿瘤 细胞侵袭 MMP-9
孙磊
作品数:12被引量:29H指数:4
供职机构:潍坊医学院
研究主题:乳腺癌 乳腺肿瘤 小RNA干扰 N- MTOR
陆晓凤
作品数:7被引量:5H指数:1
供职机构:浙江大学医学院附属第二医院
研究主题:小RNA干扰 细胞株增殖 遗传学 转染 REG
丁丽华
作品数:95被引量:142H指数:6
供职机构:军事医学科学院生物工程研究所
研究主题:转录活性 克隆 真核表达 相互作用 雌激素受体Β