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一种小鼠肝癌细胞的衍生株Hepa1-6亚株的获取方法及其应用: 本发明公开了一种小鼠肝癌细胞的衍生株Hepa1‑6亚株的获取方法及其应用，获取方法是采用市面上的Hepa1‑6进行培养，然后将其移植至C57BL/6J小鼠进行多次传代，建立P3‑P4代的小鼠肝癌细胞的衍生株Hepa1‑6...; 蔡碧婷刘芳芳尹云飞

桑黄水提物中小分子化合物对小鼠肝癌细胞Hepa 1-6的抑制活性分析: 2024年; 桑黄(Sanghuangporus spp.)水提物中多糖、萜烯类化合物等生物大分子具有抑制肿瘤细胞的作用,但桑黄水提物中小分子化合物的功能尚不明确。本研究通过3000 D超滤法获得桑黄小分子化合物,通过双荧光标记法研究其对小鼠肝癌细胞Hepa 1-6的抑制活性,通过代谢组分析法解析其抑癌活性成分。结果表明:桑树桑黄(Sanghuangporus sanghuang Sheng H.Wu,L.W.Zhou&Y.C.Dai)和杨树桑黄(Phellinus baumii)小分子化合物均能诱导小鼠肝癌细胞Hepa 1-6的损伤和凋亡,其抑制率分别为(38.64±4.35)%和(32.52±3.57)%;桑黄小分子化合物与桑黄粗多糖共同处理Hepa 1-6细胞,其抑制率则分别达到(77.27±6.21)%和(76.92±5.45)%;代谢组分析表明桑黄小分子化合物中包括玫瑰树碱、左旋水苏碱、脑苷-B等已知明确具有抑癌功能的化合物,同时鉴定出杂环类(6-氟吲哚、2,4,6-三甲基吡啶、1'-萘酰基-2-甲基吲哚等)、核苷-碱基类(1-甲基腺苷、N6-甲基腺苷、2'-O-甲基腺苷等)、二肽类(如亮氨酸+*、异亮氨酸+*和γ-谷氨酰+*)、糖醇类(木糖醇、核糖醇、甘露醇、赤藓糖醇等)等可能参与肿瘤抑制作用的活性物质。研究表明桑黄水提物含有多种抑制肿瘤细胞的小分子化合物,且与桑黄粗多糖等生物大分子起到协同抑癌作用。研究结果为解析桑黄抑制肿瘤作用机制和功能物质开发应用提供科学依据。; 耿涛周庆祥韦红显卢芙萍武华周娄德钊王树昌; 关键词：水提物小分子化合物抑癌活性

全反式维甲酸通过JNK/Bcl-2信号调控自噬抑制小鼠肝癌细胞恶性生物学行为: 2024年; 目的:探讨全反式维甲酸(all-trans retinoic acid, ATRA)通过JNK/Bcl-2信号通路促进细胞自噬,抑制小鼠肝癌细胞恶性生物学行为的作用研究。方法:以小鼠Hepa1-6肝癌细胞为研究对象,共设置5个组:对照组、ATRA组、ATRA+Ad-GFP组、ATRA+Ad-Bcl-2组和ATRA+SP600125组。Western blot及免疫共沉淀(co-immunoprecipitation, Co-IP)检测各组的Bcl-2、c-Jun氨基末端激酶(c-Jun N-terminal kinase, JNK)及自噬相关指标的表达,激光共聚焦显微镜观察自噬流,电镜检测细胞内的自噬体数量及形态,划痕实验及Transwell实验检测各组细胞的迁移及侵袭能力,吲哚菁绿(indocyanine green, ICG)及过碘酸-希夫(periodic acid-Schiff, PAS)染色检测细胞的代谢合成能力。结果:相较于对照组,ATRA可增强磷酸化Bcl-2的表达(P<0.05),Bcl-2的过表达抑制自噬标志蛋白LC3-II/LC3-I和beclin-1的表达(P<0.01),且Bcl-2和beclin-1有蛋白-蛋白的相互结合;JNK的高选择性抑制剂SP600125可降低ATRA诱导的磷酸化JNK和磷酸化Bcl-2的表达,同时抑制自噬标志蛋白LC3-II/LC3-I和beclin-1的表达,并下调ATRA诱导的自噬水平(P<0.05)。ATRA处理显著减少了迁移和侵袭细胞的数量,增加ICG与PAS染色阳性细胞的数量(P<0.05),而ATRA+Ad-Bcl-2组和ATRA+SP600125组的迁移和侵袭细胞数量显著增加(P<0.05);ICG与PAS染色阳性细胞的数量均显著减少(P<0.05)。结论:ATRA可能通过JNK/Bcl-2信号增强细胞自噬水平,抑制小鼠肝癌细胞的恶性生物学行为。; 贾雯毕杨; 关键词：全反式维甲酸

