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藤黄健骨胶囊通过SIRT1/PGC-1α/Nrf2信号通路抑制绝经后骨质疏松大鼠成骨细胞凋亡被引量：2: 2024年; 藤黄健骨胶囊可以提高绝经后骨质疏松模型鼠的骨密度来改善其骨微结构损害,但具体机制尚未阐明。本文主要研究藤黄健骨胶囊抑制绝经后骨质疏松症大鼠成骨细胞凋亡与SIRT1/PGC-1α/Nrf2信号通路的关系,旨在探讨藤黄健骨胶囊对绝经后骨质疏松症的作用机制。采用去卵巢法建立绝经后骨质疏松大鼠模型,分别给予藤黄健骨胶囊(0.09、0.18、0.36 g/kg)灌胃,连续干预8周后进行指标检测。采用TUNEL染色观察股骨组织凋亡情况,结果发现,藤黄健骨胶囊各剂量组股骨组织凋亡阳性细胞和凋亡率均减少(P<0.01)。采用双重免疫荧光染色观察股骨组织成骨细胞中SIRT1、PGC-1α和Nrf2表达水平表达情况,结果发现,藤黄健骨胶囊中、高剂量组成骨细胞PGC-1α表达荧光面积明显升高,各剂量组成骨细胞SIRT1和Nrf2表达荧光面积也明显升高(P<0.01)。qPCR和Western印迹检测股骨组织SIRT1、PGC-1α、Nrf2、Runx2、Bcl-2、Caspase-3和Caspase-9的mRNA表达水平和翻译水平变化,结果显示,藤黄健骨胶囊中、高剂量组股骨组织Runx2 mRNA水平和蛋白质水平、Nrf2蛋白质水平均明显升高,Caspase-9蛋白质水平明显下降,各剂量组股骨组织SIRT1、PGC-1α、Bcl-2 mRNA水平和蛋白质水平、Nrf2 mRNA水平也均明显升高,而其各剂量组股骨组织Caspase-3mRNA水平、蛋白质水平和Caspase-9 mRNA水平均则明显降低(P<0.01)。综上,本研究初步揭示了藤黄健骨胶囊对绝经后骨质疏松模型鼠成骨细胞凋亡的抑制与SIRT1/PGC-1α/Nrf2信号通路有关,SIRT1可能是调控成骨细胞凋亡的重要靶点。; 安方玉王霞霞颜春鲁孙柏汪春梅柳颖常伟荣宋佳眙王玉洁马海珍张蕊陈振东袁万英; 关键词：成骨细胞凋亡

右归饮及其入血成分对大鼠成骨细胞的促增殖作用: 2024年; 目的明确右归饮的主要入血成分;阐明右归饮及其主要入血成分对大鼠成骨细胞的促增殖作用。方法应用超高效液相色谱-质谱联用(UPLC-MS)技术建立右归饮、各单味药及Sprague-Dawley大鼠灌服右归饮后含药血清的分析方法;体外分离培养成骨细胞,噻唑蓝(MTT)法评价右归饮、含药血清及其主要入血成分对成骨细胞增殖率的影响。结果大鼠灌服右归饮后在含药血清中检测到10种入血成分,分别为君药附子中的乌头碱、次乌头碱、新乌头碱、苯甲酰乌头原碱、苯甲酰次乌头原碱、苯甲酰新乌头原碱,君药肉桂中的肉桂酸,臣药山茱萸中的莫诺苷、马钱苷和佐药杜仲中的松脂醇二葡萄糖苷。右归饮药液及两味君药附子、肉桂中7种入血成分浓度分别为1μg·mL^(-1)、10 ng·mL^(-1)、10 ng·mL^(-1)、1 ng·mL^(-1)、100μg·mL^(-1)、100 pg·mL^(-1)、1μg·mL^(-1)和1 ng·mL^(-1)时,对成骨细胞有一定的促增殖作用且起效较为迅速,右归饮含药血清的起效时间缓慢。结论右归饮可原型入血的10种化学成分得以揭示,且在一定浓度范围内,右归饮药液、右归饮含药血清及右归饮主要入血成分对成骨细胞具有促增殖作用。; 朱瑶瑶朱希章建华尹华; 关键词：右归饮入血成分成骨细胞增殖作用

