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映山红花总黄酮促进大鼠脑血管内皮细胞体外形成血管作用及与VEGFR_(2)和神经源性H_(2)S的关系
2024年
目的探讨映山红花总黄酮(total flavones of rhododendra,TFR)促大鼠脑血管内皮细胞体外形成血管作用及与VEGFR_(2)和神经源性硫化氢(H_(2)S)的关系。方法采用大鼠脑血管内皮细胞单独培养及和与海马神经元共培养,分别采用不同的实验方法检测细胞增殖、迁移、成管及H_(2)S含量和钙离子荧光强度,包括CCK-8法、细胞划痕法、Transwell法、基质胶成管、H_(2)S试剂盒及钙离子荧光探针法。结果在单独培养的大鼠脑血管内皮细胞上,H_(2)S供体NaHS(200μmol·L^(-1))和TFR(90、270、810 mg·L^(-1))对大鼠脑血管内皮细胞的增殖、迁移、成管及[Ca^(2+)]i荧光强度都有明显的促进作用。而VEGFR_(2)阻断剂SU5416(10μmol·L^(-1))可抑制TFR的促进内皮细胞增殖、迁移和形成血管及[Ca^(2+)]i荧光强度;在与海马神经元共培养的大鼠脑血管内皮细胞上,TFR显著地升高共培养中H_(2)S含量,并被CBS抑制剂AOAA(200μmol·L^(-1))抑制。与此同时,TFR明显地促进共培养中大鼠脑血管内皮细胞的形成血管作用,并可被AOAA和VEGFR_(2)阻断剂SU5416显著地抑制。结论TFR在体外可通过VEGFR_(2)升高[Ca^(2+)]i来促进脑血管内皮细胞形成血管,并可通过诱导神经元中CBS生成H_(2)S作用于大鼠脑血管内皮细胞的VEGFR_(2)来促进血管形成。
仲美静陈硕陈志武
关键词:海马神经元细胞大鼠脑血管内皮细胞
红景天苷对MCAO大鼠脑血管内皮细胞的作用被引量:2
2023年
目的研究红景天苷(salidroside,SAL)对缺血性损伤大鼠脑血管内皮细胞的作用及其作用机制。方法健康成年SD雄性大鼠24只,线栓法制备MCAO模型,随机分为假手术组(Sham)、模型组(MCAO)、SAL给药组(MCAO+SAL),SAL给药浓度为50 mg·kg^(-1),连续给药6 d。Western blot检测大鼠损伤侧组织ICAM-1、VCAM-1、E-selectin、P-selectin的蛋白表达。体外实验采用HUVECs,经不同浓度SAL(0.1、1、10μmol·L^(-1))和LPS(100μg·L^(-1))分别干预24 h,CCK-8法检测SAL和LPS对HUVECs存活的影响;体外血管形成实验中LPS组(100μg·L^(-1))和SAL给药组(LPS+SAL)干预HUVECs 24 h,SAL给药浓度分别为0.1、1、10μmol·L^(-1),观察LPS和SAL对其血管形成的影响。Western blot检测HUVECs的ICAM-1、VCAM-1、E-selectin、P-selectin蛋白表达。结果SAL可以降低MCAO大鼠损伤侧组织中ICAM-1、VCAM-1、E-selectin、P-selectin表达;体外研究发现,SAL对HUVECs存活无影响;LPS抑制HUVECs的血管形成,经SAL作用后,SAL(1、10μmol·L^(-1))逆转LPS的作用,促进其血管生成;与对照组(Control)相比,LPS促进HUVECs中ICAM-1、VCAM-1、E-selectin、P-selectin蛋白表达,而经SAL作用后,ICAM-1、VCAM-1、E-selectin、P-selectin表达量明显降低,促进HUVECs血管形成能力。结论SAL具有改善缺血性损伤大鼠内皮细胞的再生能力,以及促进血管形成能力。
余正双郑雪蕊谢志扬周彬彬吴青青吴慧玲赖文芳洪桂祝