细粒棘球蚴囊液外泌体通过JAK2/STAT3信号通路调控小鼠肝癌细胞Hepa1-6增殖与凋亡: 2024年; 目的探究细粒棘球蚴囊液中外泌体的存在并探讨其是否通过JAK2/STAT3信号通路调控小鼠肝癌细胞Hepa1-6的增殖、凋亡。方法使用囊液直接干预Hepa1-6细胞,CCK8、EdU检测囊液对其增殖能力的影响;使用超速离心法对细粒棘球蚴囊液外泌体进行提取,并使用透射电镜、Western-Blotting、粒径分析对其进行验证;通过外泌体-PKH67吞噬试验验证外泌体进入细胞情况;通过CCK8、EDU等检测细粒棘球蚴囊液外泌体对Hepa1-6细胞增殖的作用;使用Western-Blotting检测外泌体对Hepa1-6细胞凋亡的作用;通过Western-Blotting检测JAK2/STAT3信号通路相关蛋白的表达情况并通过相关性研究探讨此通路与肝癌细胞增殖的关系。结果 1.细粒棘球蚴囊液促进Hepa1-6增殖;2.Western-Blotting结果显示细粒棘球蚴囊液外泌体表面标志物CD63,CD9,TSG101表达阳性;3.透射电镜可见外泌体形态为双层膜结构的盘状囊泡,粒径分析显示囊泡直径分布区间为159.2±81.1 nm;4.外泌体24 h可进入细胞内;5.CCK8、EdU结果显示细粒棘球蚴囊液外泌体在24、48 h均可促进Hepa1-6细胞的增殖(P<0.05);6. Western-Blotting结果显示细粒棘球蚴囊液外泌体在干预Hepa1-6 24 h、48 h时均促进Bcl-2的表达,且随着浓度增加促进作用增加(P<0.05),Bax、caspase-3、caspase-9表达量降低,随着浓度增加抑制作用增强;7. Western-Blotting结果显示细粒棘球蚴囊液外泌体干预Hepa1-6 24h后t-JAK2、t-STAT3表达量无明显变化,p-JAK2、p-STAT3蛋白表达随着外泌体浓度增加而增加,且与肝癌细胞增殖存在正相关。结论细粒棘球蚴囊液及其外泌体可以通过JAK2/STAT3信号通路促进Hepa1-6增殖,同时抑制其凋亡。; 伍希雅崔杰林芷伊蔡克丰熊梓彤吴正展黄延鑫房福众辛子睿张宏伟; 关键词：外泌体肝癌凋亡 JAK2/STAT3

高压脉冲电场联合低温等离子体对小鼠肝癌细胞杀伤效果的研究被引量：1: 2022年; 目的探究高压脉冲电场(PEF)联合低温等离子体(LTP)对小鼠肝癌细胞杀伤效果。方法小鼠肝癌细胞H22分为肝癌细胞组(无任何处理)、PEF处理组、LTP处理组、联合A组(先行PEF处理后立即行LTP处理)、联合B组(先行LTP处理后立即行PEF处理)、联合C组(同联合A组,但间隔20 min)、联合D组(同联合B组,但间隔20 min)。细胞计数试剂盒检测细胞存活率,流式细胞仪检测凋亡,荧光标记细胞内活性氧(ROS)并计数。20只4~6周龄健康雌性无特定病原体的昆明小鼠建立皮下移植瘤模型,随机分为模型组、PBS对照组、PEF实验组、LTP实验组及联合组(LTP+PEF,无间隔),每组4只。测量并计算肿瘤相对体积和抑瘤率。结果肝癌细胞组细胞存活率(98.3±0.9)%,PEF处理组(66.8±4.4)%,LTP处理组(62.1±3.9)%,联合A组(43.7±3.7)%,联合B组(31.0±1.4)%,联合C组(46.8±2.9)%,联合D组(39.0±2.3)%。与肝癌细胞组比较,各处理组细胞存活率均降低,且四个联合处理组细胞存活率低于PEF处理组和LTP处理组,差异均有统计学意义(均P<0.05)。其中联合B组细胞存活率最低。凋亡检测结果与细胞存活率结果一致。荧光显微镜下,联合B组细胞ROS荧光明显增多,且LTP处理组细胞ROS荧光比PEF处理组多。联合B组的ROS阳性细胞百分比高于LTP处理组和PEF处理组,差异均有统计学意义(均P<0.05)。联合组抑瘤率和肿瘤相对体积优于PEF实验组和LTP实验组,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论LTP联合PEF对小鼠肝癌细胞杀伤效果优于PEF和LTP单一处理,有望成为新的肿瘤治疗方法。; 胡笑钏张晓伟刘样溪周古翔吕毅; 关键词：活性氧高压脉冲电场低温等离子体肝癌细胞