冬凌草甲素调节Hippo/YAP信号通路对骨质疏松大鼠成骨细胞凋亡的影响: 2024年; 目的:探讨冬凌草甲素(Ori)调节Hippo/Yes相关蛋白(YAP)信号通路对骨质疏松(OP)大鼠成骨细胞凋亡的影响。方法:随机选取10只大鼠为假手术组仅分离但不切除卵巢,其余大鼠通过切除双侧卵巢建立OP模型,将造模成功的大鼠随机分为OP组、不同剂量Ori(5mg/kg Ori、10mg/kg Ori、20mg/kg Ori)组、20mg/kg Ori+Hippo/YAP激活剂-Verteporfin(10mg/kg)组。干预后,收集腹主动脉血液,ELISA检测血清中骨钙素(BGP)、碱性磷酸酶(ALP)水平;分离股骨组织,双能X射线骨密度仪检测股骨矿含量、骨密度;HE检测股骨组织形态学变化;TUNEL检测成骨细胞凋亡变化;Western blot检测YAP、转录共激活因子PDZ结合基序(TAZ)蛋白表达。结果:假手术组大鼠股骨结构变化不明显,与假手术组相比,OP组股骨组织形态发生明显改变,BGP、ALP水平、股骨组织矿含量、骨密度、YAP、TAZ蛋白表达显著降低(P<0.05),成骨细胞凋亡率显著增加(P<0.05);与OP组相比,5mg/kg Ori组、10mg/kg Ori组、20mg/kg Ori组股骨组织形态得到改善,BGP、ALP水平、股骨组织矿含量、骨密度、YAP、TAZ蛋白表达显著增加(P<0.05),成骨细胞凋亡率显著降低(P<0.05),不同剂量Ori间具有统计差异(P<0.05);与20mg/kg Ori组相比,20mg/kg Ori+Verteporfin组股骨组织形态变化加重,BGP、ALP水平、股骨组织矿含量、骨密度、YAP、TAZ蛋白表达显著降低(P<0.05),成骨细胞凋亡率显著增加(P<0.05)。结论:Ori调节Hippo/YAP信号通路减少OP大鼠成骨细胞凋亡,减轻OP大鼠症状。; 陆海峰邹炳宏朱亿; 关键词：冬凌草甲素骨质疏松成骨细胞凋亡

蒙药壮西-4调控miR-204对骨质疏松大鼠成骨细胞增殖的影响及机制被引量：1: 2024年; 目的探讨蒙药壮西-4调控miR-204对骨质疏松大鼠成骨细胞增殖的影响及机制。方法将60只SD大鼠随机分为空白对照组、模型对照组、阳性对照组、低、中和高剂量组各10只。建模各组给予维A酸溶液灌胃建立骨质疏松模型,连续14 d。阳性对照组给予戊酸雌二醇灌胃,低、中、高剂量组分别给予不同剂量(50、100、200 mg/kg)蒙药壮西-4灌胃,空白对照组和模型对照组给予同体积的生理盐水灌胃,连续42 d。采用骨密度(BMD)仪测定大鼠第4腰椎及右股骨的BMD值,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)血清miR-204表达量,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血清骨桥蛋白(OPG)、核因子κB受体活化因子配体(RANKL)含量。取MC3T3-E1细胞,分为对照组、促进组、抑制组和药物组,分别加入生理盐水、miR-204模拟物、miR-204抑制剂和蒙药壮西-4。采用RT-PCR法检测miR-204表达量,Western印迹检测RANKL、OPG蛋白表达量,噻唑蓝(MTT)检测细胞增殖情况,计算细胞存活率。结果各组第4腰椎和右股骨BMD值、血清miR-204表达量、血清OPG含量差异有统计学意义(均P<0.05);空白对照组明显高于建模各组,模型对照组明显低于低、中、高剂量组、阳性对照组,阳性对照组和中剂量组明显高于低、高剂量组(均P<0.05)。各组血清RANKL含量差异有统计学意义(均P<0.05),空白对照组明显低于建模各组(均P<0.05),模型对照组明显高于低、中、高剂量组和阳性对照组(均P<0.05),阳性对照组和中剂量组明显低于低、高剂量组(均P<0.05)。各组miR-204表达量、OPG蛋白表达量、细胞存活率差异有统计学意义(均P<0.05),促进组和药物组明显高于对照组和抑制组,抑制组明显低于对照组(均P<0.05)。各组RANKL蛋白表达量差异具有统计学意义(均P<0.05),促进组和药物组明显低于对照组和抑制组,抑制组明显高于对照组(均P<0.05)。结论蒙药壮西-4能增加骨质疏松大鼠BMD,其可能�; 图布新图布新通啦嘎包海金色·色日道尔吉瑟·道尔吉巴图浩仁他本; 关键词：骨质疏松成骨细胞增殖