关键词:红景天苷VCAM-1E-SELECTINP-SELECTIN
N-乙酰半胱氨酸通过AMPK/SIRT1途径抑制缺氧诱导的大鼠脑血管内皮细胞损伤被引量:17
2020年
目的研究N-乙酰半胱氨酸(NAC)对缺氧诱导脑血管内皮细胞损伤的调节作用及分子机制。方法选择SD大鼠分离培养脑血管内皮细胞,分为常氧组、缺氧组、0.5 NAC组(缺氧+0.5 mol/L NAC)、1.0 NAC组(缺氧+1.0 mol/L NAC)、NAC+8-bAMP组(缺氧+1.0 mol/L NAC+1.0 mol/L 8-bAMP)。采用MTS法检测细胞增殖活力,采用TUNEL染色检测凋亡率,采用试剂盒检测氧化应激指标,采用Western blot检测凋亡基因、AMPK/SIRT1通路分子的表达量。结果缺氧组细胞OD490值、T-AOC含量及B淋巴细胞瘤2(Bcl-2)、p-AMP活化蛋白激酶(pAMPK)、去乙酰化酶Sirtuin1(SIRT1)表达量均明显低于常氧组;缺氧组细胞凋亡率、细胞中活性氧(ROS)、丙二醛(MDA)、8-羟基脱氧鸟苷(8-OHDG)含量及bcl-2相关X蛋白(bax)、细胞色素C(Cyt-C)、含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(Caspase-3)的表达量均明显高于常氧组。0.5 NAC组、1.0 NAC组细胞OD490值、T-AOC量及Bcl-2、pAMPK、SIRT1表达量均明显高于缺氧组;0.5 NAC组、1.0 NAC组细胞凋亡率、ROS、MDA、8-OHDG含量及Caspase-3、Cyt-C、Bax的表达量均明显低于缺氧组。NAC+8-bAMP组细胞OD490值、T-AOC及Bcl-2、p-AMPK、SIRT1表达量均明显低于1.0 NAC组;NAC+8-bAMP组凋亡率、ROS、MDA、8-OHDG含量及Caspase-3、Cyt-C、Bax的表达量均明显高于1.0 NAC组。结论NAC能够通过激活AMPK/SIRT1通路来减轻氧化应激及线粒体凋亡介导的脑血管内皮细胞损伤。
张蕴韩新生张洪阳徐建可
关键词:N-乙酰半胱氨酸脑血管内皮细胞
2型糖尿病大鼠脑血管内皮细胞CD34 TNF-αVEGF水平变化及氨基胍干预的保护作用研究被引量:2
2020年
目的研究2型糖尿病大鼠海马区脑血管内皮细胞CD34表达及血管内皮细胞炎症因子肿瘤坏死因子-α、血管内皮生长因子水平变化及氨基胍干预的保护作用及机制.方法将24只SD大鼠按照随机数字表法分为对照组、模型组、治疗组,每组8只,于分组后12周、16周两个时间段观察;对照组给予普通饮食喂养,其余2组按照文献建立糖尿病大鼠模型,模型组及治疗组给予高脂高糖饮食喂养6周,用ONETOUCH血糖仪测定血糖,以随机非空腹血糖>16.7mmol·L-1定为糖尿病模型,造模成功后,治疗组给予氨基胍溶液每天灌胃,对照组及模型组给予等量生理盐水灌胃处理.采用免疫组化方法测定海马区脑血管密度CD34表达变化,采取酶联免疫吸附法测定海马区血管内皮细胞肿瘤坏死因子-α、血管内皮生长因子水平变化.结果与对照组相比,模型组和治疗组脑血管内皮细胞CD34表达均显著增加(P<0.01),肿瘤坏死因子-α、血管内皮生长因子水平均显著升高(P<0.01);模型组16周CD34表达较12周显著增加(P<0.01),肿瘤坏死因子-α、血管内皮生长因子水平较12周显著升高(P<0.05或0.01);治疗组各时间点CD34表达均显著少于模型组(P<0.01),肿瘤坏死因子-α、血管内皮生长因子水平均显著低于模型组(P<0.01).结论CD34表达及血管内皮细胞炎症因子肿瘤坏死因子-α、血管内皮生长因子水平变化均参与及影响2型糖尿病大鼠脑血管重塑过程,氨基胍干预对2型糖尿病大鼠保护作用是通过抑制肿瘤坏死因子-α、血管内皮生长因子的产生等途径改善糖尿病脑血管重塑,发挥保护作用.