川楝子配伍对一贯煎抑制荷H22小鼠肝癌细胞增殖的影响被引量：2: 2022年; 目的对比研究一贯煎,一贯煎去川楝子,川楝子对荷H22小鼠肝癌细胞增殖及凋亡相关蛋白B淋巴细胞瘤-2(B-celllymphoma/Leukemia-2,Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、细胞色素C(Cyt-c)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)蛋白表达的影响。方法小鼠随机分为模型组,环磷酰胺(cyclophosphamide,CTX)组(50 mg·kg^(-1)),一贯煎组(23 g·kg^(-1)),一贯煎去川楝子组(21 g·kg^(-1)),川楝子组(0.1 g·kg^(-1))。雄性KM小鼠每组10只右侧腋下皮下注射H22细胞构建肝癌荷瘤模型,CTX组造模后腹腔注射给药,隔日一次,共7次,余组造模前后14天均灌胃给药,统计各组瘤重。原位末端标记法(TUNEL)检测肿瘤细胞凋亡;蛋白免疫印记法(Western blot)检测Bax、Bcl-2、Cyt-c、Caspase-3蛋白表达。结果与模型组比较,CTX组,一贯煎组,一贯煎去川楝子组,川楝子组瘤重均降低(P<0.01),肝癌细胞凋亡率均升高(P<0.01),Bax、Caspase-3和Cyt-c蛋白表达均升高(P<0.05或P<0.01),CTX组、一贯煎组Bcl-2蛋白表达降低(P<0.01);与一贯煎组比较,一贯煎去川楝子组、川楝子组瘤重、Bcl-2蛋白表达升高(P<0.05),肝癌细胞凋亡率和Bax、Caspase-3蛋白表达降低(P<0.05或P<0.01);与一贯煎去川楝子组比较,川楝子组肝癌细胞凋亡率,Cyt-c、Caspase-3蛋白表达均升高(P<0.01),Bcl-2蛋白表达降低(P<0.01)。结论一贯煎中川楝子配伍能明显增强该方抑制肝癌细胞增殖的功效,其机理可能与升高Bax、Caspase-3和Cyt-c蛋白表达,降低Bcl-2蛋白表达,进而促进肝癌细胞凋亡有关。; 施翠芬谢斌张汗顺胡桥刘成余功; 关键词：一贯煎肝癌细胞凋亡

CDC25C表达下调对小鼠肝癌细胞增殖迁移及自噬和凋亡的影响: 目的:通过转染CDC25C sh RNA慢病毒质粒构建CDC25C表达下调的肝癌细胞系,探讨CDC25C表达下调对其增殖、迁移及自噬和凋亡能力的影响。方法:(1)借助TCGA可视化的在线工具GEPIA数据库检测CDC25...; 郑方园; 关键词：肝癌