咖啡因对大鼠成骨细胞活性及DNA甲基化水平的影响: 2024年; 目的观察不同浓度咖啡因对大鼠成骨细胞活性及DNA甲基化水平的影响。方法胰酶-胶原酶消化法提取新生SD大鼠颅骨成骨细胞,碱性磷酸酶(ALP)染色和茜素红染色鉴定大鼠成骨细胞;分别以0.00、0.25、0.50、1.00、2.00 mmol/L的咖啡因处理成骨细胞48 h后,采用CCK-8法检测成骨细胞代谢活力,微量酶标法检测成骨细胞培养液中ALP活性,ELISA检测骨钙素(BGP)、5-甲基胞嘧啶(5-mC)和5-羟甲基胞嘧啶(5-hmC)的含量,Western blot检测DNA甲基化转移酶1 (DNMT1)和甲基胞嘧啶双加氧酶2 (TET2)蛋白表达的情况。结果与0.00 mmol/L咖啡因组比较,0.25 mmol/L咖啡因组大鼠成骨细胞代谢活力增加,2.00 mmol/L咖啡因组成骨细胞代谢活力降低,差异均有统计学意义(P<0.05);与0.00 mmol/L咖啡因组比较,0.50 mmol/L咖啡因组大鼠成骨细胞中ALP活性和BGP含量升高,2.00 mmol/L咖啡因组成骨细胞中ALP活性和BGP含量降低,差异均有统计学意义(P<0.05);与0.00 mmol/L咖啡因组比较,0.50 mmol/L的咖啡因组大鼠成骨细胞中DNMT1蛋白表达降低、TET2蛋白表达增加、差异均有统计学意义(P<0.05),2.00 mmol/L的咖啡因组成骨细胞中DNMT1蛋白表达增加、TET2蛋白的表达降低、差异均具有统计学意义(P<0.05);与0.00 mmol/L咖啡因组比较,0.25 mmol/L和0.50 mmol/L组大鼠成骨细胞DNA中5-mC含量降低、5-hmC含量增加、差异均有统计学意义(P<0.05),1.00 mmol/L和2.00 mmol/L组的5-mC含量增加、5-hmC含量降低、差异均有统计学意义(P<0.05)。结论低剂量咖啡因促进大鼠成骨细胞代谢活力,促进DNA羟甲基化降低整体DNA甲基化水平;高剂量咖啡因抑制大鼠成骨细胞代谢活力,抑制DNA羟甲基化,增加整体DNA甲基化水平。; 黄徐陈永福杨晶晶尹从玉潘雪莉; 关键词：咖啡因成骨细胞 DNA甲基化

生物活性玻璃对大鼠成骨细胞增殖及YAP/TAZ表达的影响: 2024年; 目的:探讨生物活性玻璃(BG)对大鼠成骨细胞增殖及Yes相关蛋白(YAP)/PDZ结合基序的转录共激活因子(TAZ)表达的影响。方法:构建高密度聚乙烯(HDPE)、羟基磷灰石(HA)+HDPE复合物和BG+HDPE复合物3种生物材料,通过扫描电子显微镜(SEM)和宽角X射线衍射观察3种材料高分子相的晶体形态和结构;3种材料紫外消毒后固定于细胞培养皿底部,将大鼠成骨细胞接种至培养皿中培养7 d,利用相差显微镜和激光共聚焦显微镜观察细胞结构,CCK-8与流式细胞仪分别检测各组细胞增殖和凋亡情况,采用Western blot检测各组成骨细胞碱性磷酸酶(ALP)、Ⅰ型胶原蛋白(COL-1)、骨桥蛋白(OPN)、Runt相关转录因子2(Runx2)、YAP和TAZ蛋白表达。结果:3种材料中HDPE基体相为典型取向结构,HA和BG分散于基体相内。3组成骨细胞为长梭状,细胞形态完整,细胞骨架连续完整无断裂无缺失,细胞核圆润立体细胞呈现有丝分裂状;BG+HDPE组成骨细胞增殖活性高于其他两组细胞(P<0.05),3组细胞凋亡率均低于5%;BG+HDPE组成骨细胞ALP、COL-1、OPN、Runx2、YAP、TAZ蛋白表达高于其他两组(P<0.05)。结论:BG可促进大鼠成骨细胞增殖,其机制可能与上调YAP/TAZ及Runx2表达有关。; 张高龙王青宁赵柏松; 关键词：生物活性玻璃成骨细胞颌骨缺损增殖