贾贺李惠勉
关键词:2型糖尿病氨基胍
低氧损伤下调大鼠脑血管内皮细胞中硫化氢及其介导的Rho A-ROCK通路激活被引量:1
2019年
目的观察大鼠脑血管内皮细胞内皮源性硫化氢(H_2S)、一氧化氮(NO)及Ras同源基因家族成员A-Rho相关的卷曲螺旋激酶(RhoA-ROCK)信号通路在低氧性损伤中的动态变化,并探讨内皮源性H_2S对RhoA-ROCK通路的影响。方法胶原酶消化法原代培养大鼠脑血管内皮细胞,内皮细胞分别低氧培养1、2、4、8、24 h后,测定H_2S和NO含量,G-LISA检测RhoA活性,细胞裂解后对相关蛋白进行免疫印迹分析。结果低氧1 h后H_2S含量显著下降; NO含量在低氧4 h后开始显著下降; RhoA活性低氧8 h后才有显著增加。低氧4 h时内源性H_2S合成酶胱硫醚γ-裂解酶(CSE)表达就有了显著下降;低氧8 h后内皮型一氧化氮合成酶(e NOS)才开始明显降低;低氧8 h时Rho激酶ROCK1、ROCK2表达显著增加。内源性和外源性H_2S均可抑制RhoA的激活。结论在大鼠脑血管内皮细胞低氧损伤过程中,内皮源性H_2S降低发生最早,其次为NO,而RhoA-ROCK通路激活发生在后,可能是继发于H_2S的降低。
王良芳陈志武
关键词:内皮细胞低氧硫化氢
人参皂苷对大鼠脑血管内皮细胞MEG3表达的干预作用及促进血管新生的研究被引量:7
2019年
目的:观察人参皂苷(GS)对大鼠脑血管内皮细胞长链非编码RNA maternally expressed 3(MEG3)表达和血管新生的影响。方法:将大鼠血管内皮细胞系(RBE4)培养在内皮细胞培养基中,分为Control组MEG3 siRNA组和GS组。实时荧光定量PCR法检测GS对RBE4的MEG3、血管内皮生长因子A(VEGFA)和血管内皮生长因子受体2(VEGFR2)基因表达量的影响。Western Blot检测GS对RBE4细胞VEGFA和VEGFR2蛋白表达量的影响。同时观察GS对RBE4细胞迁移和成管能力的影响。结果:与Control组比较,MEG3 siRNA组和GS组显著降低了MEG3的基因表达量(P<0.01),同时提高了VEGFA和VEGFR2的基因(P<0.01)和蛋白的表达量;RBE4的迁移能力和成管能力都显著增强(P<0.01,P<0.05)。结论:GS通过降低RBE4MEG3的表达量,从而上调VEGFA、VEGFR2的表达,并显著促进了血管新生。
沈俊逸赵智明刘春丽徐子涵蔡辉
关键词:人参皂苷脑血管内皮细胞血管新生长链非编码RNA
脂多糖刺激小胶质细胞产生的微囊泡加重氧糖剥夺条件下大鼠脑血管内皮细胞紧密连接的损伤被引量:3
2018年
目的研究在氧糖剥夺(OGD)条件下,向脑血管内皮细胞(RBEC)中加入提取自脂多糖(LPS)刺激的大鼠小胶质细胞上清液的循环微囊泡(MV),考察其对RBEC紧密连接功能的损伤及作用机制。方法分离提取1 mg/L LPS刺激24 h的小胶质细胞培养上清液中的MV并进行鉴定,实时荧光定量PCR检测MV中微小RNA-27a(miR-27a)水平。RBEC分为正常对照组、正常对照组-MV组、OGD 6 h组、OGD-MV孵育组。免疫荧光细胞化学染色检测RBEC中紧密连接蛋白闭合蛋白(occludin)和密封蛋白5(claudin-5)的表达,Western blot法检测RBEC中occludin、claudin-5、Toll样受体4(TLR4)、核因子κBp65(NF-κBp65)和p38的蛋白磷酸化水平,ELISA测定RBEC中白细胞介素1β(IL-1β)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)水平。结果 MV形状为近似圆形双层膜结构,平均直径为150 nm,符合MV的形态学特征。与正常小胶质细胞相比,LPS刺激的小胶质细胞培养上清液的MV中miR-27a水平异常升高。