小鼠肝癌细胞外泌体对树突状细胞成熟与功能的影响被引量：2: 2021年; 目的探讨小鼠肝癌细胞(Hepa1-6)来源的外泌体对树突状细胞成熟和功能的影响。方法提取小鼠Hepa1-6细胞的外泌体,用透射电镜来鉴定外泌体的外形,Western blot方法测定外泌体的标志蛋白CD63和TSG101的表达,使用小鼠Hepa1-6细胞外泌体冲击树突状细胞(DCs),DCs成熟相关表面分子CD40、CD80、CD83、CD86、MHC-Ⅱ的表达使用流式细胞术检测;将小鼠T淋巴细胞和小鼠Hepa1-6细胞外泌体致敏的DCs一起孵育5 d,使用CFSE染色标记和流式法来测定共孵育T细胞的分裂增殖情况。结果透射电镜可以观察到从Hepa1-6细胞的上清液中收集到的外泌体,表现为圆形或类圆形膜性囊泡样结构,符合外泌体的典型特征;Western blot检测表明小鼠Hepa1-6细胞来源的外泌体表达CD63、TSG101标志性蛋白,不表达细胞色素C;从小鼠Hepa1-6细胞提取来的外泌体致敏DCs,可上调表面MHC-Ⅱ类分子、成熟标志分子CD83和共刺激分子CD40、CD80、CD86(P<0.05)。且随着外泌体浓度的增加,DC表面分子表达增高;同时可促进T淋巴细胞的增殖(P<0.05)。结论小鼠Hepa1-6细胞提取的外泌体可促进DC2.4的朝向成熟表型分化,并促进T细胞的增殖。; 许伟兵范璐璐; 关键词：肝细胞癌外泌体树突状细胞

窖蛋白-1通过增强氧连接的N-乙酰葡糖胺糖基转移酶表达诱导小鼠肝癌细胞的迁移和侵袭被引量：5: 2021年; 窖蛋白-1(caveolin-1,Cav-1)是胞膜窖的主要结构和功能蛋白质,参与调控多种细胞信号转导过程。然而,Cav-1调节蛋白质糖基化修饰和肿瘤转移作用机制尚不明确。本研究在小鼠肝癌细胞中证明,Cav-1能够促进蛋白质的氧连接的N-乙酰葡糖胺(O-linked N-acetylglucosamine,O-GlcNAc)糖基化及其O-GlcNAc转移酶(O-GlcNAc transferase,OGT)的表达,增强了小鼠肝癌细胞的迁移和侵袭潜能。RT-qPCR、Western印迹和双荧光素酶报告基因结果显示,Cav-1通过下调转录因子RUNX2表达,抑制了miR24的转录(P<0.05)。随后研究结果表明,miR24能够靶向Ogt mRNA 3′-UTR并抑制其表达(P<0.05)。这使得Cav-1通过RUNX2/miR24正向调控OGT的表达和O-GlcNAc糖基化,最终导致小鼠肝癌细胞迁移和侵袭潜能增加。这些结果揭示了Cav-1调控糖基转移酶OGT表达和蛋白质O-GlcNAc糖基化的新机制,为肝癌的发生发展机制研究提供了新的理论和实验依据。; 王玲燕王语涵张程陈茜茜黄煌李文利张嘉宁刘宇博; 关键词：肝癌窖蛋白-1 糖基转移酶

榄绿粗叶木生物碱提取工艺及对小鼠肝癌细胞抑制作用: 2021年; 目的优化超声波辅助提取榄绿粗叶木生物碱的最佳工艺,观察榄绿粗叶木生物碱对小鼠肝癌细胞的影响。方法用超声波辅助提取法乙醇浸泡提取榄绿粗叶木的生物碱,利用正交实验的方法优化其提取工艺。CCK-8法检测其生物碱抑制小鼠H22肝癌细胞增殖的效果。通过检测超氧化物歧化酶(SOD)活性,研究榄绿粗叶木生物碱的体外抗氧化活性。结果超声波辅助提取其生物碱的最佳工艺为乙醇浓度70%、料液比1∶45、超声时间60 min、超声功率200 W和超声温度60℃。榄绿粗叶木生物碱对小鼠H22肝癌细胞增殖抑制效果与生物碱浓度和作用时间正相关。榄绿粗叶木生物碱总抗氧化能力与生物碱浓度有明显的量效关系。结论超声辅助法是榄绿粗叶木生物碱提取的有效方法之一,榄绿粗叶木生物碱对小鼠H22肝癌细胞增殖有明显抑制作用,以及榄绿粗叶木具有一定的抗氧化活性。; 许相洋谢永华邱丹缨; 关键词：生物碱肝癌抗肿瘤

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