SOX5对大鼠成骨细胞增殖及核因子-κB信号通路的影响被引量：1: 2024年; 目的:探究Y-box蛋白5(SOX5)对大鼠成骨细胞(OB)增殖及核因子-κB(NF-κB)信号通路的影响。方法:取新生24 h SPF级SD乳鼠,应用酶消化法分离大鼠颅骨OB。形态学观察和ALP染色鉴定成骨细胞;取生长良好的第4代OB,分为空白对照组、pcDNA3.1组、pcDNA-SOX5组、si-NC组、siRNA-SOX5组。转染48 h后qRT-PCR检测细胞中SOX5 mRNA的表达;MTT法检测细胞增殖活力;ALP活性检测试剂盒测量ALP活性;茜素红染色观察钙结节的形成情况;Western blotting检测OB分化及NF-κB信号通路相关蛋白Runt相关转录因子2(Runx2)、Ⅰ型胶原蛋白(CollagenⅠ)、NF-κB p65及其磷酸化蛋白、KB抑制蛋白激酶α(IκBα)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)的表达。结果:与空白对照组相比,pcDNA-SOX5组大鼠OB中SOX5 mRNA水平、p-NF-κB p65/NF-κB p65、TNF-α蛋白表达显著升高(P<0.05),OB增殖活力、ALP活性、钙化结节数量和面积、Runx2、CollagenⅠ、IκBα表达显著降低(P<0.05);siRNA-SOX5组大鼠OB中SOX5 mRNA水平、p-NF-κB p65/NF-κB p65、TNF-α蛋白表达明显降低(P<0.05),OB增殖活力、ALP活性、钙化结节数量和面积、Runx2、CollagenⅠ、IκBα表达明显升高(P<0.05)。结论:SOX5具有调控OB增殖、分化的作用,其作用机制可能与调控NF-κB信号通路有关。; 冷冬月李旭峰方兴刚; 关键词：骨质疏松成骨细胞核因子-ΚB

CGF复合Bio-Oss骨粉对牙槽骨缺损大鼠成骨细胞凋亡、牙槽骨微观形态及BMP2/4的影响: 2024年; 目的:探究浓缩生长因子(concentrated growth factors, CGF)联合Bio-Oss骨粉对牙槽骨缺损大鼠成骨细胞凋亡、牙槽骨微观形态及骨形态发生蛋白(bone morphogenetic protein, BMP)2/4的影响。方法:选取50只SPF级SD雄性大鼠,随机分为正常(NO)组,模型(MO)组,CGF(CF)组,Bio-Oss骨粉(BS)组,CGF联合Bio-Oss骨粉(CB)组,每组10只,MO组、CF组、BS组以及CB组进行牙槽骨缺损建模。建模成功后,CF组给予CGF治疗,BS组进行Bio-Oss骨粉治疗,CB组给予CGF联合Bio-Oss骨粉,NO组、MO组不予治疗,取上颌骨组织进行HE染色及Micro-CT检测,TUNEL法检测成骨细胞凋亡,免疫印记法检测BMP2/4相关蛋白表达。结果:NO组上颌骨表面光滑无缺损,MO组上颌骨可见明显缺损,新生骨仅有少量再生,与MO组比较,CF组、BS组、CB组上颌骨缺损明显减轻,可见新生骨逐渐覆盖缺损区,其中CB组修复效果最佳。与NO组相比,MO组骨小梁数量、骨小梁体积降低,骨小梁分离度升高(P<0.05);与MO组相比,CF组、BS组、CB组骨小梁数量、骨小梁体积升高,骨小梁分离度降低(P<0.05),且BS组、CF组比较无明显差异(P>0.05),CB组比BS组变化明显(P<0.05)。NO组上颌骨组织结构正常,表面光滑,未见明显骨吸收及新骨生成,MO组上颌骨组织纤维排列不规则,骨吸收明显,可见大量胶原纤维增生及少量新骨生成;与MO组比较,CF组、BS组、CB组骨吸收明显减少,新骨生成明显增多;与NO组比较,MO组成骨细胞凋亡率升高(P<0.05);与MO组比较,CF组、BS组、CB组成骨细胞凋亡率降低(P<0.05),且BS组、CF组比较无明显差异(P>0.05),CB组比BS组降低明显(P<0.05)。与NO组相比,MO组上颌骨组织BMP2、BMP4蛋白表达降低(P<0.05);与MO组相比,CF组、BS组、CB组上颌骨组织BMP2、BMP4蛋白表达升高(P<0.05),且BS组、CF组比较无明显差异(P>0.05),CB组比BS组升高明显(P<0.05)。结论:CGF联合Bio-Oss骨粉对牙槽骨缺损大鼠具有显著疗效,可有效改善成骨细胞�; 周辰李哲尹婷季佳; 关键词：BIO-OSS骨粉牙槽骨缺损成骨细胞凋亡