与正常对照组相比,加入MV不会对正常细胞产生影响,当在OGD条件下,RBEC中紧密连接受到损害,occludin和claudin-5表达降低,而加入MV后,RBEC紧密连接破坏加重,occludin和claudin-5表达进一步降低,OGD组小胶质细胞occludin和claudin-5蛋白水平降低。与正常对照组相比,OGD组小胶质细胞TLR4及NF-κBp65、p38磷酸化水平增加,而OGD-MV孵育组中,TLR4和NF-κBp65、p38的磷酸化水平进一步升高,且IL-1β和TNF-α水平也明显增加。结论 LPS刺激小胶质细胞上清液MV中miR-27a水平升高,可致OGD条件下RBEC紧密连接损害进一步加重,可能与其上调TLR4表达及NF-κBp65、p38的磷酸化相关。
吕燕妮付龙生李艳明温金华魏筱华钱贻崧
关键词:小胶质细胞脑血管内皮细胞
H2S-RhoA-ROCK通路在大鼠脑血管内皮细胞缺氧性损伤中的作用及映山红花总黄酮抗缺血作用的H2S机制
卒中是全球性的重大公共卫生问题,病死率和致残率高,但缺乏有效的治疗手段。内源性硫化氢(H2S)与RhoA-ROCK通路均为心血管新药很有前景的新靶点,但二者,尤其在缺血性损伤中的相互作用未见报道。映山红花总黄酮(to...
王良芳
关键词:内皮细胞缺氧
电针对梗死大鼠脑血管内皮细胞Apelin-APJ系统的影响被引量:20
2017年
目的:观察梗死后调控血管发生通路上关键因子APJ及其配体Apelin的变化规律及针刺对其干预效应规律。方法:Wistar大鼠随机分为模型组(90只),电针组(90只),假手术组(90只)和空白组(10只),前3组又分为大中动脉阻滞(MCAO)后1、3、6、9、12、24h,3、7、12d共9个时相组,每组10只。各电针组电针"水沟"穴20min,1、3、6、9、12、24h组造模后即刻治疗1次,并于相应时点取材,3、7、12d组每日治疗1次,末次治疗结束后取材。应用实时荧光定量法(RT-PCR)、蛋白免疫印迹法(Western blot)检测脑血管内皮细胞Apelin、APJ mRNA及蛋白表达的变化。结果:与空白组相比,假手术组Apelin和APJ mRNA表达量差异无统计学意义(P>0.05)。与假手术组比较,模型组12h、12dApelin和APJ mRNA表达下调(P<0.05,P<0.01)。与同时相模型组比较,电针组Apelin mRNA在12h、7d的表达量上调(P<0.01);电针组APJ mRNA在6、9、12h的表达量上调(P<0.05,P<0.01)。与空白组相比,假手术组Apelin和APJ蛋白表达量差异无统计学意义(P>0.05)。与假手术组比较,模型组Apelin蛋白表达量1、3、6、24h及3、7、12d下调(P<0.01,P<0.05),模型组APJ蛋白表达量1、3、6、9h及3d下调(P<0.01,P<0.05)。与同时相模型组比较,电针组Apelin蛋白表达在6、24h及3、7、12d均上调(P<0.05,P<0.01),电针组APJ蛋白表达量于1、9、12、24h及3、7、12d上调(P<0.05,P<0.01)。结论:电针可上调MCAO大鼠脑血管内皮Apelin-APJ mRNA及蛋白的表达,这对于缺血后血管新生及侧支循环的建立有重要作用。
杨丽红杜元灏李晶
关键词:血管新生水沟穴
老年大鼠脑血管内皮细胞原代培养方法
本发明涉及老年大鼠脑血管内皮细胞原代培养方法,步骤如下:(1)取出老年大鼠组织的灰质部分,制得样品组织;(2)置于胎牛血清的分离液的培养皿中经吹打分散和生物酶消化后,制得分散细胞;(3)离心,制得毛细血管;(4)将毛细...
王丽梅崔敏王越陈哲宇

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作品数:646被引量:3,856H指数:30
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