维生素C制备大鼠成骨细胞膜片及其活性评估: 2024年; 目的:大鼠成骨细胞膜片的体外构建,通过形态学检测及增殖活性检测,评估其活性。方法:原代培养大鼠成骨细胞,纯化鉴定后体外构建成骨细胞膜片,用扫描电镜观察、组织学形态学检查,并测定厚度变化及细胞增殖情况。结果:经过5d培养的成骨细胞连接成片,刮刀可刮下。HE染色见丰富的细胞外基质。扫描电镜观察到细胞层间有间隙孔。与正常培养的成骨细胞相比,细胞膜片第1周至第2周增殖迅速,第2周增殖活力最高。随着培养时间的延长,厚度增加,厚度在1周至2周显著增加,对照组直到3周才形成膜片,且厚度低于维生素C组。结论:维生素C促成骨细胞增殖形成细胞膜片,本方法可以稳定体外构建成骨细胞膜片,2周内膜片厚度增加显著并且增殖活力较好。; 杨红董强夏茜周建奖; 关键词：骨组织工程维生素C

酒花提取物调控OPG/RANKL信号通路对大鼠成骨细胞增殖作用的影响被引量：1: 2023年; 目的探讨酒花提取物调控OPG/RANKL信号通路对大鼠成骨细胞增殖作用的影响。方法采用Ⅱ型胶原酶消化法提取新生SD大鼠颅骨成骨细胞,并采用ALP染色、HE染色、茜素红染色分别对大鼠成骨细胞进行鉴定。将大鼠成骨细胞分为空白对照组、阳性对照组(1×10^(-6)mol·L^(-1)雌激素)及酒花提取物低、中、高剂量组(10、20、40μg·mL^(-1)),干预24 h。采用CCK-8法检测大鼠成骨细胞的增殖情况;采用RT-PCR及Western Blot法检测成骨细胞NF-κB受体活化因子配体(RANKL)、骨保护素(OPG)的mRNA及蛋白表达水平。结果培养的细胞符合成骨细胞的典型特征,细胞纯度较高,可用于后续实验。与空白对照组比较,阳性对照组和酒花提取物各剂量组的大鼠成骨细胞增殖率显著升高(P<0.01);阳性对照组和酒花提取物中剂量组大鼠成骨细胞OPG mRNA表达显著上调(P<0.01);阳性对照组和酒花提取物各剂量组大鼠成骨细胞RANKL mRNA表达明显下调(P<0.05,P<0.01),OPG蛋白表达显著上调(P<0.01),RANKL蛋白表达显著下调(P<0.01),mRNA及蛋白表达的OPG/RANKL比值均显著升高(P<0.05,P<0.01)。结论酒花提取物可以促进大鼠成骨细胞的增殖活性,可能与调控OPG/RANKL信号通路有关。; 李敏扎克艳·地力夏提胡君萍杨建华; 关键词：大鼠成骨细胞

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